本发明属于化学制药技术领域，具体地，本发明涉及一种治疗非小细胞肺癌和恶性胸膜间皮瘤的培美曲塞制备方法；更具体地，本发明涉及一种高效洁净的制备N-{4-{2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-3H-吡咯并(2,3-d)嘧啶-5-基)乙基}苯甲酰基}-L-谷氨酸(I)的新方法。
背景技术：
培美曲塞(Anagrelide AG)是一类以嘧啶并吡咯为母板的抗叶酸小分子化学药物，该药通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制癌细胞的复制，从而控制肿瘤的生长。其主要的作用靶点是胸苷酸合成酶(TS)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、甘氨酰胺核苷酸转甲酰酶(GARFT)，通过对这些关键酶的抑制影响嘌呤和嘧啶的合成，进而抑制DNA合成。临床研究证明培美曲塞单药可以对非小细胞肺癌、恶性胸膜间皮瘤、头颈部肿瘤、胃癌、膀胱癌、宫颈癌以及胰腺癌等肿瘤有治疗效果，具有抗瘤谱广，效果显著，副作用小等优点。美国礼来公司开发的培美曲塞二钠，于2004年获得FDA批准并在美国上市，用于治疗恶性胸膜间皮瘤以及非小细胞肺癌。培美曲塞的结构式如下：
根据已文献报道，制备培美曲塞(I)的合成路线有如以下：
线路一：林栋等人发表的专利CN101293854B中以4-碘苯甲酸为起始原料，通过酰氯化，酰胺化，Heck偶联反应，醛基保护，水解，卤代，成环共七步合成目标产物培美曲塞。该合成路线起始原料简单，但是操作步骤繁琐，并使用污染性较大的二氯亚砜作反应试剂和溶剂，并使用氯化钯或醋酸钯等重金属催化剂，路线较长，大大降低总收率，路线如下：
线路二：Taylar等发表的专利US6066732报道了以4-碘苯甲酸乙酯和丙烯醇为起始原料，通过Heck偶联反应，Henry反应，消去反应，加成反应以及Nef反应关环和水解，得到培美酸，该路线总收率只有32.9％，并且制备培美曲塞还需要进一步酰胺和水解反应。
线路三：巴列特等发表的专利CN1271338中，报道了采用培美酸(Pemetrexed acid)为原料，与谷氨酸二乙酯缩合制备培美曲塞酯，然后再水解，得到培美曲塞的制备方法，该路线比较简单，但是培美酸难以获得。该路线步骤如下：
路线四：郭志雄等在《有机化学》(2006,26(4):546-550)发表了以简单的苯作为原料，通过和马来酸酐进行傅克酰基化反应，制备3-苯甲酰基丙酸，然后经还原，酯化，二次傅克反应，二次还原，氧化，溴化，环化，水解等一系列反应合成培美曲塞中间体培美酸，该路线原料简单，但是采用危险性较大的氢化铝锂作为还原剂，路线较长，总体收率较低，不利于工业化生产。
综上文献所述，目前关于制备培美曲塞的工艺路线具有多方面的不足之处，因此，需要研究一种既可以降低生产成本，提供收率和纯度，环境友好的工艺路线，解决培美曲塞工艺问题。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种新型的培美曲塞制备方法。
本发明第一方面提供了一种制备N-{4-{2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-3H-吡咯并(2,3-d)嘧啶-5-基)乙基}苯甲酰基}-L-谷氨酸(I)的方法，包括步骤：
(1)化合物(IV)的制备：
将化合物(II)和化合物(III)混合均匀，无溶剂条件下通过研磨进行反应，从而形成化合物(IV)；
(2)化合物(VI)的制备
将化合物(IV)和化合物(V)混合均匀，无溶剂条件下通过研磨进行反应，从而形成化合物(VI)；
(3)化合物(I)的制备：
在惰性溶剂中，在催化剂存在下，将化合物(VI)进行环合和水解反应，从而形成培美曲塞(I)。
在另一优选例中，步骤(1)中，所述反应的温度为0～80℃；优选为10～50℃。
在另一优选例中，步骤(2)中，所述反应的温度为0～80℃，优选为10～50℃。
在另一优选例中，步骤(3)中，所述的惰性试剂选自下组：水，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，异丙醇，二氯甲烷，四氢呋喃，甲苯，二甲苯，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3)中，所述反应的温度为-20～80℃。
在另一优选例中，步骤(3)中，所述反应的温度为-20～60℃，优选为-10～50℃。
在另一优选例中，所述步骤(3)包括步骤：
(3-1)在惰性溶剂中，在碱催化剂存在下，将化合物(VI)进行第一次反应，从而形成一反应混合物；
(3-2)在酸催化剂存在下，将上述步骤得到的反应混合物进行第二次反应，从而形成培美曲塞(I)。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的碱催化剂选自下组：碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸钙，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钙，氢氧化锂，甲醇钠，乙醇钠，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应在30～55℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应在40～45℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应进行1-4小时；优选1-3小时。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，在第一次反应结束后，还包括将反应混合物用硅胶过滤。
在另一优选例中，所述硅胶为100-200目的。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的酸催化剂选自下组：硫酸，盐酸，硝酸，醋酸，甲酸，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应在-10～15℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应在0～5℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应进行0.5-4小时；优选0.5-2小时。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，意外发现一种新型的培美曲塞制备方法。该路线具有操作简单，生产成本低，环境友好，总收率高和纯度高等优点，适合工业化生产。在此基础上，发明人完成了本发明。
制备方法
本发明提供了一种培美曲塞的新的制备方法，
包括步骤：
(1)化合物(IV)的制备：
将化合物(II)和化合物(III)混合均匀，无溶剂条件下通过研磨进行反应，从而形成化合物(IV)；
在另一优选例中，步骤(1)中，所述反应的温度为0～80℃；优选为10～50℃。
在另一优选例中，步骤(1)中，反应结束后，将得到的反应混合物进行如下处理：首先将反应混合物溶于有机溶剂中，并用选自下组的液体洗涤：水，饱和食盐水，或其组合；然后将有机相浓缩、干燥。
(2)化合物(VI)的制备
将化合物(IV)和化合物(V)混合均匀，无溶剂条件下通过研磨进行反应，从而形成化合物(VI)；
在另一优选例中，步骤(2)中，所述反应的温度为0～80℃，优选为10～50℃。
在另一优选例中，步骤(2)中，反应结束后，将得到的反应混合物进行如下处理：首先将反应混合物溶于有机溶剂中，并用选自下组的液体洗涤：水，饱和食盐水，饱和碳酸钠溶液，或其组合；然后将有机相浓缩、干燥。
(3)化合物(I)的制备：
在惰性溶剂中，在催化剂存在下，将化合物(VI)进行环合和水解反应，从而形成化合物(I)(即培美曲塞)。
在另一优选例中，步骤(3)中，所述的惰性试剂选自下组：水，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，异丙醇，二氯甲烷，四氢呋喃，甲苯，二甲苯，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3)中，所述反应的温度为-20～80℃。
在另一优选例中，步骤(3)中，所述反应的温度为-20～60℃，优选为-10～50℃。
在另一优选例中，所述步骤(3)包括步骤：
(3-1)在惰性溶剂中，在碱催化剂存在下，将化合物(VI)进行第一次反应，从而形成一反应混合物；
(3-2)在酸催化剂存在下，将上述步骤得到的反应混合物进行第二次反应，从而形成化合物(I)。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的惰性试剂选自下组：水，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，异丙醇，二氯甲烷，四氢呋喃，甲苯，二甲苯，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的碱催化剂选自下组：碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸钙，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钙，氢氧化锂，甲醇钠，乙醇钠，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应在30～55℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应在40～45℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应进行1-4小时。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，所述的第一次反应进行1-3小时。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，在第一次反应结束后，还包括将反应混合物用硅胶过滤。
在另一优选例中，步骤(3-1)中，在第一次反应结束后，在反应混合物中加入硅胶搅拌后，过滤。
在另一优选例中，所述搅拌进行10-20分钟，优选15分钟。
在另一优选例中，所述硅胶为100-200目的。
步骤(3-1)中，通过控制温度、用硅胶处理等有助于提高最终产品的收率和纯度，并有助于简化产品的后处理步骤。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的酸催化剂选自下组：硫酸，盐酸，硝酸，醋酸，甲酸，或其组合。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应在-10～15℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应在0～5℃下进行。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应进行0.5-4小时。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，所述的第二次反应进行0.5-2小时。
在另一优选例中，步骤(3-2)中，在第二次反应结束后，包括将所得到的反应混合物用碱(如碱性水溶液，例如氢氧化钾的水溶液等)调节PH至7～8，然后用酸(如酸性溶液，例如稀盐酸等)调节析出沉淀产品。这一步骤技术人员也可以根据本领域常规操作进行。
步骤(3-2)中，通过控制温度等有助于提高最终产品的收率和纯度，并有助于简化产品的后处理步骤。
在所述方法中，还可以在步骤(3)或(3-2)之后将化合物(I)用丙酮进行重结晶。
与以往文献报道的合成方法相比较，本发明的方法主要具有以下优点：
本发明的方法操作极其简单(前两部仅需研磨即可)，成本低，收率高，反应条件温和以及合成的目标产物纯度高等优点，因此适合工业化生产。
下面结合具体实施，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。本发明实施例中所用原料或仪器，若非特别说明，均市售可得。
实施例1：
(1)、化合物(IV)的制备
于室温下，将化合物(II)(13.0g，34.4mmol)和化合物(III)(4.28g，37.84mmol)置于玛瑙研钵中，充分混匀，研磨10min，取样，TLC检测，反应完成。将产品溶于乙酸乙酯中，依次通过水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得产品化合物(IV)(15.72g，93％)。
1HNMR(400MHz，CDC13):δ7.99-8.09(m,2H),7.01-7.09(m,2H),4.48-4.54(m,3H),4.03-4.18(m,2H),3.63-3.70(m,6H),3.21-3.31(m,1H),2.63-2.68(m,2H),2.28-2.36(m,5H),1.55-1.65(m,2H),1.23-1.29(m,3H)；C23H29N3O9(M+H)+Calcd:491.4911,found:491.4928。
(2)、化合物(VI)的制备
于室温下，将化合物(IV)(14.6g，29.67mmol)和化合物(V)(1.93g，32.64mmol)置于玛瑙研钵中，充分混匀，研磨10min，取样，TLC检测，反应完成。将产品溶于乙酸乙酯中，依次通过饱和碳酸钠溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得产品化合物(VI)(14.37g，96％)。
(3)、化合物(I)的制备
于室温下，将化合物(VI)(10.0g，19.82mmol)和2N氢氧化钠水溶液(20ml)，于40～45℃搅拌反应2小时，然后加入0.3g硅胶(100～200目)，搅拌15分钟后过滤。将滤液置于冰水浴中降至0～5℃，并在这个温度下滴加0℃的8N硫酸溶液(10ml)，滴加完毕后并在该温度下搅拌1小时。0～5℃下用1N氢氧化钾溶液调PH＝7～8，再滴加稀盐酸沉淀产品，过滤，将所得的固体用丙酮重结晶得到类白色固体，为化合物(I)(7.37g，87％，纯度：99.87％)。
实施例2：
(1)、化合物(IV)的制备
于室温下，将化合物(II)(13.0g，34.4mmol)和化合物(III)(3.88g，34.4mmol)置于玛瑙研钵中，充分混匀，研磨10min，取样，TLC检测，反应完成。将产品溶于乙酸乙酯中，依次通过水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得产品化合物(IV)(15.05g，89％)。
1HNMR(400MHz，CDC13):δ7.99-8.09(m,2H),7.01-7.09(m,2H),4.48-4.54(m,3H),4.03-4.18(m,2H),3.63-3.70(m,6H),3.21-3.31(m,1H),2.63-2.68(m,2H),2.28-2.36(m,5H),1.55-1.65(m,2H),1.23-1.29(m,3H)；C23H29N3O9(M+H)+Calcd:491.4911,found:491.4928。
(2)、化合物(VI)的制备
于室温下，将化合物(IV)(14.6g，29.67mmol)和化合物(V)(1.93g，32.64mmol)置于玛瑙研钵中，充分混匀，研磨10min，取样，TLC检测，反应完成。将产品溶于乙酸乙酯中，依次通过饱和碳酸钠溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得产品化合物(VI)(14.22g，95％)。
(3)、化合物(I)的制备
于室温下，将化合物(VI)(10.0g，19.82mmol)和2N氢氧化钾水溶液(20ml)，于40～45℃搅拌反应2小时，然后加入0.3g硅胶(100～200目)，搅拌15分钟后过滤。将滤液置于冰水浴中降至0～5℃，并在这个温度下滴加0℃的8N硫酸溶液(10ml)，滴加完毕后并在该温度下搅拌1小时。0～5℃下用1N氢氧化钾溶液调PH＝7～8，再滴加稀盐酸沉淀产品，过滤，将所得的固体用丙酮重结晶得到浅灰色固体，为化合物(I)(8.13g，96％，纯度：99.68％)。
实施例3：
(1)、化合物(IV)的制备
于室温下，将化合物(II)(13.0g，34.4mmol)和化合物(III)(4.28g，37.84mmol)置于玛瑙研钵中，充分混匀，研磨10min，取样，TLC检测，反应完成。将产品溶于乙酸乙酯中，依次通过水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得产品化合物(IV)(15.89g，94％)。
1HNMR(400MHz，CDC13):δ7.99-8.09(m,2H),7.01-7.09(m,2H),4.48-4.54(m,3H),4.03-4.18(m,2H),3.63-3.70(m,6H),3.21-3.31(m,1H),2.63-2.68(m,2H),2.28-2.36(m,5H),1.55-1.65(m,2H),1.23-1.29(m,3H)；C23H29N3O9(M+H)+Calcd:491.4911,found:491.4928。
(2)、化合物(VI)的制备
于室温下，将化合物(IV)(14.6g，29.67mmol)和化合物(V)(1.75g，29.67mmol)置于玛瑙研钵中，充分混匀，研磨10min，取样，TLC检测，反应完成。将产品溶于乙酸乙酯中，依次通过饱和碳酸钠溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得产品化合物(VI)(13.62g，91％)。
(3)、化合物(I)的制备
于室温下，将化合物(VI)(10.0g，19.82mmol)和2N氢氧化钾水溶液(15ml)，于40～45℃搅拌反应2小时，然后加入0.3g硅胶(100～200目)，搅拌15分钟后过滤。将滤液置于冰水浴中降至0～5℃，并在这个温度下滴加0℃的8N硫酸溶液(8.75ml)，滴加完毕后并在该温度下搅拌1小时。0～5℃下用1N氢氧化钾溶液调PH＝7～8，再滴加稀盐酸沉淀产品，过滤，将所得的固体用丙酮重结晶得到浅灰色固体，为化合物(I)(7.88g，93％，纯度：99.83％)。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。