一种黄色肉棒菌菌种的分离纯化方法与流程

本发明属于食药用菌领域，特别涉及一种黄色肉棒菌菌种的分离纯化方法。

背景技术：

我国是生物多样性最丰富的国家之一，中国估计有10万种食药用菌，已被认识的只有1000种左右，而被利用的只有100种左右，由此可见大多数野生食药用菌未被发现、认识和利用。因此找到更好的食药用菌是我国食药用菌工作者的重要工作之一。

肉棒菌(podostromasp.)是一种具有16个子囊孢子的特殊大型真菌物种，目前世界有记载的肉棒菌属只有20个记录，由此可见肉棒菌的珍惜程度。肉棒菌在中国还没有被绝大多数人认识和了解，甚至多数从事菌物研究的人还没有这种物种的概念，且目前中国只有几个种被描述和记录，至今还未有分离纯化菌种和栽培等利用的报道。据初步研究，肉棒菌具有特殊的食用和药用价值，因此研究如何分离纯化肉棒菌菌种，从而可以进行相应的开发研究，是开发食药用菌新品种，开发新药物的重要途径。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种黄色肉棒菌菌种的分离纯化方法，该方法操作简单，可进一步研制和开发潜在肉棒菌新资源食品，开创了我国潜在新资源食品肉棒菌的研制和开发利用先河。

本发明的一种黄色肉棒菌菌种的分离纯化方法，包括：

(1)取采集自野外苔藓丛中的黄色肉棒菌，并对表面残余物进行处理，待进行菌种分离；

(2)从黄色肉棒菌中部取16孢子囊，接种于预先配制并灭菌的特殊培养基中，在20-23℃暗光下进行培养10-12天，获得黄色肉棒菌菌种；其中，特殊培养基的组成为：土豆200g、葡萄糖10g、乳糖10g、蛋白胨10g、酵母膏10g、氯化钾0.05g、硫酸钠0.15g、磷酸氢二钾0.5g、氯化钙0.025g、磷酸二氢氨0.25g、2％三氯化铁溶液1.2ml、琼脂25g、维生素b1100mg、麦芽汁15g、蒸馏水1000ml；

(3)将黄色肉棒菌菌种转接到具有抗生素的培养基中，在23-25℃暗光下进行培养10-12天，获得经过抗生素筛选的黄色肉棒菌菌种；其中，具有抗生素的培养基的组成为：土豆200g、蛋白胨10g、酵母膏10g、葡萄糖20g、琼脂20g，灭菌分别加入1％链霉素、1％青霉素、1％庆大霉素抗生素各1ml；

(4)将步骤(3)得到的黄色肉棒菌菌种转接到pda培养基中，在20-23℃暗光下进行培养10-12天，即可。

所述步骤(1)中的对表面残余物进行处理包括清理、消毒、晾干。

所述步骤(2)中的特殊培养基的配制步骤为：土豆煮水过滤，加入琼脂融化后一次加入融化好的蛋白胨、酵母膏，再依次加入其它原料，待完全溶解后定容至1000ml，分装试管后灭菌备用。

有益效果

本发明操作简单，可进一步研制和开发潜在肉棒菌新资源食品，开创了我国潜在新资源食品肉棒菌的研制和开发利用先河。

附图说明

图1为野生黄色肉棒菌照片；

图2为黄色肉棒菌菌种照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于

本技术：
所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

1)收集生长于苔藓丛中的野生黄色肉棒菌：取采集自野外的黄色肉棒菌，并对表面残余物进行清理、消毒、晾干等处理，待进行菌种分离。

2)特殊培养基配制：特殊培养基成分为土豆200g、葡萄糖10g、乳糖10g、蛋白胨10g、酵母膏10g、氯化钾0.05g、硫酸钠0.15g、磷酸氢二钾0.5g、氯化钙0.025g、磷酸二氢氨0.25g、2％三氯化铁溶液1.2ml、琼脂25g、维生素b1100mg、麦芽汁15g、蒸馏水1000ml。配制步骤为，土豆煮水过滤，加入琼脂融化后依次加入融化好的蛋白胨、酵母膏，再依次加入其它原料，等完全溶解后定容至1000ml，分装试管后灭菌备用。

3)菌种分离：从黄色肉棒菌中部取16孢子囊，用镊子夹取接种于预先配制并灭菌的特殊培养基中，在23-25℃暗光下进行培养10天左右，初步获得黄色肉棒菌菌种。

4)纯化：把初步获得的黄色肉棒菌菌种转接到具有抗生素的培养基(组成为：土豆200g、蛋白胨10g、酵母膏10g、葡萄糖20g、琼脂20g，灭菌分别加入1％链霉素、1％青霉素、1％庆大霉素抗生素各1ml)中进行筛选纯化，在23℃暗光下进行培养10天左右，获得纯的黄色肉棒菌菌种。

5)普通培养基适应：把经过抗生素筛选的黄色肉棒菌菌种转接到普通pda培养基中，在23-25℃暗光下进行培养10天左右，获得在普通培养基上生长的黄色肉棒菌菌种。

技术特征：

技术总结
本发明涉及一种黄色肉棒菌菌种的分离纯化方法，包括：(1)采集；(2)菌种分离；(3)纯化；(4)普通培养基适应。本发明操作简单，可进一步研制和开发潜在肉棒菌新资源食品，开创了我国潜在新资源食品肉棒菌的研制和开发利用先河。

技术研发人员：李传华;张劲松;奚莉萍;陈明杰;汪虹
受保护的技术使用者：上海市农业科学院
技术研发日：2017.07.07
技术公布日：2017.10.24