本发明涉及药物合成领域，具体而言，涉及一种醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法。
背景技术：
亮丙瑞林，制剂中文名称为醋酸亮丙瑞林、抑那通或者简称亮丙瑞林。亮丙瑞林属于gnrh类似物，作用同布舍瑞林。重复给予大剂量的促黄体生成释放激素(lh-rh)或其高活性衍生物醋酸亮丙瑞林，在首次给药后能立即产生一过性的垂体-性腺系统兴奋作用(急性作用)，然后抑制垂体生成和释放促性腺激素。它还进一步抑制卵巢和睾丸对促性腺激素的反应，从而降低雌二醇和睾丸酮的生成(慢性作用)。醋酸亮丙瑞林的促黄体生成激素(lh)释放活性约为lh-rh的100倍，它的抑制垂体-性腺系统功能的作用也强于lh-rh。醋酸亮丙瑞林是高活性的lh-rh衍生物，由于它对蛋白分解酶的抵抗力和对lh-rh受体的亲和力都比lh-rh强，所以能有效地抑制垂体-性腺系统的功能。
此外，醋酸亮丙瑞林又是一种缓释制剂，它恒定地向血液中释放醋酸亮丙瑞林，故能有效地降低卵巢和睾丸的反应，产生高度有利的垂体-性腺系统的抑制作用。对子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌患者，每4周1次皮下注射醋酸亮丙瑞林，使血清中雌二醇下降到接近绝经期的水平。因此本品有卵巢功能抑制作用，可抑制正常排卵和使月经停止。对前列腺癌患者皮下注射醋酸亮丙瑞林，每4周1次，使血清睾丸酮浓度降至去势水平之下，表明本品有药理学的去势作用。对患有中枢性性早熟的男孩和女孩每4周1次，皮下注射醋酸亮丙瑞林后，血清中促性腺激素的水平降至青春期前的水平，表明对第二性征有进行性抑制作用。
亮丙瑞林的适应症为子宫内膜异位症；伴有月经过多、下腹痛、腰痛及贫血等的子宫肌瘤；绝经前乳腺癌，且雌激素受体阳性患者；前列腺癌；中枢性性早熟症。临床主要用于前列腺癌及子宫内膜异位症。在已发表的文献和专利中，未有大规模生产、并且具有较高收率的纯化工艺报道。
现有技术提供了一种亮丙瑞林的纯化工艺，该工艺中使用磷酸三乙胺作为缓冲盐，转盐过程中使用阴离子交换树脂除去磷酸根，此工艺中没有除去三乙胺盐的方法，有三乙胺盐超标的风险，且引入了新的盐，使得质量控制更加复杂。
另一个技术也提供了一种亮丙瑞林的纯化工艺，该工艺中使用磷酸二氢钠作为缓冲盐，使用醋酸铵除去磷酸盐，此工艺中可以避免三乙胺的残留，但醋酸铵的脱盐能力有限，对于亮丙瑞林这种含碱性基团较多的多肽存在阴离子超标的风险。
技术实现要素：
本发明的主要目的在于提供一种醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法，以解决现有醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法存在杂质超标的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法，该纯化方法包括：第一洗脱，采用反相色谱柱对醋酸亮丙瑞林粗产品进行第一洗脱步骤，得到第一洗脱产物；其中第一洗脱步骤的洗脱条件包括：第一流动相为三氟乙酸水溶液，第二流动相为三氟乙酸乙腈溶液；及将第一洗脱产物依次经过转盐、脱盐过程，得到醋酸亮丙瑞林产品。
进一步地，第一洗脱步骤为梯度洗脱，且在梯度洗脱过程中，第二流动相的浓度在18～28wt％之间进行正向变化，洗脱时间为60～80min。
进一步地，第一洗脱步骤中，反相色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，第一流动相中三氟乙酸的浓度为0.02～0.10wt％，第二流动相中三氟乙酸的浓度为0.02～0.10wt％，检测波长为220nm；优选地，反相色谱柱为动态轴向加压柱，型号为ymc-ods-aq，柱子直径和长度为150×250mm。
进一步地，转盐步骤包括：采用醋酸铵对第一洗脱产物进行冲洗，得到中间产物；及对中间产物进行第二洗脱过程，得到转盐产物；优选，醋酸铵的浓度为40～60mmol/l。
进一步地，冲洗过程中，醋酸铵的体积用量为3～5倍柱体积，冲洗时间为30～50min。
进一步地，第二洗脱过程包括：使用第二洗脱剂对中间产物进行第二洗脱过程，且第二洗脱剂选自含醋酸的乙腈水溶液，优选含醋酸的乙腈水溶液中，醋酸的浓度为0.5～1.5wt％，乙腈的浓度为60～70wt％。
进一步地，脱盐步骤包括：将转盐产物与碱性阴离子交换树脂进行离子交换，得到醋酸亮丙瑞林产品。
进一步地，碱性阴离子树脂选自amberlitira-93和/或大孔弱碱性苯乙烯阴离子交换树脂。
进一步地，离子交换过程中，转盐产物的空间流速为5～10床体积/h。
进一步地，进行第一洗脱步骤之前，纯化方法还包括：将醋酸亮丙瑞林粗产品与溶剂混合后进行过滤，得到滤液；将滤液进行第一洗脱步骤，得到第一洗脱产物；优选溶剂为乙腈、醋酸和水的混合液，优选混合液中乙腈、醋酸和水的体积比为8～12:1～2.:1～2。
应用本发明的技术方案，本申请提供了一种醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法。采用反相色谱柱对醋酸亮丙瑞林粗产品进行初步纯化时，选用三氟乙酸作为流动相一方面能够不引入新的反离子，从而有利于提高亮丙瑞林产品的纯度；另一方面由于醋酸亮丙瑞林粗产品中还含有一部分与三氟乙酸形成的三氟乙酸盐，在流动相中加入三氟乙酸还能起到缓冲盐的作用，将第一流动相和第二流动相的ph限定在一个较为稳定的范围内，这有利于减少色谱峰型拖尾，改善峰型。然后通过转盐和脱盐过程得到醋酸亮丙瑞林产品。综上所述，本申请提供的纯化方法不引入新的反离子，且具有产品纯度高、品质可控、成本低及操作简便等优点。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
正如背景技术所描述的，现有的醋酸亮丙瑞林的纯化方法存在杂质超标的问题。为了更好的解决上述技术问题，本申请提供了一种醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法，该纯化方法包括：第一洗脱，采用反相色谱柱对醋酸亮丙瑞林粗产品进行第一洗脱步骤，得到第一洗脱产物，其中第一洗脱步骤的洗脱条件包括：第一流动相为三氟乙酸水溶液，第二流动相为三氟乙酸乙腈溶液；及将第一洗脱产物依次经过转盐、脱盐过程，得到醋酸亮丙瑞林产品。
第一洗脱步骤中，采用反相色谱柱对醋酸亮丙瑞林粗产品进行初步纯化时，选用三氟乙酸作为流动相一方面能够不引入新的反离子，从而有利于提高亮丙瑞林产品的纯度；另一方面由于醋酸亮丙瑞林粗产品中还含有一部分与三氟乙酸形成的三氟乙酸盐，在流动相中加入三氟乙酸还能起到缓冲盐的作用，将第一流动相和第二流动相的ph限定在一个较为稳定的范围内，这有利于减少色谱峰型拖尾，改善峰型。然后通过转盐和脱盐过程得到醋酸亮丙瑞林产品。综上所述，本申请提供的纯化方法不引入新的反离子，且具有产品纯度高、品质可控、成本低及操作简便等优点。
在一种优选的实施方式中，第一洗脱步骤为梯度洗脱，在梯度洗脱过程中，第二流动相的浓度在18～28wt％之间进行正向变化，洗脱时间为60～80min。将第一洗脱步骤限定为梯度洗脱，有利于根据待洗脱的目标物质的极性调整洗脱液的组成，进而缩短洗脱时间。而将洗脱时间限定在上述范围内有利于将亮丙瑞林粗产品的中杂质洗脱完全，进而提高产品的纯度。
本申请中，“第二流动相的浓度在18～28wt％之间进行正向变化”是指以第二流动相的浓度为18wt％作为起始浓度，随着时间的变化第二流动相的浓度逐渐增大，且每个梯度上第二流动相的浓度以及梯度的个数可以进行调节。“洗脱时间”是指洗脱过程的总时间。
上述纯化方法中，采用上述梯度洗脱的方式进行第一洗脱步骤，有利于提高产品的纯度。在一种优选的实施方式中，第一洗脱步骤中，反相色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，第一流动相中三氟乙酸的浓度为0.02～0.10wt％，第二流动相中三氟乙酸的浓度为0.02～0.10wt％，检测波长为220nm，反相色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。
将第一流动相和第二流动相中三氟乙酸的浓度可以相同或不同，但均在0.02～0.15wt％范围内进行变化，这有利于进一步提高缓冲盐的缓冲效果，进而有利于进一步提高杂质脱除率和亮丙瑞林产品的纯度。
优选地，反相色谱柱为动态轴向加压柱，型号为ymc-ods-aq，柱子直径和长度为150×250mm。上述反相色谱柱具有动态轴向加压的功能，因而采用上述色谱柱进行第一洗脱步骤时，洗脱过程能够在一定的压力下进行，进而有利于提高分离效率。
在一种优选的实施方式中，转盐步骤包括：采用醋酸铵对第一洗脱产物进行冲洗，得到中间产物；及对中间产物进行第二洗脱过程，得到转盐产物。
第一洗脱步骤中，通过醋酸铵对第一洗脱产物进行冲洗，能够将第一产物中的部分三氟乙酸根转化为醋酸根，进而将第一洗脱产物转化为醋酸盐(转盐产物)。优选醋酸铵的浓度为40～60mmol/l，这有利于使醋酸根有足够的结合位点，进而有利于提高三氟乙酸根转化为醋酸根的效率。由于醋酸铵为弱酸弱碱盐，因而采用醋酸铵作为转盐步骤的原料，有利于保持转盐过程中反应环境中ph的稳定性。
在一种优选的实施方式中，冲洗过程中，醋酸铵的体积用量为3～5倍柱体积，冲洗时间为30～50min。
在一种优选的实施方式中，第二洗脱过程包括：使用第二洗脱剂对中间产物进行第二洗脱过程，且洗脱剂包括但不限于醋酸乙腈的水溶液。第二洗脱过程中采用含醋酸的乙腈水溶液进行第二洗脱过程，这有利于降低醋酸盐在洗脱过程因水解而损失，从而有利于提高醋酸亮丙瑞林产品的纯度。同时由于转盐产物为极性物质，使用乙腈水溶液还能提高转盐产物的洗脱效率。而将醋酸与乙腈的重量比限定在上述范围内不仅有利于提高第二洗脱过程的洗脱效果，还有利于进一步提高醋酸亮丙瑞林产品的纯度。优选含醋酸的乙腈水溶液中，醋酸的浓度为0.5～1.5wt％，乙腈的浓度为60～70wt％。优选对转盐产物进行减压旋蒸至3mg/ml，这有利于减少转盐产物的体积，从而缩短脱盐过程的时间。
在一种优选的实施方式中，脱盐步骤包括：将转盐产物与碱性阴离子交换树脂进行离子交换，得到醋酸亮丙瑞林产品。将转盐产物与碱性阴离子树脂进行离子交换过程，以去除转盐产物中剩余的三氟乙酸根。优选上述碱性阴离子树脂包括但不限于amberlitira-93和/或大孔弱碱性苯乙烯阴离子交换树脂(d301r)。
上述碱性阴离子树脂优选弱碱性阴离子交换树脂。由于三氟乙酸根的碱性强于醋酸根，因而通过弱碱性阴离子树脂进行离子交换有利于将转盐产物中的三氟乙酸根去除，同时还保留转盐产物上的醋酸根，进而得到较为纯净的醋酸亮丙瑞林产品。此外由于脱盐过程中转盐产物仅包含少部分的三氟乙酸根，所以仅适用少量的弱碱性阴离子树脂就能够将剩余的三氟乙酸根进行脱除。因而大大节省了成本，简化了操作，且产品品质易于操控。
优选在脱盐过程中，将离子交换树脂置于砂芯漏斗中，用纯水冲洗至中性，并收集馏分；然后将上述馏分转移至冻干瓶中冻干以去除水分，得到所需的醋酸亮丙瑞林产品。
在一种优选的实施方式中，上述离子交换过程中的洗脱速率为5～10床体积/h。将离子交换过程中床体积限定在上述范围内有利于进一步提高离子交换的效率，从而有利于进一步提高三氟乙酸根与醋酸根的交换效率。
在一种优选的实施方式中，进行第一洗脱步骤之前，上述纯化方法还包括：将醋酸亮丙瑞林粗产品与溶剂混合后进行过滤，得到滤液；及将上述滤液进行第一洗脱步骤，得到第一洗脱产物。在进行第一洗脱步骤之前进行过滤有利于将醋酸亮丙瑞林粗产品中的杂质进行初步脱除，这有利于防止在后续的洗脱过程中杂质堵塞色谱柱。
优选溶剂包括但不限于乙腈、醋酸和水的混合液或丙醇、醋酸和水的混合液。优选为乙腈、醋酸和水的混合液作为溶剂，选用上述溶剂一方面有利于提高醋酸亮丙瑞林粗产品的溶解，同时由于后续的纯化过程中也涉及乙腈和醋酸根，因而采用上述溶剂还不会引入新的杂质，进而有利于提高醋酸亮丙瑞林的纯度。优选上述混合液中，乙腈、醋酸和水的体积比为8～10:1～2.:1～2。
以下结合具体实施例对本申请作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本申请所要求保护的范围。
实施例1
样品处理：
每克亮丙瑞林粗品溶于20ml溶剂(乙腈：乙酸：水体积比为8：1：1)，使用0.45um滤膜过滤后得到待测样品，备用。
第一洗脱：
色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷健和硅胶为固定相的动态轴向加压柱型号为ymc-ods-aq，柱子直径和长度为150×250mm；第一流动相为0.05wt％三氟乙酸水溶液，第二流动相为0.05wt％三氟乙酸乙腈溶液，检测波长220nm。
将上述色谱柱使用起始梯度(第二流动相为18wt％)进行平衡，注入5g待测样品，并在上述色谱条件下进行梯度洗脱，且洗脱过程中第二流动相的重量百分含量从18升至28wt％，线性梯度洗脱60min。收集目标峰后备用，共收集2l，浓度为1.5mg/ml。
转盐：
将上述色谱柱使用纯水平衡后，使用50mmol醋酸铵水溶液对其进行冲洗，冲洗量为3个柱体积(每个柱体积约10分钟)，最后用乙腈占60％的醋酸乙腈水溶液(醋酸的重量百分含量为0.5wt％)进行第二洗脱过程，收集洗脱液得到转盐产物，然后对上述转盐产物进行减压旋蒸至3mg/ml。
脱盐：
将3g阴离子交换树脂(amberlitira-93)置于砂芯漏斗中，用纯水冲洗至中性。然后将转盐产物置于上述砂芯漏斗中进行离子交换，得到脱盐产物。然后将上述脱盐产物转移到冻干瓶中冻干，即可得到纯度大于99.75％符合欧洲药典的亮丙瑞林产品，收率70wt％。
实施例2
与实施例1的区别是第一洗脱步骤中第二流动相的重量百分含量在10～20wt％之间进行正向变化。产物为纯度是99.66wt％的亮丙瑞林产品，收率为61wt％。
实施例3
与实施例1的区别是第一流动相和所述第二流动相中三氟乙酸的浓度0.02wt％。产物为纯度是99.46wt％的亮丙瑞林产品，收率为68wt％。
实施例4
与实施例1的区别是第一流动相中三氟乙酸的浓度0.01wt％，第二流动相中三氟乙酸的浓度0.01wt％。产物为纯度是99.22wt％的亮丙瑞林产品，收率为65wt％。
实施例5
与实施例1的区别是冲洗过程中，醋酸铵的用量为1柱体积，冲洗时间为30min。产物为纯度是99.34wt％的亮丙瑞林产品，收率为66wt％。
实施例6
与实施例1的区别是脱盐过程，阴离子交换树脂为强碱性阴离子交换树脂(大孔强碱性苯乙烯阴离子交换树脂)。产物为纯度是99.73wt％的亮丙瑞林产品，收率为62wt％。
实施例7
与实施例1的区别是脱盐过程，在进行第一洗脱步骤之前的过滤过程中，溶剂为乙腈、醋酸和水的混合液，且乙腈、醋酸和水的体积比为3:1:1。产物为纯度是99.47wt％的亮丙瑞林产品，收率为60wt％。
实施例8
与实施例1的区别是色谱柱的固定相为辛烷基硅烷键合硅胶。产物为纯度是99.10wt％的亮丙瑞林产品，收率为60wt％。
对比例1
与实施例1的区别是第一流动相为磷酸三乙胺水溶液，第二流动相为磷酸三乙胺乙腈溶液。产物为纯度为98.87wt％的亮丙瑞林产品，收率为58wt％。
对比例2
与实施例1的区别是第一流动相为磷酸二氢钠水溶液，第二流动相为磷酸二氢钠乙腈溶液。产物为纯度为97.65wt％的亮丙瑞林产品，收率为45wt％。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：采用本申请方法对醋酸亮丙瑞林粗产品进行纯化时，纯化过程中不引入新的盐，质量控制简单，且除盐彻底，从根本上降低了盐超标的风险；同时纯化过程化中使用的溶剂较少，降低了废液的排放量；更为重要的是，经上述方法纯化后，醋酸亮丙瑞林产品不仅纯度高，而且还具有较高的收率。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。