本发明属于医药及食品技术领域，具体涉及一种从甜柿皮中制备熊果酸的方法。
背景技术：
熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，被广泛地用作医药和化妆品原料。通常情况下，熊果酸与其同分异构体齐墩果酸常共生，因其它们化学结构非常相似，且齐墩果酸含量所占比例大，因此虽然其在植物界分布广泛，但若要获得高纯度熊果酸并不容易。使用简易、高效且经济的方法制备熊果酸，是植物化工领域的关键技术和核心竞争力。
甜柿(Diospyros Kaki)为大宗水果，在云南等省多地大规模种植，除满足国内外鲜果市场需求外，甜柿产品也向果脯、果酱、果醋等深加工下游产业发展，这些产品深加工过程中产生了大量甜柿果皮作为废弃物丢弃，未能综合利用。甜柿果皮中含有大量熊果酸，难能可贵的是其中齐墩果酸含量很低，为获得高纯度熊果酸提供了有利条件。因此，针对目前植物性来源熊果酸提取制备缺陷，提供一种利用甜柿果皮制备熊果酸的方法对于甜柿资源综合利用，以及满足医药及化妆品行业急需的高纯度熊果酸原料的需求具有重要意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种从甜柿皮中制备熊果酸的方法。
本发明通过如下方法实现：所述的熊果酸制备方法是以甜柿果皮为原料，经提取、富集、精制得到，具体包括：
A、提取：取甜柿果皮，鲜品匀浆或干品粉碎，加入2～5倍重量的乙醇溶液，加热回流提取2～3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；
B、富集：浸膏中加入3～6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，先用2～5倍柱体积水洗脱，再用高浓度乙醇溶液洗脱，收集含熊果酸部分的洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得熊果酸粗品；或浸膏中加入3～6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用石油醚萃取三次，石油醚加入量为滤液体积的10~30%，石油醚萃取液浓缩，干燥，得熊果酸粗品；或浸膏中加入3～6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液中加入1%～5%活性炭（W / V），搅拌20~40分钟，过滤，滤饼用水洗涤；再重复两次；合并活性炭滤饼，加入5～10倍量乙醇（W / V），加热回流，过滤，得提取液；重复两次；合并提取液，浓缩，干燥，得熊果酸粗品。
C、精制：熊果酸粗品，加入10～20倍量（V/W）85%～95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；合并三次结晶，再重复以上操作2～3次，结晶干燥，即得高浓度熊果酸；或取熊果酸粗品，加丙酮溶解，用三倍量硅胶拌样，以石油醚-丙酮为洗脱剂、15～30倍量硅胶为层析填料，层析，收集含熊果酸洗脱液，浓缩，干燥，得灰白色粉末，加入10～20倍量（V/W）85%～95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；过滤，滤液再浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；合并三次结晶，干燥，即得高浓度熊果酸。
本发明的有益效果在于：
本发明以甜柿皮为原料制备熊果酸，有效利用了甜柿深加工过程产生的废弃物，提高了甜柿资源利用率；制备过程中采用大孔吸附树脂/活性炭富集甜柿皮中有效成分制得熊果酸粗品，并采用重结晶/硅胶层析方法进行熊果酸粗品的精制，所得熊果酸纯度高，可用于工业化生产，以满足医药及化妆品行业日益增长的高纯度熊果酸原料的需求，具有良好的市场前景和竞争力。
具体实施方式
为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果，以下实施例为对本发明的说明而不是限定。
所述的熊果酸制备方法是以甜柿果皮为原料，经提取、富集、精制得到，具体包括：
A、提取：取甜柿果皮，鲜品匀浆或干品粉碎，加入2～5倍重量的乙醇溶液，加热回流提取2～3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；
B、富集：浸膏中加入3～6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，先用2～5倍柱体积水洗脱，再用高浓度乙醇溶液洗脱，收集含熊果酸部分的洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得熊果酸粗品；或浸膏中加入3～6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用石油醚萃取三次，石油醚加入量为滤液体积的10~30%，石油醚萃取液浓缩，干燥，得熊果酸粗品；或浸膏中加入3～6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液中加入1%～5%活性炭（W / V），搅拌20~40分钟，过滤，滤饼用水洗涤；再重复两次；合并活性炭滤饼，加入5～10倍量乙醇（W / V），加热回流，过滤，得提取液；重复两次；合并提取液，浓缩，干燥，得熊果酸粗品。
C、精制：熊果酸粗品，加入10～20倍量（V/W）85%～95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；合并三次结晶，再重复以上操作2～3次，结晶干燥，即得高浓度熊果酸；或取熊果酸粗品，加丙酮溶解，用三倍量硅胶拌样，以石油醚-丙酮为洗脱剂、15～30倍量硅胶为层析填料，层析，收集含熊果酸洗脱液，浓缩，干燥，得灰白色粉末，加入10～20倍量（V/W）85%～95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；过滤，滤液再浓缩至原体积的40~60%，放置结晶；合并三次结晶，干燥，即得高浓度熊果酸。
进一步地，步骤A所述高浓度乙醇溶液的浓度为80%~100%。
进一步地，步骤B中所述高浓度乙醇溶液浓度为85%~100%，洗脱量为4~8倍柱体积。
进一步地，步骤C中所述石油醚-丙酮按体积比为8～3:1进行梯度洗脱，共4个梯度，分别为8:1、6:1、4:1、3:1。
实施例1：
取甜柿果皮50 kg，鲜品匀浆，加入5倍重量的80%乙醇溶液，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入4倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，先用2倍柱体积水洗脱，再用90%乙醇溶液洗脱，收集含熊果酸部分的洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得熊果酸粗品（1.45kg，含量57.6%）。熊果酸粗品，加入10倍量（V/W）85%乙醇溶液，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；合并三次结晶，再重复以上操作2次，结晶干燥，得熊果酸精品（0.23kg，含量85.6 %）。
实施例2：
取甜柿果皮干品80 kg，加入5倍重量的90%乙醇溶液，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，先用4倍柱体积水洗脱，再用高浓度乙醇溶液洗脱，收集含熊果酸部分的洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得熊果酸粗品。取熊果酸粗品，加丙酮溶解，用三倍量硅胶拌样，以石油醚-丙酮为洗脱剂（按体积比为8:1、6:1、4:1、3:1进行梯度洗脱），20倍量硅胶为层析填料，层析，收集含熊果酸洗脱液，浓缩，干燥，得灰白色粉末，加入10倍量（V/W）95%乙醇溶液，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液再浓缩至原体积的50%，放置结晶；合并三次结晶，干燥，得熊果酸精品0.93kg，经检测，纯度为98.1%。
实施例3：
取甜柿果皮100 kg，鲜品匀浆，加入5倍重量的90%乙醇溶液，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入3倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用石油醚萃取三次（石油醚加入量为滤液体积的20%），石油醚萃取液浓缩，干燥，得熊果酸粗品（2.34kg，含量46.8%）。熊果酸粗品，加入20倍量（V/W）95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；合并三次结晶，再重复以上操作2次，结晶干燥，得熊果酸精品0.42kg（含量77.9%）。
实施例4：
取甜柿干品80 kg，粉碎，加入4倍重量的高浓度乙醇溶液，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用石油醚萃取三次（石油醚加入量为滤液体积的20%），石油醚萃取液浓缩，干燥，得熊果酸粗品。取熊果酸粗品，加丙酮溶解，用三倍量硅胶拌样，以石油醚-丙酮为洗脱剂（按体积比为8:1、6:1、4:1、3:1进行梯度洗脱），30倍量硅胶为层析填料，层析，收集含熊果酸洗脱液，浓缩，干燥，得灰白色粉末，加入15倍量（V/W）85%乙醇溶液，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液再浓缩至原体积的50%，放置结晶；合并三次结晶，干燥，得熊果酸精品0.75kg（含量99.6%）。
实施例5：
取甜柿果皮干品150 kg，粉碎，加入5倍重量的100%乙醇，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液中加入5%活性炭（W / V），搅拌30分钟，过滤，滤饼用水洗涤；再重复两次；合并活性炭滤饼，加入10倍量乙醇（W / V），加热回流，过滤，得提取液；重复两次；合并提取液，浓缩，干燥，得熊果酸粗品4.66kg（含量45.2%）。熊果酸粗品，加入20倍量（V/W）95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；合并三次结晶，再重复以上操作3次，结晶干燥，得熊果酸精品0.86k g（含量75.9%）。
实施例6：
取甜柿果皮干品200 kg，粉碎，加入5倍重量的90%乙醇溶液，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入6倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液中加入5%活性炭（W / V），搅拌30分钟，过滤，滤饼用水洗涤；再重复两次；合并活性炭滤饼，加入10倍量乙醇（W / V），加热回流，过滤，得提取液；重复两次；合并提取液，浓缩，干燥，得熊果酸粗品。取熊果酸粗品，加丙酮溶解，用三倍量硅胶拌样，以石油醚-丙酮为洗脱剂（按体积比为8:1、6:1、4:1、3:1进行梯度洗脱）、30倍量硅胶为层析填料，层析，收集含熊果酸洗脱液，浓缩，干燥，得灰白色粉末，加入10倍量（V/W）85%乙醇溶液，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的50%，放置结晶；过滤，滤液再浓缩至原体积的50%，放置结晶；合并三次结晶，干燥，得熊果酸精品1.21kg（含量为99.1%）。
实施例7：
取甜柿果皮干品100 kg，粉碎，加入2倍重量的90%乙醇溶液，加热回流提取2次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入5倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液中加入5%活性炭（W / V），搅拌20分钟，过滤，滤饼用水洗涤；再重复两次；合并活性炭滤饼，加入5倍量乙醇（W / V），加热回流，过滤，得提取液；重复两次；合并提取液，浓缩，干燥，得熊果酸粗品。取熊果酸粗品，加丙酮溶解，用三倍量硅胶拌样，以石油醚-丙酮为洗脱剂（按体积比为8:1、6:1、4:1、3:1进行梯度洗脱）、15倍量硅胶为层析填料，层析，收集含熊果酸洗脱液，浓缩，干燥，得灰白色粉末，加入10倍量（V/W）85%乙醇溶液，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的40%，放置结晶；过滤，滤液再浓缩至原体积的40%，放置结晶；合并三次结晶，干燥，得熊果酸精品0.53kg（含量为77.1%）。
实施例8：
取甜柿果皮100 kg，鲜品匀浆，加入3倍重量的80%乙醇溶液，加热回流提取3次，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；浸膏中加入5倍水（V/W），搅拌混匀，过滤，滤液用石油醚萃取三次（石油醚加入量为滤液体积的30%），石油醚萃取液浓缩，干燥，得熊果酸粗品（2.24kg，含量40.8%）。熊果酸粗品，加入20倍量（V/W）95%乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液静置冷却，结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的60%，放置结晶；过滤，滤液浓缩至原体积的60%，放置结晶；合并三次结晶，再重复以上操作2次，结晶干燥，得熊果酸精品0.50kg（含量80.9%）。