一种制备长春西汀的方法与流程

本发明涉及一种制备化合物的方法，具体涉及一种制备长春西汀的方法。

背景技术：

长春西汀(Vinpocetine，商品名为长春乙酯，康维脑)，亦称做卡兰Calan)，是从长春花(Vincamajor、Vincaminor，常见的类似藤本的长绿地被植物，分布于中南欧等地区，作为药用植物已有近2000年的应用历史，民间用于振作精神、恢复疲劳，特别是衰老有关的同类症状，也用作收敛剂等)中得到的一种吲哚生物碱类天然药物。

长春西汀的结构式如下：

长春西汀能够选择性地改善大脑的血液循环，促进大脑的能量代谢，调节神经递质系统功能，多方面保护大脑免受缺血缺氧性损害，特别适用于防止脑供血不足、中风以及与衰老有关的症状，并对认知和记忆有特别的效果。广泛用于缺血性脑血管疾病的治疗和预防，为脑循环代谢改善剂。长春西汀在临床治疗脑血管疾病有较好的疗效，具有独特的药理作用，近年来，引起国内外有关专家的重视，并对其合成路线，制备工艺进行了广泛的研究。

长春西汀的合成方法大致分为两种：一种方法是以吲哚衍生物以及吲哚类生物碱为起始原料的化学全合成方法，路线一到路线五列举了几种先有技术中全合成长春西汀的路线，另一种方法是从长春胺植物中所提取的长春胺为原料的半合成方法，路线六和路线七列举了从长春胺合成长春西汀的路线。对比两种方法，半合成方法路线短、收率高、工艺简单成熟、成本低。因而国内外生产长春西汀多采取半合成方法。

路线一^[1](期刊Tetrahedron Vol 39,No.22,pp 3737 to 3747,1983)

路线二^[2](期刊Liebigs Ann.Chem.1993,221-229)

路线三^[3](美国专利US 4316028)

路线四^[4](美国专利US 4316029)

路线五^[5](期刊，Arch.pharm.(Weinheim)316，1983，629-638)

路线六^[6](德国专利DE 10311850A1)

路线七^[7](期刊Synthetic Communications,24(6),759-766(1994))

从上述路线中可以看出，以吲哚类以及吲哚类生物碱为起始原料的全合成路线比较长，操作繁琐，不适用于大生产。在以长春胺为起始原料的半合成路线中，有的路线虽然较短，但基本上也各有异同。有以长春胺为起始原料先水解、脱水、酯化再重结晶的；有以长春胺为起始原料先脱水、水解、酯化再重结晶得的；也有以长春胺为起始原料，先水解、酯化、脱水再重结晶的，各不相同。有的在脱水过程中需要用到苯或氯苯，有的需要用到浓硫酸，这些都给三废处理和溶剂残留带来不利影响，因而不适合工业化大生产。也有以长春胺酸(长春胺的水解产物)为起始原料的合成方法，但通常会使用到浓硫酸、有机磺酸、二氨基吡啶等，容易造成环境污染；以长春胺酸为起始原料的合成方法中，有一种采用磺酸型阳离子或苯乙烯型阴离子交换树脂进行酯化脱水并酯化得到目标产物的方法，此法产生三废相对较少，路线简短，但是也会使用到浓硫酸。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种制备长春西汀的方法，该方法制备的长春西汀收率高，纯度高。

为了实现本发明，本发明所采用的技术方案如下：

一种制备长春西汀的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备长春西汀粗品：

A)取原料阿朴长春胺的乙醇溶液，与乙醇钠的乙醇溶液混合，乙醇钠与原料阿朴长春胺的摩尔比为0.135～0.137：1，进行回流反应，至体系中阿朴长春胺剩余量少于原料阿朴长春胺的3％时，除去全部溶剂得反应中间料A；

B)将反应中间料A制成乙醇溶液，与乙醇钠的乙醇溶液混合，乙醇钠与所述的阿朴长春胺的摩尔比为0.033～0.035：1，进行回流反应，至体系中阿朴长春胺剩余量少于加入原料阿朴长春胺的0.3％时，热过滤，除去滤液中部分溶剂至有固体析出，冷却结晶，固液分离，洗涤，干燥，即得长春西汀粗品；

2)精制长春西汀：

将长春西汀粗品依次用水、乙醇洗涤后，加入无水乙醇制成溶液，加入活性炭进行回流，热过滤，滤液除去部分溶剂至有固体析出，冷却结晶，固液分离，洗涤，干燥，即得精制长春西汀。

所述的原料阿朴长春胺的纯度不低于97.5％。

所述的乙醇钠乙醇溶液的浓度为0.5～2.0mol/L。优选的乙醇钠乙醇溶液的浓度为1.0mol/L。

所述的阿朴长春胺乙醇溶液的浓度为每215g溶于2300～3000mL乙醇中。

所述阿朴长春胺加入乙醇中溶清制成溶液。

所述的制备长春西汀粗品过程中把乙醇钠的乙醇溶液滴加到阿朴长春胺乙醇溶液中进行混合。

选用乙醇作为溶剂，乙醇溶剂大大过量，有利于酯交换反应的进行，同时选用乙醇钠的乙醇溶液作为催化剂，促使乙醇钠催化剂能够快速均匀分散到溶液中，催化酯交换反应，随着反应的进行，乙醇钠的催化活性降低，除去溶剂后再次加入乙醇钠乙醇溶液反应，可以使反应原料充分的转化，提高反应最终的收率。

所述的制备长春西汀粗品步骤A)和步骤B)中判断阿朴长春胺剩余量所用方法为高效液相色谱，色谱条件设置如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论踏板数至少为3000，以0.2mol/L醋酸铵缓冲液溶液-乙腈为流动相，醋酸铵缓冲液溶液与乙腈的体积比45：55，为检测波长280nm。

所述的醋酸铵缓冲溶液配制方法为：把15.4g醋酸铵溶于950mL水中，加入冰醋酸调节pH为6，补加水至1000mL，过0.45μL滤膜，即得pH为6的0.2mol/L的醋酸铵缓冲溶液。

所述的十八烷基硅烷键合硅胶的规格为4.6x150mm；5μm。

所述精制长春西汀过程中，粗品长春西汀的质量在一些实施例中没有测定，因此用原料阿朴长春胺的用量来限制活性炭的用量，所用活性炭的量为每2800g原料阿朴长春胺加入90～150g活性炭。

精制长春西汀过程选用乙醇作为重结晶的溶剂，主要是因为长春西汀微溶于甲醇、乙醚，不溶于水，溶于氯仿、二氯甲烷等。实验过程中发现该化合物在冷的乙醇中溶解度很小，而在热的乙醇中溶解度较大。甲醇、氯仿和二氯甲烷为二类溶剂，应该药物合成中应该尽量限制使用。与乙醇类似，乙醚尽管亦为三类溶剂，但是具有强麻醉性、强挥发性及易燃性，也不宜选用。实验结果中还发现，长春西汀粗品当中的主要杂质都可以被冷的乙醇溶解，从溶剂的角度来讲，用乙醇作溶剂来精制提纯长春西汀是合适的。另外，用乙醇重结晶的方法精制长春西汀时，产品损失少并且乙醇可以溶解长春西汀粗品中的大部分杂质，例如，阿朴长春胺酸，长春胺酸乙酯，甲氧基长春西汀，二氢长春西汀杂质，单次精制，产品纯度可以提高0.5％左右，精制效果非常理想。

所述原料阿朴长春胺是由以下方法制备的：在0-5℃条件下，原料长春胺与二氯亚砜在N-甲基吡咯烷酮溶剂中反应，原料长春胺与二氯亚砜的摩尔比为1.55～1.65：1，反应至体系中剩余长春胺少于加入原料长春胺的1％后，加水淬灭反应，用氨水调节pH至7～8，析出固体，固液分离，洗涤、干燥，即得阿朴长春胺。

制备阿朴长春胺过程中，加入二氯亚砜的过程中是放热反应，加入过程中控制体系温度不超过20℃。

制备阿朴长春胺过程中，淬灭反应过程中，过量的二氯亚砜与加入的水剧烈反应，需要控制温度不超过30℃。

制备阿朴长春胺过程中，用氨水调节pH过程中，氨水与体系中的副产物盐酸反应，需要控制体系温度不超过15℃。

所述加水淬灭所用水的量为每克原料长春胺需要加入2mL水。

所述的原料长春胺从小蔓长春花提取，具体提取过程为：取干燥小蔓长春花干燥，粉碎过筛，得小蔓长春花粉末，用甲醇浸提，除去甲醇，得膏状提取物A；向膏状提取物A中加入稀盐酸至提取物溶解，过滤得滤液，用氨水调节滤液pH为8～9，二氯甲烷萃取，除去溶剂得粗品长春胺；粗品长春胺用甲醇重结晶即得长春胺。

所述过筛的孔径为40目。

所述加入稀盐酸的体积分数优选为2％。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

1、本发明制备长春西汀的方法不仅适合实验室克级的制备，也适合工业级规模千克级的制备。

2、本发明制备长春西汀过程中工业三废容易处理。本发明制备长春西汀过程中没有用到浓硫酸，氯苯等毒性较大、难以处理的试剂，主要涉及的有机溶剂为N-甲基吡咯烷酮(NMP)和无水乙醇。NMP溶解在大量水中，可以通过沉降、过滤、粗馏和精馏的方法回收处理。无水乙醇则完全可以通过蒸馏的方法充分回收。辅助试剂为二氯亚砜，经水分解后可碱中和后达标排放。在反应后处理过程中，有少量的氨气溢出，通过引风和导流装置，用稀盐酸或稀硫酸吸收即可。

3、本发明制备的长春西汀溶剂残留少，杂质含量少，长春西汀纯度高，结果重现型好，其纯度为99.4～99.8％。

附图说明

图1为小蔓长春花提取长春胺工艺流程图；

图2为制备阿朴长春胺工艺流程图；

图3为制备长春西汀及精制长春西汀工艺流程图。

具体实施方式

1.1、本发明实施例所用试剂

本发明所用试剂及来源如表1所示。

表1试剂及其来源

1.2、本发明实施例所用溶剂配制方法如下：

1.2.1、配制1.0mol/L乙醇钠乙醇溶液

选用3L干燥洁净的三口烧瓶中安装好冷凝回流管和干燥管，外置水浴冷却，加入2L无水乙醇，开启搅拌。取出金属钠块，擦净，切除黄色氧化层，称取46g，剪切成钠丝，加至上述备好的乙醇中。当钠丝消失，乙醇钠乙醇溶液冷至常温后，迅速转入棕色试剂瓶中密封保存，即为1mol/L乙醇钠乙醇溶液

以同样的方法配制所需的0.5～2.0mol/L的乙醇钠乙醇溶液。

1.2.2、配制pH＝6.0的0.2mol/L醋酸铵缓冲溶液：

把15.4g醋酸铵溶于950mL水中，加入冰醋酸调节pH为6，补加水至1000mL，过0.45μL滤膜，即得。

1.3、提取长春胺

1.3.1、提取长春胺工艺流程图

提取长春胺工艺流程图如图1所示。

1.3.2、提取长春胺工艺流程

取干燥过的小蔓长春花10Kg，粉碎，过40目筛，得小蔓长春花粉，将其置于500L提取器内，加200L甲醇充分浸提，减压回收甲醇后，过滤，得到膏状提取物。在该提取物中加2％稀盐酸15L，充分搅拌，提取物溶解，再过滤去除不溶性杂质，收集滤液，用氨水调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取2～3次，萃取剂用量为80～120L，合并二氯甲烷，在40℃下除去二氯甲烷，再得膏状物，即为粗品长春胺。将粗品长春胺加入50L甲醇中，搅拌，升温至回流，冷却至常温，析出结晶，过滤，甲醇充分淋洗，收集滤饼，干燥，即得长春胺。

1.3.3、长春胺的理化性质

长春胺理化性质及稳定性：黄色结晶；熔点232～233℃；旋光度+41°(吡啶)；小鼠静脉注射LD₅₀75mg/kg；是由夹竹桃科植物蔓长春花(Vinca major)、小蔓长春花(V.minor)、直立长春花(V.erecta)、异形蔓长春花(V.dilormis)分离的生物碱。临床用作血管舒张药，适用于脑血管障碍、脑栓塞、脑血栓形成及出血后遗症等。常温下储存稳定。

1.3.4、长春胺质控标准

成品长春胺按照下列主要指标进行质控：

有关物质(HPLC)：不高于1.0％；

含量(高氯酸滴定法)：98.5-101.5％；

二氯甲烷：残留量不高于600ppm；

甲醇：残留量不高于3000ppm。

1.4、制备阿朴长春胺

1.4.1制备阿朴长春胺工艺流程图

制备阿朴长春胺工艺流程图如图2所示。

1.4.2制备阿朴长春胺条件筛选

在0-5℃条件下，原料长春胺与二氯亚砜在N-甲基吡咯烷酮溶剂中反应，反应过程中监测体系中剩余长春胺少于加入原料长春胺的量，加水淬灭反应，用氨水调节pH，析出固体，固液分离，洗涤、干燥，即得阿朴长春胺。

表2制备阿朴长春西汀条件筛选

从表2可以看出，制备阿朴长春胺的优选条件为氯化亚砜与长春胺的摩尔比为1.55～1.65：1，其纯度为93.3～95.0％。用氨水调节pH，优选的pH为7～8。加入水淬灭反应的优选条件为每克长春胺需要2mL纯化水。

1.5、制备长春西汀

1.5.1制备长春西汀工艺流程图

制备长春西汀工艺流程图如图3所示，包括制备长春西汀粗品和精制长春西汀。

1.5.2制备长春西汀粗品条件筛选

将阿朴长春胺的乙醇溶液，与乙醇钠的乙醇溶液混合，进行回流反应，用液相色谱监测反应体系中阿朴长春胺的量，当阿朴长春胺残留量不在减少时反应结束，热过滤，除去滤液中部分溶剂至有固体析出，冷却结晶，固液分离，洗涤，干燥，即得长春西汀粗品。

表3制备长春西汀粗品条件筛选

从表3可以看出，优选的催化剂为乙醇钠。更进一步的优选方案催化剂为乙醇钠的乙醇溶液。进一步的优选方案为乙醇钠的用量与阿朴长春胺的摩尔比为0.17：1。更进一步的优选方案为乙醇钠的乙醇溶液分两次加入。更进一步的优选方案为乙醇钠的乙醇溶液在阿朴长春胺的乙醇溶液在回流条件下加入。

最优的条件为乙醇钠乙醇溶液分两次加入回流的阿朴长春胺溶液，乙醇钠与阿朴长春胺的摩尔比为0.17：1。

实施例1

本实施以长春胺为原料，首先制备阿朴长春胺，再以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1)制备阿朴长春胺

在50mL干燥洁净的单口烧瓶中投入NMP 15mL和长春胺5g，搅拌5-10分钟得到均匀的混合物，外置冰水浴降温至0-5℃，滴加二氯亚砜1.62mL，控制内温不超过20℃，半小时滴加完毕。撤去冰浴，约30min升温至常温(RT，20-25℃)，搅拌反应30min。用HPLC监测反应，原料长春胺剩余量小于1％时结束反应。再降温至0-5℃，滴加纯化水10mL，控制内温不超过30℃，20分钟滴完，加完纯化水后，再降温至0-5℃，滴加氨水调pH＝7-8，控制内温为15℃，搅拌熟化2小时，抽滤，滤饼用水淋洗一次，收集滤饼，干燥，即得阿朴长春胺，重量为4.7g，纯度为97％。

反应液过程中监测长春胺剩余量用HPLC检测方法，HPLC条件设置如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵缓冲溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(v/v＝45：55)为流动相，检测波长280nm。

2)制备长春西汀粗品

在50mL干燥洁净的单口烧瓶中，阿朴长春胺1.8g和无水乙醇20mL，加热至乙醇回流，溶清后，快速加入乙醇钠乙醇溶液0.70mL(1mol/L)，搅拌回流反应1小时。取样用HPLC监测反应，当阿朴长春胺含量少于3％时停止回流。适当冷却，减压移除全部溶剂，再重新加入新鲜无水乙醇20mL，回流溶清后再快速补充乙醇钠乙醇溶液0.18mL，再回流反应30分钟后补充10mL乙醇，趁热过滤除去不溶物，收集滤液，自然冷却降温结晶，抽滤，淋洗，收集滤饼，即为长春西汀粗品，干重约1.3g，纯度约99％。

3)精制长春西汀

长春西汀粗品1.3g加纯化水30mL左右，常温下搅拌2小时，过滤、用5mL×2纯化水和3mL×2无水乙醇淋洗，抽干即得水洗产品。水洗产品再加无水乙醇20mL，回流溶清，加活性炭约50mg，再回流20分钟，过滤，减压蒸除部分乙醇后缓慢降温重结晶，固体再过滤、用乙醇淋洗、抽干、干燥，即得精致长春西汀1.0g，其纯度为99.5％。

实施例2

本实施例长春胺纯度不低于99.3％。

本实施以长春胺为原料，首先制备阿朴长春胺，再以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1)制备阿朴长春胺

在2000mL干燥洁净的单口烧瓶中投入NMP 690mL和长春胺230g，搅拌5-10分钟得到均匀的混合物，外置冰水浴降温至0-5℃，滴加二氯亚砜74.8mL，控制内温不超过20℃，1小时左右滴完。撤去冰浴，搅拌约半小时升温至常温(RT，20-25℃)，用HPLC监测反应中长春胺的剩余量，当剩余小于1％时结束反应，再降温至0-5℃，滴加纯化水460mL，控制内温不超过30℃，20分钟左右滴完。加完纯化水后，再降温至0-5℃，滴加氨水约320mL，调pH＝7-8，控制内温15℃左右，搅拌熟化2小时，抽滤，纯化水280mL×2充分淋洗，收集滤饼，滤饼再加纯化水1150mL常温搅拌2小时，再抽干，用纯化水280mL×2淋洗，滤饼在60-65℃鼓风干燥24小时，即得阿朴长春胺，其重量为218g，纯度为97.5％以上。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵缓冲溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

2)制备长春西汀粗品

在5000mL干燥洁净的三口烧瓶中，投入阿朴长春胺215g和无水乙醇2700mL，加热至乙醇回流，溶清后快速加入乙醇钠乙醇溶液86mL(1mol/L)，搅拌回流反应1小时。取样用HPLC监测反应，当原料阿朴长春胺含量少于3％时停止回流。适当冷却，减压移除全部溶剂，再重新加入新鲜无水乙醇2700mL，回流溶清，补充乙醇钠乙醇溶液21.5mL，再回流反应30分钟，当原料阿朴长春胺含量少于0.3％时立即结束反应。补充适量乙醇，趁热过滤去不溶物，收集滤液，减压蒸除部分乙醇，至乙醇体积为2200mL左右时停止蒸馏，物料有少量析出，重新升温回流溶清。自然冷却降温结晶，抽滤，淋洗，收集滤饼，即为长春西汀粗品。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

3)精制长春西汀

将步骤2)所得长春西汀粗品加入纯化水3300mL常温下搅拌2小时，再过滤抽干，400mL×2纯化水和120mL×2无水乙醇淋洗，即得水洗产品。水洗产品再加2300mL无水乙醇溶清，加7g活性炭回流20分钟左右，过滤之，减压蒸除部分乙醇后缓慢降温重结晶，固体再过滤、抽干、干燥，即为精制长春西汀，其重量为121.6g，纯度为99.56％。

实施例3

本实施例长春胺纯度不低于99.3％。

本实施以长春胺为原料，首先制备阿朴长春胺，再以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1、制备阿朴长春胺

在2000mL干燥洁净的单口烧瓶中投入NMP 690mL和长春胺230g，搅拌5-10分钟得到均匀的混合物，外置冰水浴降温至0-5℃，滴加二氯亚砜74.8mL，控制内温不超过20℃，1小时左右滴完。撤去冰浴，搅拌约半小时升温至常温(RT，20-25℃)，用HPLC监测反应中长春胺的剩余量，当剩余小于1％时结束反应，再降温至0-5℃，滴加纯化水460mL，控制内温不超过30℃，20分钟左右滴完。加完纯化水后，再降温至0-5℃，滴加氨水约320mL，调pH＝7-8，控制内温15℃左右，搅拌熟化2小时，抽滤，纯化水280mL×2充分淋洗，收集滤饼，滤饼再加纯化水1150mL常温搅拌2小时，再抽干，用纯化水280mL×2淋洗，滤饼在60-65℃鼓风干燥24小时，即得阿朴长春胺，其重量为216g，纯度为98.0％以上。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵缓冲溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

2、制备长春西汀粗品

在5000mL干燥洁净的三口烧瓶中，投入阿朴长春胺215g和无水乙醇2700mL，加热至乙醇回流，溶清后快速加入乙醇钠乙醇溶液86mL(1mol/L)，搅拌回流反应1小时。取样用HPLC监测反应，当原料阿朴长春胺含量少于3％时停止回流。适当冷却，减压移除全部溶剂，再重新加入新鲜无水乙醇2700mL，回流溶清，补充乙醇钠乙醇溶液21.5mL，再回流反应30分钟，当原料阿朴长春胺含量少于0.3％时立即结束反应。补充适量乙醇，趁热过滤去不溶物，收集滤液，减压蒸除部分乙醇，至乙醇体积为2200mL左右时停止蒸馏，物料有少量析出，重新升温回流溶清。自然冷却降温结晶，抽滤，淋洗，收集滤饼，即为长春西汀粗品。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

3、精制长春西汀

将步骤2)所得长春西汀粗品加入纯化水3300mL常温下搅拌2小时，再过滤抽干，400mL×2纯化水和120mL×2无水乙醇淋洗，即得水洗产品。水洗产品再加2300mL无水乙醇溶清，加7g活性炭回流20分钟左右，过滤之，减压蒸除部分乙醇后缓慢降温重结晶，固体再过滤、抽干、干燥，即为精制长春西汀，其重量为123.1g，纯度为99.44％。

实施例4

本实施例长春胺纯度不低于99.3％。

本实施以长春胺为原料，首先制备阿朴长春胺，再以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1)制备长春西汀粗品

在5000mL干燥洁净的三口烧瓶中，投入阿朴长春胺215g和无水乙醇2700mL，加热至乙醇回流，溶清后快速加入乙醇钠乙醇溶液86mL(1mol/L)，搅拌回流反应1小时。取样用HPLC监测反应，当原料阿朴长春胺含量少于3％时停止回流。适当冷却，减压移除全部溶剂，再重新加入新鲜无水乙醇2700mL，回流溶清，补充乙醇钠乙醇溶液21.5mL，再回流反应30分钟，当原料阿朴长春胺含量少于0.3％时立即结束反应。补充适量乙醇，趁热过滤去不溶物，收集滤液，减压蒸除部分乙醇，至乙醇体积为2200mL左右时停止蒸馏，物料有少量析出，重新升温回流溶清。自然冷却降温结晶，抽滤，淋洗，收集滤饼，即为长春西汀粗品。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

2)精制长春西汀

将步骤2)所得长春西汀粗品加入纯化水3300mL常温下搅拌2小时，再过滤抽干，400mL×2纯化水和120mL×2无水乙醇淋洗，即得水洗产品。水洗产品再加2300mL无水乙醇溶清，加7g活性炭回流20分钟左右，过滤之，减压蒸除部分乙醇后缓慢降温重结晶，固体再过滤、抽干、干燥，即为精制长春西汀，其重量为126.1g，纯度为99.39％。

实施例3～5连续投料三批重现性实验表明，该工艺在实验室放大阶段具有良好的稳定性和重现性，并且反应温和、平稳、可控，操作性强，应用上述方法可得到符合长春西汀质量标准的合格产品。

实施例5

本实施例长春胺纯度不低于99.3％。

本实施以长春胺为原料，首先制备阿朴长春胺，再以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1、制备阿朴长春胺

搅拌下，依次在反应釜中投入12.0L溶剂NMP和长春胺4.00kg，搅拌5-10分钟得到均匀的混合物，然后夹套通冷冻盐水降温至0-5℃时，滴加二氯亚砜1.30L，控制温度不超过20℃，1小时左右滴加完毕。然后开启自来水，约半小时升温至常温(RT,20-25℃，下同)，搅拌反应半小时，用HPLC监测反应，长春胺剩余含量为0.0384％，结束反应，进行后处理。用冷冻盐水再将体系冷却至0-5℃后，滴加纯化水8L，控制温度不超过30℃，20分钟左右滴完。加完纯化水后，再降温至0-5℃，滴加氨水约5.6L，调pH＝7-8，滴加过程中控制温度15℃左右，然后再搅熟化2小时，放料，抽干，用纯化水5L×2分次充分淋洗，抽干至不再滴出液滴为止，收集滤饼。将滤饼重新投入釜内，加纯化水20L，搅拌2小时，放料，抽干，纯化水5L×2分次充分淋洗，抽干，滤饼在65℃热风循环电汽烘箱中连续干燥不少于24小时，收料即得阿朴长春胺，其重量为3.80kg，纯度98.0％以上。

本实施例制备阿朴长春胺的工艺流程图如图2所示。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

2、制备长春西汀粗品

在搅拌下，在100L反应釜中投入阿朴长春胺3.80kg和无水乙醇46L，加热至乙醇回流，直至物料基本溶清，然后加入乙醇钠乙醇溶液1.45L，回流搅拌反应1小时。取样用HPLC监测反应，原料阿朴长春胺含量为0.659％时(少于3％)停止回流。用自来水降温至40℃左右，减压移除全部溶剂，得固状物，再重新加入新鲜无水乙醇46L，再热至回流，直至溶清，补充乙醇钠乙醇溶液0.35L，再回流反应30分钟。再监测，当原料阿朴长春胺含量少于0.3％时立即结束反应。补充乙醇40-60L，回流溶清。用预热至60-70℃的D40不锈钢多孔快速过滤器趁热过滤反应液，去除不溶物。将滤液转移至干燥洁净的100L反应釜中，物料会析出，再溶清后蒸出部分乙醇，控制釜内乙醇余量为35-43L。在搅拌下，经过约10-12小时自然冷却降温至接近常温，再开启夹套自来水并继续搅拌2小时熟化结晶。放料，抽干，用无水乙醇6L×2分次充分淋洗，抽干，收集滤饼，即为长春西汀粗品。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

3、精制长春西汀

将长春西汀粗品重新投入釜内，加纯化水48L，搅拌2小时，再放料抽干，先用纯化水6L×2分次充分淋洗，抽干，再用无水乙醇2L×2分次淋洗，抽干，即得水洗产品。再将其用44L无水乙醇加热溶清，使溶液稍冷后，加入活性炭140g，搅拌20-30分钟后趁热过滤之，将滤液转移至50L反应釜中。物料会析出，重新升温回流溶清，再在常压下蒸除少量溶剂，控制反应釜剩余乙醇约28L，然后继续搅拌，经过约10-12小时自然冷却降温至接近常温，再开启夹套冷却水并继续搅拌2小时熟化结晶，放料，抽干，用无水乙醇4L×2分次充分淋洗，收集滤饼，置于热风循环电汽烘箱中，于65-70℃下连续干燥不少于24小时，得精制长春西汀，重1.93kg，纯度约99.8％。

本实施例制备长春西汀和精制长春西汀的工艺流程图如图3所示。

实施例6

本实施例长春胺纯度不低于99.3％。

本实施以长春胺为原料，首先制备阿朴长春胺，再以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1、制备阿朴长春胺

搅拌下，依次在反应釜中投入12.0L溶剂NMP和长春胺4.00kg，搅拌5-10分钟得到均匀的混合物，然后夹套通冷冻盐水降温至0-5℃时，滴加二氯亚砜1.30L，控制温度不超过20℃，1小时左右滴加完毕。然后开启自来水，约半小时升温至常温(RT,20-25℃，下同)，搅拌反应半小时，用HPLC监测反应，长春胺剩余含量为0.0527％，结束反应，进行后处理。用冷冻盐水再将体系冷却至0-5℃后，滴加纯化水8L，控制温度不超过30℃，20分钟左右滴完。加完纯化水后，再降温至0-5℃，滴加氨水约5.6L，调pH＝7-8，滴加过程中控制温度15℃左右，然后再搅拌熟化2小时，放料，抽干，用纯化水5L×2分次充分淋洗，抽干至不再滴出液滴为止，收集滤饼。将滤饼重新投入釜内，加纯化水20L，搅拌2小时，放料，抽干，纯化水5L×2分次充分淋洗，抽干，滤饼在65℃热风循环电汽烘箱中连续干燥不少于24小时，收料即为阿朴长春胺，重量为3.76kg，纯度为98.5％。

HPLC检测方法：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

2、制备长春西汀粗品

在搅拌下，在100L反应釜中投入阿朴长春胺3.76kg和无水乙醇46L，加热至乙醇回流，直至物料基本溶清，然后加入乙醇钠乙醇溶液1.45L，回流搅拌反应1小时。取样用HPLC监测反应，原料阿朴长春胺含量为1.89％(少于3％)，停止回流。用自来水降温至40℃左右，减压移除全部溶剂，得固状物，再重新加入新鲜无水乙醇46L，再热至回流，直至溶清，补充乙醇钠乙醇溶液0.35L，再回流反应30分钟。再监测，当原料阿朴长春胺含量少于0.3％时立即结束反应。补充乙醇40-60L，回流溶清。用预热至60-70℃的D40不锈钢多孔快速过滤器趁热过滤反应液，去除不溶物。将滤液转移至干燥洁净的100L反应釜中，物料会析出，再溶清后蒸出部分乙醇，控制釜内乙醇余量为35-43L。在搅拌下，经过约10-12小时自然冷却降温至接近常温，再开启夹套自来水并继续搅拌2小时熟化结晶。放料，抽干，用无水乙醇6L×2分次充分淋洗，抽干，收集滤饼，即为长春西汀粗品。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

3、精制长春西汀

将长春西汀粗品重新投入釜内，加纯化水48L，搅拌2小时，再放料抽干，先用纯化水6L×2分次充分淋洗，抽干，再用无水乙醇2L×2分次淋洗，抽干，即得水洗产品。再将其用44L无水乙醇加热溶清，使溶液稍冷后，加入活性炭140g，搅拌20-30分钟后趁热过滤之，将滤液转移至50L反应釜中。物料会析出，重新升温回流溶清，再在常压下蒸除少量溶剂，控制反应釜剩余乙醇约28L，然后继续搅拌，经过约10-12小时自然冷却降温至接近常温，再开启夹套冷却水并继续搅拌2小时熟化结晶，放料，抽干，用无水乙醇4L×2分次充分淋洗，收集滤饼，置于热风循环电汽烘箱中，于65-70℃下连续干燥不少于24小时，得精制长春西汀，重1.91kg，纯度约99.6％。

实施例7

本实施例的阿朴长春胺的纯度不低于97.5％。

本实施以阿朴长春胺为原料制备长春西汀。

本实施例制备长春西汀的方法包括如下步骤：

1)制备长春西汀粗品

在搅拌下，在100L反应釜中投入阿朴长春胺3.76kg和无水乙醇46L，加热至乙醇回流，直至物料基本溶清，然后加入乙醇钠乙醇溶液1.45L，回流搅拌反应1小时。取样用HPLC监测反应，原料阿朴长春胺含量为1.05％(少于3％)，停止回流。用自来水降温至40℃左右，减压移除全部溶剂，得固状物，再重新加入新鲜无水乙醇46L，再热至回流，直至溶清，补充乙醇钠乙醇溶液0.35L，再回流反应30分钟。再监测，当原料阿朴长春胺含量少于0.3％时立即结束反应。补充乙醇40-60L，回流溶清。用预热至60-70℃的D40不锈钢多孔快速过滤器趁热过滤反应液，去除不溶物。将滤液转移至干燥洁净的100L反应釜中，物料会析出，再溶清后蒸出部分乙醇，控制釜内乙醇余量为35-43L。在搅拌下，经过约10-12小时自然冷却降温至接近常温，再开启夹套自来水并继续搅拌2小时熟化结晶。放料，抽干，用无水乙醇6L×2分次充分淋洗，抽干，收集滤饼，即为长春西汀粗品。

HPLC检测方法的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6x150mm；5μm)，以0.2mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(45：55)为流动相，检测波长280nm。

2)精制长春西汀

将长春西汀粗品重新投入釜内，加纯化水48L，搅拌2小时，再放料抽干，先用纯化水6L×2分次充分淋洗，抽干，再用无水乙醇2L×2分次淋洗，抽干，即得水洗产品。再将其用44L无水乙醇加热溶清，使溶液稍冷后，加入活性炭140g，搅拌20-30分钟后趁热过滤之，将滤液转移至50L反应釜中。物料会析出，重新升温回流溶清，再在常压下蒸除少量溶剂，控制反应釜剩余乙醇约28L，然后继续搅拌，经过约10-12小时自然冷却降温至接近常温，再开启夹套冷却水并继续搅拌2小时熟化结晶，放料，抽干，用无水乙醇4L×2分次充分淋洗，收集滤饼，置于热风循环电汽烘箱中，于65-70℃下连续干燥不少于24小时，得精制长春西汀，重1.96kg，纯度约99.4％。

实验结果

参照欧洲药典EP6.0和瑞士进口注册标准，对实施例6～8制备的长春西汀中的已知杂质进行了补充研究，长春西汀原料中可能存在的已知杂质包括长春胺酸乙酯(EP杂质A)，阿朴长春胺(EP杂质B),甲氧基长春西汀(EP杂质C)，二氢长春西汀(EP杂质D)，阿朴长春胺酸(EP中未收载)。经过对长期留样近30个月的样品用液相色谱质谱联用仪对杂质进行测定，发现样品中只存在长春胺酸乙酯(EP杂质A)，阿朴长春胺(EP杂质B),甲氧基长春西汀(EP杂质C)，不存在二氢长春西汀(EP杂质D)和阿朴长春胺酸，同时对样品中存在的已知杂质进行了方法学研究，包括系统适用性、线性、精密度、检测限、定量限等进行了系统研究，并将存在的三个已知杂质参照欧洲药典EP6.0定入质量标准，限度同欧洲药典6.0，工艺验证三批的样品(放置18个月)经测定均符合要求。

工艺验证

对实施例6～8制备的长春西汀的方法进行验证，其验证的质量标准的项目、测定方法和限度如表4所示，验证的结果如表5所示。

表4制备长春西汀方法验证

表5实施例5-7制备的长春西汀全检验证结果概况

从表5可以看出，本发明的制备长春西汀的方法制备的长春西汀的熔点，比旋度，残留溶剂，单一杂质含量，总杂质含量，干燥失重，灼烧残渣，重金属含量，性状等都符合欧洲药典EP6.0标准。