尼罗罗非鱼Ly75基因克隆、原核表达与抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体的制备方法与流程

文档序号:12411912阅读:来源:国知局

技术特征:

1.尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在于尼罗罗非鱼OnLy75基因全长序列,该序列为序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在于OnLy75的编码序列位于序列表SEQ ID NO.1的5’端第88~5286位脱氧核苷酸,编码1732个氨基酸,氨基酸序列的序列表SEQ ID NO.2所示氨基酸序列构成的蛋白质。

3.根据权利要求2所述尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在编码基因重组蛋白的多肽的氨基酸序列由SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列,该序列处于SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的第1281—1677位。

4.根据权利要求1所述尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在于构建用于表达罗非鱼OnLy75蛋白的大肠杆菌重组表达载体所涉及核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

5.根据权利要求2所述尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在于罗非鱼OnLy75重组蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列,该多肽的氨基酸序列处于SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的第1281—1677位。

6.根据权利要求3所述尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在于多肽的编码序列为下列之一

1)编码序列的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1的5’端第3928~5120位脱氧核苷酸;

2)编码序列表中SEQ ID NO.4氨基酸序列的核苷酸;

3)编码序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的第1281~1677位氨基酸序列的核苷酸。

7.根据权利要求1所述尼罗罗非鱼Ly75基因克隆,其特征在于用于免疫的组合物含有权利要求3—6中任一项所述的分离的多肽。

8.原核表达与抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体的制备方法,其特征在于所述方法包括使用权利要求3—6中任一项所述的分离的多肽或权利要求7中任一项所述的组合物免疫哺乳动物。

9.根据权利要求8所述原核表达与抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体的制备方法,其特征在于所述方法包括:

1)构建含有所述多肽的原核表达载体;

2)使用该表达载体转化大肠杆菌;

3)诱导重组蛋白表达,纯化所述多肽;

4)使用所述多肽或含有所述多肽的组合物免疫哺乳动物;

5)从所述哺乳动物血清中纯化抗体,从而制得所述抗体。

10.抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体的制备方法的用途,其特征是采用权利要求8—9中任一项权利要求所述的方法制备得到的抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体。

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