一种磁珠法分离纯化DNA的方法与流程

本发明涉及生物技术领域，特别地，涉及一种磁珠法分离纯化dna的方法。

背景技术：

dna测序作为一种重要的实验技术，在生物学研究中有着广泛的应用。早在dna双螺旋结构(watsonandcrick，1953)被发现后不久就有人报道过dna测序技术，但是当时的操作流程复杂，没能形成规模。随后在1977年sanger发明了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年a.m.maxam和w.gilbert发明了化学降解法。sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了迄今为止dna测序的主流。然而随着科学的发展，传统的sanger测序已经不能完全满足研究的需要，对模式生物进行基因组重测序以及对一些非模式生物的基因组测序，都需要费用更低、通量更高、速度更快的测序技术，第二代测序技术(next-generationsequencing)应运而生。第二代测序技术的核心思想是边合成边测序(sequencingbysynthesis)，即通过捕捉新合成的末端的标记来确定dna的序列，现有的技术平台主要包括roche/454flx、illumina/solexagenomeanalyzer和appliedbiosystemssolidsystem。在整个dna测序过程中，分离提取的dna的纯度起到至关重要的作用。

磁珠法纯化dna主要是利用利息交换吸附材料以吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的，核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离核酸时应遵循保证核酸分子一级结构的完整性以及排除其他分子污染的原则。

大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。

现有磁珠法纯化dna方法中，磁珠纯化过程中，在洗涤磁珠时，通常采用磁力架上下颠倒的方式进行洗涤磁珠，但是，上述磁珠洗涤方法存在磁珠洗涤不够彻底的问题，常导致dna产物的纯度不高；而且离心管盖上也会有酒精残留，容易造成交叉污染。

技术实现要素：

本发明提供了一种磁珠法分离纯化dna的方法，解决了现有技术中磁珠洗涤不彻底、影响dna产物纯度的问题。

为实现上述目的，本发明提出了一种磁珠法纯化dna的磁珠洗涤方法，包括如下步骤：

(1)将吸附dna分子后的磁珠置于离心管中；

(2)将所述离心管置于磁力架上转动洗涤；

(3)固液分离。

所述步骤(2)中，所述转动洗涤为转动一周。

所述步骤(1)中还包括加入70v/v％酒精的步骤。

所述磁珠为agencourtampurexp。

本发明还公开了一种磁珠法分离纯化dna的方法，包括如所述洗涤方法对磁珠进行洗涤的步骤。

本发明还公开了一种磁珠法分离纯化dna的方法，包括如下步骤：

(1)将dna转入分装好磁珠的离心管中，混匀并于室温下静置处理；

(2)将离心管置于磁力架上，吸附至溶液澄清，去除上清；

(3)权利要求1-4任一项所述洗涤方法对磁珠进行洗涤；

(4)将洗涤后的离心管置于40℃干式加热器上干燥磁珠至磁珠表面不反光；

(5)向离心管加入ddh2o，回溶磁珠；

(6)将离心管于室温下静置处理，并置于磁力架上吸附至澄清；

(7)将上清液转移到新的离心管中备用，进行后续测序处理。

所述步骤(3)中，所述磁珠洗涤的步骤为重复2次。

所述步骤(1)中，所述静置处理步骤为10min。

所述步骤(6)中，所述静置处理步骤为5min。

本发明还公开了一种二代dna测序方法，即包括所述的分离纯化dna的方法。

本发明还公开了一种的磁珠法分离纯化dna的方法，包括如下步骤：

本发明所述磁珠法分离纯化dna的方法，在磁珠洗涤步骤中，采用在磁力架上转动洗涤的方式，使得每个磁珠小微粒都能洗涤到，具有更好的洗涤效果，进一步提高了dna产物纯度；同时，由于采用转动洗涤的方式，不需颠倒，离心管盖上没有液体，能最大程度的减少交叉污染的风险。

附图说明

图1是本发明实施例1中转动洗涤磁珠的操作示意图；

图2为本发明对比例中上下颠倒磁力架洗涤磁珠的操作示意图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

本实施例所述磁珠法分离纯化dna的方法，具体包括如下步骤：

(1)将收集的dna转入分装好磁珠的1.5ml离心管中，吹打混匀，室温静置10分钟；

(2)将离心管置于磁力架上，吸附至溶液澄清，去除上清；

(3)向离心管中加入70％酒精，盖下管盖，如图1所示，转动离心管一周以洗涤磁珠，随后开盖去除上清，并重复上述洗涤步骤2次；

(4)将离心管置于40℃干式加热器上干燥磁珠至磁珠表面不反光；

(5)向离心管加入ddh2o，以回溶磁珠；

(6)将离心管于室温静置5分钟后，置于磁力架上吸附至澄清；

(7)将上清液转移到新离心管中备用，进行后续测序处理。

对比例

本对比例所述磁珠法分离纯化dna的方法，与实施例1相同，其区别仅在于，所述磁珠洗涤步骤(3)中，如图2中(a)和(b)所示，采用现有技术中的常规方法，即在磁力架上以上下颠倒磁力架的方式进行洗涤。

实验例

对上述实施例1中以优化后转动洗涤的方法和以现有上下颠倒磁力架的方式所提取得到的dna样本浓度纯度进行检测并对比，记录数据如下表1。

表1两种洗涤方法dna样本浓度纯度检测

从上表数据可知，采用本发明优化后的磁珠洗涤方法可以充分的洗涤磁珠，进一步提高产物纯度；同时，由于样本在洗涤过程中，不会接触到离心管盖上，因而不会有液体残留，并最大限度的减少了交叉污染的风险。

以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

技术特征：

技术总结
本发明涉及生物技术领域，特别地，涉及一种磁珠法分离纯化DNA的方法。本发明所述磁珠法分离纯化DNA的方法，在磁珠洗涤步骤中，采用在磁力架上转动洗涤的方式，使得每个磁珠小微粒都能洗涤到，具有更好的洗涤效果，进一步提高了DNA产物纯度；同时，由于采用转动洗涤的方式，不需颠倒，离心管盖上没有液体，能最大程度的减少交叉污染的风险。

技术研发人员：吴少鸿;李欣;刘奇志;王祖雄;付剑锋;李胜果;周文根
受保护的技术使用者：厦门美因生物科技有限公司
技术研发日：2017.05.18
技术公布日：2017.08.18