一种热带假丝酵母、其制备方法以及应用与流程

本发明属于生物
技术领域：
，特别涉及一种热带假丝酵母、其制备方法以及应用。
背景技术：
核糖核酸（rna）普遍存在于动物、植物和微生物细胞内，是一种遗传物质，参与蛋白质生物合成、免疫调节等生理活动。微生物来源的核糖核酸及其降解产物核苷酸在医药、食品、保健品及农业等领域均有重要的应用价值。核糖核酸可以作为保健品，添加在膳食中，能够有效提高机体的免疫力，增加食欲，降低高血脂、高血压，改善动脉粥样硬化。核糖核酸的另外一个重要用途是制备核苷酸及其衍生物，所得核苷酸应用广泛，例如鸟苷酸能够赋予食品鲜味，常与肌苷酸、谷氨酸一起用于增强食品风味；而一些核苷酸衍生物则常作为生理、生化过程中的调节物质参与体内物质代谢。根据报道，市场对核糖核酸的需求量很大，仅国内每年的需求量就超过1000吨。目前常用于生产核糖核酸的方法是生物发酵法，最常用的生物材料是酵母。利用酵母生产核糖核酸的优点包括：酵母菌体中核糖核酸的含量普遍高于其他微生物，核糖核酸的产率高；酵母菌体收集方法简单，其核糖核酸的提取容易，所得核糖核酸的纯度高；酵母培养方法简单，成本较低；提取核糖核酸后的脱核酵母可作为优质的蛋白饲料。尽管研究报道了一些利用酵母生产核糖核酸的技术，但是目前市场上的核糖核酸仍然不能满足需求，例如，我国每年需要进口上百吨核糖核酸、核苷酸及其衍生物，这导致了目前核糖核酸、核苷酸及其衍生物的价格较高，不利于核糖核酸、核苷酸及其衍生物的推广和使用。所以还需要继续研究如何利用酵母菌高效生产核糖核酸、核苷酸及其衍生物。目前国内外研究报道，提高酵母生产核糖核酸的方法主要从三个方面考虑：第一优化酵母菌，获得高核酸酵母生产菌；第二优化发酵培养基，进一步提高核糖核酸的产量；第三是核糖核酸的分离和纯化。因为从酵母菌中分离和纯化核糖核酸的技术比较简单、成熟，所以一般从前两个方面来提高酵母生产核糖核酸，其中最为重要的是筛选高产核糖核酸的酵母菌。尽管研究报道了一些用于生产核糖核酸的酵母菌株，但是现有的酵母菌发酵产核糖核酸的量不高，所得核糖核酸仍然不能满足需求，所以急需一种高产核糖核酸的酵母菌，以提高核糖核酸的产量。技术实现要素：本发明的发明目的在于提供一种高产核糖核酸的酵母菌，本发明提供的热带假丝酵母的保藏编号为cgmccno.9085，相同发酵条件下，该热带假丝酵母显著提高了核糖核酸的产量，可以应用于制备核糖核酸、核苷酸、核苷酸衍生物和饲料。为了实现本发明的发明目的，本发明采用如下的技术方案：本发明提供了一种热带假丝酵母，其保藏编号为cgmccno.9085。本发明从19株酵母菌种中先筛选出5株产核糖核酸的酵母菌，再经过进一步筛选获得了一株高产核糖核酸酵母菌，利用rdna的内部转录间隔区(internaltranscribedspacer,its)及26srdnad1/d2区域对本发明筛选出的酵母菌进行分子鉴定，发现该菌株为热带假丝酵母，食品安全菌株。本发明提供的该热带假丝酵母菌株已于2014年04月21日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）进行生物保藏，保藏中心地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.9085。实验结果证实，本发明提供的热带假丝酵母菌核糖核酸的含量高，在发酵培养过程中菌株生长量较大、产核糖核酸性能稳定，在相同的培养条件下，显著提高了核糖核酸的产量。本发明还提供了保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在制备核糖核酸中的应用。本发明还提供了保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在制备核苷酸或核苷酸衍生物中的应用。发明提供的保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母经过发酵、提取核糖核酸，得核糖核酸，本领域技术人员可以想到和实现将所得核糖核酸继续用于制备核苷酸及其衍生物。本发明还提供了保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在制备饲料中的应用。本发明提供的保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母经过发酵、提取核糖核酸，得核糖核酸和脱核酵母，因为本发明提供的热带假丝酵母在发酵过程中菌株生长量较大，所以核糖核酸总量、蛋白质总量也大幅提高，在核糖核酸提取过程中获得的脱核酵母的总量也大幅提高，所以本领域技术人员可以想到和实现将所得脱核酵母应用于制备饲料。本发明还提供了一种保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母的发酵方法，包括：接种保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母于发酵培养基中，发酵。优选地，本发明提供的发酵方法中，发酵培养基中的碳源由甘薯渣液糖提供。本发明提供的发酵方法中用到的甘薯渣液糖为按照专利申请号201210068852.5的专利申请文件公开的方法制备获得，或者为按照专利申请号201210090800.8的申请文件公开的方法制备获得。甘薯渣液糖中的主要成分为葡萄糖，其中葡萄糖的含量在7%～9%，可作为培养基中的碳源。碳源是酵母构成体质的原料，碳元素几乎占酵母体的一半，同时又是酵母生命活动的能量，所以发酵培养基中的碳源是重要的酵母菌发酵条件优化对象之一。实验结果证实，以甘薯渣液糖作为碳源能够显著提高本发明提供的热带假丝酵母生产核糖核酸的产量，更有利于应用本发明提供的热带假丝酵母生产制备核糖核酸、核苷酸、核苷酸衍生物及饲料。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，甘薯渣液糖的制备方法包括以下步骤（即专利授权号为zl201210068852.5的专利申请文件记载的利用甘薯渣制糖制备甘薯渣液糖的方法）：步骤1：将干燥的甘薯渣粉碎后与甘薯淀粉废水混合或用湿渣，调ph值为5.5～8.0，得混合料液；步骤2：步骤1所得混合料液加耐高温淀粉酶在90～105℃或中温淀粉酶在60～90℃保温至i2液测试混合料液变红；调ph为3.0～5.5，加糖化酶、酸性蛋白酶和纤维素酶在40～65℃保温至检测还原糖浓度不再升高，进行灭酶处理；步骤3：对料液进行固液分离，液体浓缩即得甘薯渣液糖，其成分基本为葡萄糖。在本发明的另外一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，甘薯渣液糖的制备方法包括以下步骤（即专利授权号为zl201210090800.8的专利申请文件记载的利用甘薯渣制糖制备甘薯渣液糖的方法）：步骤1：取甘薯渣粉碎或磋磨湿渣，加甘薯淀粉废水调浆；调浆料ph4.0～6.0，在20～70℃，加纤维素酶和加β-葡聚糖酶水解2～10h；步骤2：在25～60℃，ph3.5～6.0加木聚糖酶和果胶酶水解2～10h；温度30～50℃，ph2.5～6.0，加酸性蛋白酶水解1～8h；升温110～120℃，30min进行灭酶处理；调ph5.5～8.0，加耐高温α-淀粉酶或中温α-淀粉酶水解1～2h；降温40～65℃，调ph3.0～5.5，加糖化酶水解10～20h；步骤3：对料液讲行固液分离，液体浓缩即得甘薯渣液糖，其成分基本为葡萄糖。优选地，本发明提供的发酵方法中，以g/ml计，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖7°～9°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.02%～0.03%硫酸镁0.01%～0.03%尿素0.1%～0.2%酵母粉0.05%～0.15%水余量。更为优选地，本发明提供的发酵方法中，以g/ml计，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖7°～9°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.025%硫酸镁0.02%尿素0.15%酵母粉0.1%水余量。在本发明的一些实施例中，以g/ml计，本发明提供的发酵方法中所用的发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.025%硫酸镁0.02%尿素0.15%酵母粉0.1%水余量。优选地，本发明提供的发酵方法中的发酵培养基的ph值为4.5～5.5。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，发酵培养基的ph值为5.0。优选地，本发明提供的发酵方法中，发酵时间为10h～20h。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，发酵时间为12h。优选地，本发明提供的发酵方法中，发酵温度为26℃～30℃。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，发酵温度为28℃。优选地，本发明提供的发酵方法中，所用摇床的转速为180r/min～220r/min。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，所用摇床的转速为200r/min。优选地，在本发明提供的发酵方法中，接种之前还包括扩大培养热带假丝酵母的步骤，具体为：取保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母，接种于种子培养基中，于26℃～30℃扩大培养20h～28h。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，扩大培养的温度为28℃。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，扩大培养的时间为24h。优选地，以g/ml计，本发明提供的发酵方法中，种子培养基包括以下组分：蛋白胨1.5%～2.5%葡萄糖0.5%～1.5%酵母粉1%～3%水余量。在本发明的一些实施例中，以g/ml计，本发明提供的发酵方法中，种子培养基包括以下组分：蛋白胨2%葡萄糖1%酵母粉2%水余量。优选地，本发明提供的发酵方法中，扩大培养所用摇床的转速为180r/min～220r/min。在本发明的一些实施例中，本发明提供的发酵方法中，扩大培养所用摇床的转速为200r/min。本发明还提供了一种利用保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母制备核糖核酸的方法，包括：接种保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母于发酵培养基中发酵，收集菌体，提取核糖核酸，即得。优选地，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵培养基中的碳源由甘薯渣液糖提供。优选地，以g/ml计，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖7°～9°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.02%～0.03%硫酸镁0.01%～0.03%尿素0.1%～0.2%酵母粉0.05%～0.15%余量水。更为优选地，以g/ml计，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖7°～9°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.025%硫酸镁0.02%尿素0.15%酵母粉0.1%余量水。优选地，以g/ml计，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.025%硫酸镁0.02%尿素0.15%酵母粉0.1%水余量。优选地，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵培养基的ph值为4.5～5.5。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵培养基的ph值为5.0。优选地，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵的时间为10h～20h。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵的时间为12h。优选地，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵的温度为26℃～30℃。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵的温度为28℃。优选地，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵所用摇床的转速为180r/min～220r/min。在本发明提供的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，发酵所用摇床的转速为220r/min。优选地，在本发明提供的制备核糖核酸的方法中，接种之前还包括扩大培养热带假丝酵母的步骤，具体为：取保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母，接种于种子培养基中，于26℃～30℃扩大培养20h～28h。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，扩大培养的温度为28℃。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，扩大培养的时间为24h。优选地，以g/ml计，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，种子培养基包括以下组分：蛋白胨1.5%～2.5%葡萄糖0.5%～1.5%酵母粉1%～3%水余量。在本发明的一些实施例中，以g/ml计，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，种子培养基包括以下组分：蛋白胨2%葡萄糖1%酵母粉2%水余量。优选地，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，扩大培养所用摇床的转速为180r/min～220r/min。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备核糖核酸的方法中，扩大培养所用摇床的转速为200r/min。本发明还提供了一种利用保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母制备饲料的方法，包括：接种保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母于发酵培养基中发酵，收集菌体，提取核糖核酸，收集脱核酵母，干燥，即得。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵培养基中的碳源由甘薯渣液糖提供。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，以g/ml计，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖7°～9°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.02%～0.03%硫酸镁0.01%～0.03%尿素0.1%～0.2%酵母粉0.05%～0.15%水余量。更为优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，以g/ml计，发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖7°～9°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.025%硫酸镁0.02%尿素0.15%酵母粉0.1%水余量。在本发明的一些实施例中，以g/ml计，本发明提供的制备饲料的方法中所用的发酵培养基包括以下组分：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）磷酸二氢钾0.025%硫酸镁0.02%尿素0.15%酵母粉0.1%水余量。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵培养基的ph值为4.5～5.5。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵培养基的ph值为5.0。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵时间为10h～20h。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵时间为12h。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵温度为26℃～30℃。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，发酵温度为28℃。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，所用摇床的转速为180r/min～220r/min。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，所用摇床的转速为200r/min。优选地，在本发明提供的制备饲料的方法中，接种之前还包括扩大培养热带假丝酵母的步骤，具体为：取保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母，接种于种子培养基中，于26℃～30℃扩大培养20h～28h。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，扩大培养的温度为28℃。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，扩大培养的时间为24h。优选地，以g/ml计，本发明提供的制备饲料的方法中，种子培养基包括以下组分：蛋白胨1.5%～2.5%葡萄糖0.5%～1.5%酵母粉1%～3%水余量。在本发明的一些实施例中，以g/ml计，本发明提供的制备饲料的方法中，种子培养基包括以下组分：蛋白胨2%葡萄糖1%酵母粉2%水余量。优选地，本发明提供的制备饲料的方法中，扩大培养所用摇床的转速为180r/min～220r/min。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备饲料的方法中，扩大培养所用摇床的转速为200r/min。本发明提供了一种热带假丝酵母、其制备方法以及应用，本发明提供的热带假丝酵母的保藏编号为cgmccno.9085。本发明提供的热带假丝酵母中核糖核酸的含量高、发酵培养过程中菌株生长量较大、产核糖核酸性能稳定，实验结果证实，在相同的培养条件下，显著提高了核糖核酸的产量，可以应用于制备核糖核酸、核苷酸、核苷酸衍生物和饲料。附图说明图1示实施例1中各个菌株的发酵生长曲线，其中曲线1代表1号菌株；曲线2代表2号菌株；曲线3代表3号菌株；曲线4代表4号菌株；曲线5代表5号菌株；图2示实施例1中各个菌株发酵原液中核糖核酸的含量与发酵时间之间的关系图，其中曲线1代表1号菌株；曲线2代表2号菌株；曲线3代表3号菌株；曲线4代表4号菌株；曲线5代表5号菌株；图3示实施例2中用到的甘薯渣液糖hplc检测结果，图中曲线a为甘薯渣液糖检测曲线、其中1杂质峰、2示四糖峰、3示三糖峰、4示二糖峰、5示葡萄糖峰、6示乙醇（以6种单糖和3种二糖、三糖、四糖的标准品为对照）；曲线b为葡萄糖标准品检测曲线、其中7示葡萄糖峰；图4示实施例3中酵母干重与菌液od620nm关系的标准曲线；图5示实施例4中两个组别酵母菌发酵生长曲线；其中曲线1代表实验组，曲线2代表对照组；图6示实施例4中两个组别核糖核酸随发酵时间的变化曲线；其中曲线1代表实验组、曲线2代表对照组；图7示实施例4中两个组别酵母中核糖核酸的质量百分含量随发酵时间的变化曲线；其中曲线1代表实验组、曲线2代表对照组；图8示实施例5中各个组别酵母菌发酵生长曲线，其中曲线1代表实验组1，曲线2代表实验组2，曲线3代表实验组3、曲线4代表实验组4、曲线5代表实验组5、曲线6代表实验组6；图9示实施例5中各个组别核糖核酸含量随发酵时间的变化曲线，其中曲线1代表实验组1，曲线2代表实验组2，曲线3代表实验组3、曲线4代表实验组4、曲线5代表实验组5、曲线6代表实验组6；图10示实施例5中各个组别酵母中核糖核酸的质量百分含量随发酵时间的变化曲线，其中曲线1代表实验组1，曲线2代表实验组2，曲线3代表实验组3、曲线4代表实验组4、曲线5代表实验组5、曲线6代表实验组6。具体实施方式本发明公开了一种热带假丝酵母、其制备方法以及应用。本领域技术人员可以参考本文内容，获得该热带假丝酵母，实现其应用，特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明的制备方法及应用已经通过较佳的实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文制备方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供的一种热带假丝酵母、其制备方法以及应用中所用到的试剂和原料均可由市场购得。为了使本
技术领域：
的技术人员能够更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1菌种筛选菌株来源：自行筛选，获得一株未知酵母菌，编号为1号菌株。将1号菌株和另外18株菌株进行筛选，从这19株酵母菌种中先经过初筛筛选出产核糖核酸量较高的5株酵母菌，分别为：1号菌株；2号菌株：购买于中国农业微生物菌种保藏管理中心菌株（命名为hy3）；3号菌株：购买于中国普通微生物保藏管理中心菌株（命名为hy5）；4号菌株：购买于中国工业微生物保藏管理中心菌株（命名为hy7）；5号菌株：购买于中国林业微生物保藏管理中心菌株（命名为hy17）。之后对这5株酵母菌进行进一步筛选。分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖2%、酵母粉2%，磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.1％余量的水，ph5.0，121℃灭菌20min。发酵方法：将1号酵母菌至5号酵母菌分别在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在28℃的条件下扩大培养24小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为200r/min；将所得种子液接种于含发酵培养基的发酵瓶中（每个发酵瓶中培养基的体积为发酵瓶体积的10%，即500ml的发酵瓶中装有50ml发酵培养基；以体积百分比计，接种量为1%），摇床的转速为200r/min，在28℃条件下发酵，分别于6h、12h、24h、36h取样，绘制发酵生长曲线；分别于12h、24h、36h取样，提取核糖核酸，测定发酵原液中核糖核酸的含量，以原液中核糖核酸的含量对时间作图，绘制发酵原液核糖核酸含量与发酵时间对应曲线。酵母菌发酵生长曲线的绘制方法：在不同发酵时间点取样，每次取40μl发酵液，加入160μl蒸馏水，混匀后用酶标仪在620nm波长下测od值，以od620nm对发酵时间作图绘制酵母菌发酵生长曲线。核糖核酸的提取方法为高氯酸法，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，取上清，即得核糖核酸提取液。核糖核酸的测量方法为：取2μl提取的核糖核酸提取液用ge公司的nanovue仪器测定核糖核酸的含量（μg/ml）。1号酵母菌至5号酵母菌的发酵生长曲线见图1，其中曲线1代表1号菌株；曲线2代表2号菌株；曲线3代表3号菌株；曲线4代表4号菌株；曲线5代表5号菌株。从图1可知，相同培养条件下1号菌株的生长量最大，与其他组别相比，差异显著（p＜0.05）。各个菌株发酵原液中核糖核酸的含量与发酵时间之间的关系见图2，其中曲线1代表1号菌株；曲线2代表2号菌株；曲线3代表3号菌株；曲线4代表4号菌株；曲线5代表5号菌株。由图2可知，随着发酵时间的延长，各个菌株的发酵液中核糖核酸的含量逐渐增大；在12h-24h发酵时间内（工业生产中酵母收护期一般为13h，为了适应工业化大生产，此处仅考虑这一段时间之内不同组别酵母产核糖核酸的量），相同发酵时间，1号菌株发酵液中核糖核酸的含量最高（与其他菌株相比，差异显著p＜0.05）。结合图1和图2可知，在相同的培养条件下，1号菌株的生长量最大，产核糖核酸的量最大，且与其他菌株相比具有显著差异（p＜0.05），更适合工业化大生产制备核糖核酸。利用rdna的内部转录间隔区(internaltranscribedspacer,its)及26srdnad1/d2区域对1号菌株进行分子鉴定，发现该菌株为热带假丝酵母，食品安全菌株。将1号菌株，筛选出的酵母菌进行分子鉴定，发现该菌株为热带假丝酵母，食品安全菌株。将1号菌株于2014年04月21日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）进行生物保藏，保藏中心地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.9085。实施例2培养条件筛选实验甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210068852.5的专利申请文件公开的方法制备获得。经中国农科院生物技术所hplc：该甘薯渣液糖主要成分为葡萄糖。hplc分析条件：sugar-paktmi为分离柱、标准品为葡萄糖标准品，所得结果见图3，图中曲线a为甘薯渣液糖检测曲线、其中1杂质峰、2示四糖峰、3示三糖峰、4示二糖峰、5示葡萄糖峰、6示乙醇（以6种单糖和3种二糖、三糖、四糖的标准品为对照）；曲线b为葡萄糖标准品检测曲线、其中7示葡萄糖峰。由鉴定结果可知，甘薯渣液糖产品的峰主要有6个，主峰为葡萄糖；通过对色谱峰2-5进行积分计算，可以知道，葡萄糖含量约占四种糖总含量的95.9%，纯度较高，可以作为碳源应用于配置培养基。实施例3本发明提供的培养基效果实验实验材料：分离培养基平板的配置方法、种子培养基的配置方法与实施例1中提供的方法相同。发酵培养基1（以g/ml计）：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，108℃灭菌30min，其中甘薯渣液糖的来源与实施例2中记载的甘薯渣液糖的制备方法相同。发酵培养基2（通用培养基），以g/ml计：蛋白胨0.35%、酵母粉0.30%、硫酸镁0.10%、蔗糖10%、ph5.0，121℃灭菌20min。实验分为两组，实验组和对照组，每组3个平行，两组所用菌株均为保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母，实验组所用的发酵培养基为发酵培养基1，对照组所用的发酵培养基为发酵培养基2，其他条件相同。发酵方法：将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在28℃的条件下扩大培养24小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为200r/min；将所得种子液分别接种于含发酵培养基的发酵瓶中（每个发酵瓶中培养基的体积为发酵瓶体积的10%，即，500ml的发酵瓶中装有50ml发酵培养基；以体积百分比计，接种量为1%），摇床的转速为150r/min，在30℃条件下发酵24h，测定两个组别的菌液od620nm与发酵原液中核糖核酸的含量，计算获得两个组别的酵母中核糖核酸的质量百分含量。核糖核酸的提取方法为高氯酸法，具体方法与实施例1中记载的方法相同；核糖核酸的测量方法与实施例1中记载的方法相同。酵母干重与菌液od620nm关系的标准曲线绘制：按照相同的培养方法，用发酵培养基1培养保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母菌，取100ml发酵所得发酵液，将所得酵母发酵液8000r/min离心10min，取上清液倒入烧杯中备用。取50ml的上清液把所有菌体混合均匀，制备成约3g/100ml的菌液（此时测稀释5倍后的od620nm在1-2之间），进一步配置十个浓度梯度的菌液用于标准曲线的绘制：每个浓度的样品的溶液的组成见表1，其中每个浓度的样品两个平行。将每个浓度的样品混匀后稀释5倍测od620nm，两个平行取平均值，原液od620nm为该数值的5倍，所得数值见表2。将每个浓度的样品8000r/min离心倾去上清夜，把沉淀分别用ml水洗入相应编号的水分瓶中，在105℃烘箱内烘至恒，称量各个样品的重量，2个平行取平均值，所得检测结果见表2。表1每个离心管中溶液的组成样品12345678910加菌量（ml）2468101214161820加水量(ml)181614121086420表2酵母干重与菌液od620nm之间的关系样品稀释5倍后od620nm原液od620mn干重（g）干重（mg/ml）10.20051.00250.01440.7220.37651.88250.03311.65530.53352.66750.050452.522540.659753.298750.06723.3650.740253.701250.08654.32560.893754.468750.10355.17570.9754.8750.118955.947581.078755.393750.13426.7191.1775.8850.12697.245101.24056.20250.15967.98根据表2中数据，以酵母烘干干重对酵母发酵液原液od620nm作图，得酵母干重与酵母菌液od620nm的标准曲线，见图4，所得标准曲线回归方程为：y=1.4154x-1.0094，r2=0.9939。核糖核酸在酵母中的质量百分含量的计算方法：根据测得的酵母菌液的od620nm、酵母干重与酵母菌液od620nm关系的标准曲线回归方程即可获得某个样品中酵母的干重质量体积浓度。然后，根据样品中酵母干重质量体积浓度和测得的核糖核酸的浓度，可计算获得核糖核酸占酵母干重的质量百分比，即酵母核糖核酸在酵母中的质量百分含量，计算公式如下：核糖核酸在酵母中的质量百分含量（%）=（核糖核酸浓度÷酵母干重重量浓度）×100%按照上述方法分别测定两个组别的菌液od620nm与发酵原液中核糖核酸的含量，计算获得两个组别的酵母中核糖核酸的质量百分含量，见表3。表3实验组和对照组酵母中核糖核酸的质量百分含量组别核糖核酸的质量百分含量实验组8.35%对照组6.87%根据实验结果可知，实验组与对照组之间的核糖核酸的质量百分含量差异显著（p＜0.05），说明发酵培养基1能够有效提高保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母核糖核酸的产量，可以应用于该热带假丝酵母发酵生产核糖核酸。实施例4本发明提供的热带假丝酵母菌在本发明提供的培养基中培养后生产核糖核酸实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min。其中甘薯渣液糖的来源与实施例2中记载的甘薯渣液糖的制备方法相同。实验分为两组，实验组和对照组，每组3个平行，实验组所用的菌株为保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母；对照组所用的菌株为高核酸热带假丝酵母菌（该菌株的来源为自行购买中国普通微生物保藏管理中心），两组的培养条件相同。发酵方法：将实验组和对照组菌株分别在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在28℃的条件下扩大培养24小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为200r/min；将所得种子液接种于含发酵培养基的发酵瓶中（每个发酵瓶中培养基的体积为发酵瓶体积的10%，即，500ml的发酵瓶中装有50ml发酵培养基；以体积百分比计，接种量为1%），摇床的转速为200r/min，在28℃条件下发酵，分别于6h、8h、10h、12h、24h、30h、36h取样，绘制酵母菌发酵生长曲线；分别于6h、8h、10h、12h、24h、30h、36h取样，测定不同发酵时间所对应的发酵液中核糖核酸的含量；分别计算12h、24h、30h、36h所对应的酵母中核糖核酸的质量百分含量。酵母菌发酵生长曲线的绘制方法与实施例1记载的方法相同。核糖核酸的提取方法为高氯酸法，具体方法与实施例1中记载的方法相同；核糖核酸的测量方法与实施例1中记载的方法相同。酵母中核糖核酸的质量百分含量计算方法与实施例3中记载的方法相同。两个组别的发酵液od620nm测定结果见表4，发酵原液中核糖核酸含量测定结果见表5，酵母中核糖核酸的质量百分含量见表6。两个组别酵母菌发酵生长曲线见图5，其中曲线1代表实验组，曲线2代表对照组；两个组别核糖核酸随发酵时间的变化曲线见图6，其中曲线1代表实验组、曲线2代表对照组；两个组别酵母中核糖核酸的质量百分含量随发酵时间的变化曲线见图7，其中曲线1代表实验组、曲线2代表对照组。表4两个组别的发酵液od620nm测定结果表5两个组别的发酵液中的核糖核酸测定结果（μg/ml）表6两个组别的酵母中核糖核酸的质量百分含量(%)实施例5本发明提供的热带假丝酵母产核糖核酸重现性实验实验材料：分离培养基平板的配置方法、种子培养基的配置方法与实施例1中提供的方法相同。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，108℃灭菌30min，其中的甘薯渣液糖的来源与实施例2中的甘薯渣液糖的制备方法相同。发酵方法：取保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母，在分离培养基平板中划线，挑取3个单菌落分别接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在28℃的条件下扩大培养24小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为200r/min；将所得种子液接种于含发酵培养基的发酵瓶中（每个发酵瓶中培养基的体积为发酵瓶体积的10%，即，500ml的发酵瓶中装有50ml发酵培养基；以体积百分比计，接种量为1%），摇床的转速为200r/min，在28℃条件下发酵，分别在6h、8h、10h、12h、24h、30h、36h取样，测定发酵液中od620nm、测定发酵液中的核糖核酸含量、计算8h、10h、12h、24h、30h、36h所对应的酵母中核糖核酸的质量百分含量。共重复进行6次，分别标记为实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、实验组5和实验组6。酵母菌发酵生长曲线的绘制方法与实施例1中记载的方法相同。核糖核酸的提取方法为高氯酸法，具体方法与实施例1中记载的方法相同；核糖核酸的测量方法与实施例1中记载的方法相同。核糖核酸在酵母中的质量百分含量的计算方法与实施例3中记载的方法相同。各个组别的发酵液od620nm测定结果见表7，发酵原液中核糖核酸的含量测定结果见表8，酵母中核糖核酸的质量百分含量见表9。各个组别酵母菌发酵生长曲线见图8，其中曲线1代表实验组1，曲线2代表实验组2，曲线3代表实验组3、曲线4代表实验组4、曲线5代表实验组5、曲线6代表实验组6；各个组别核糖核酸随发酵时间的变化曲线见图9，其中曲线1代表实验组1，曲线2代表实验组2，曲线3代表实验组3、曲线4代表实验组4、曲线5代表实验组5、曲线6代表实验组6；各个组别酵母中核糖核酸的质量百分含量随发酵时间的变化曲线见图10，其中曲线1代表实验组1，曲线2代表实验组2，曲线3代表实验组3、曲线4代表实验组4、曲线5代表实验组5、曲线6代表实验组6。表7各个组别的发酵液od620nm测定结果表8各个组别的发酵液中的核糖核酸测定结果（μg/ml）表9各个组别的酵母中核糖核酸的质量百分含量(%)根据上述实验结果可知，实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、实验组5和实验组6的实验结果类似，无显著差异（p＞0.05），说明本发明提供的保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母发酵生产核糖核酸的重现性好，可以应用于制备核糖核酸、核苷酸、核苷酸衍生物和饲料。实施例6利用本发明提供的热带假丝酵母制备核糖核酸实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min，其中的甘薯渣液糖的来源与实施例2中的甘薯渣液糖的制备方法相同。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在28℃的条件下扩大培养24小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为200r/min；取2ml所得种子液接种于含200ml发酵培养基的2000ml的发酵瓶中，摇床的转速为200r/min，在28℃条件下发酵12h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体，取所得30g菌体，采用高氯酸方法提取其中的核糖核酸，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，取上清，即得核糖核酸提取液。对所得提取液进行定量和定性检测，采用比色方法对所得提取液进行定性检测，得所得提取液中含有核糖核酸，其纯度为90.21％，其中核糖核酸的含量为8.400％。说明本发明提供保藏编号cgmccno.的热带假丝酵母可以用于制备核糖核酸。实施例7利用本发明提供的热带假丝酵母制备核糖核酸实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨1.5%、葡萄糖0.5%、酵母粉1%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖7°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.02%、硫酸镁0.01%、尿素0.1%、酵母粉0.05%，ph4.5，121℃灭菌20min。甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210090800.8的专利申请文件公开的方法制备获得，利用中国农科院生物技术所hplc分析对所得甘薯渣液糖进行分析。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在30℃的条件下扩大培养20小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为220r/min；取2ml所得种子液接种于含200ml发酵培养基的2000ml的发酵瓶中，摇床的转速为220r/min，在30℃条件下发酵10h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体，取所得30g菌体，采用高氯酸方法提取其中的核糖核酸，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，取上清，即得核糖核酸提取液。对所得提取液进行定量和定性检测，采用比色方法对所得提取液进行定性检测，得所得提取液中含有核糖核酸，其纯度为90.51％，其中核糖核酸的含量为8.690％。说明本发明提供保藏编号cgmccno.9085的热带假丝酵母可以用于制备核糖核酸。实施例8利用本发明提供的热带假丝酵母制备核糖核酸实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉3%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖9°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.03%、尿素0.2%、酵母粉0.15%，ph5.5，121℃灭菌20min。甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210090800.8的专利申请文件公开的方法制备获得，利用中国农科院生物技术所hplc分析对所得甘薯渣液糖进行分析。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在26℃的条件下扩大培养28小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为180r/min；取1ml所得种子液接种于含100ml发酵培养基的1000ml的发酵瓶中，摇床的转速为180r/min，在26℃条件下发酵20h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体。取所得30g菌体，采用高氯酸方法提取其中的核糖核酸，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，取上清，即得核糖核酸提取液。对所得提取液进行定量和定性检测，采用比色方法对所得提取液进行定性检测，得所得提取液中含有核糖核酸，其纯度为89.98％，其中核糖核酸的含量为8.310％。说明本发明提供保藏编号cgmccno.9085的热带假丝酵母可以用于制备核糖核酸。实施例9利用本发明提供的热带假丝酵母制备核糖核酸实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨1.5%、葡萄糖0.5%、酵母粉1%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖9°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min，其中的甘薯渣液糖的来源与实施例2中的甘薯渣液糖的制备方法相同。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在30℃的条件下扩大培养20小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为220r/min；取2ml所得种子液接种于含200ml发酵培养基的2000ml的发酵瓶中，摇床的转速为220r/min，在30℃条件下发酵10h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体，取所得30g菌体，采用高氯酸方法提取其中的核糖核酸，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，取上清，即得核糖核酸提取液。对所得提取液进行定量和定性检测，采用比色方法对所得提取液进行定性检测，得所得提取液中含有核糖核酸，其纯度为89.81％，其中核糖核酸的含量为8.721％。说明本发明提供保藏编号cgmccno.9085的热带假丝酵母可以用于制备核糖核酸。实施例10利用本发明提供的热带假丝酵母制备核糖核酸实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉3%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖7°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min。甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210090800.8的专利申请文件公开的方法制备获得，利用中国农科院生物技术所hplc分析对所得甘薯渣液糖进行分析。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在26℃的条件下扩大培养28小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为180r/min；取1ml所得种子液接种于含100ml发酵培养基的1000ml的发酵瓶中，摇床的转速为180r/min，在26℃条件下发酵20h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体。取所得30g菌体，采用高氯酸方法提取其中的核糖核酸，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，取上清，即得核糖核酸提取液。对所得提取液进行定量和定性检测，采用比色方法对所得提取液进行定性检测，得所得提取液中含有核糖核酸，其纯度为90.01％，其中核糖核酸的含量为8.270％。说明本发明提供保藏编号cgmccno.9085的热带假丝酵母可以用于制备核糖核酸。实施例11利用本发明提供的热带假丝酵母制备饲料实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖8°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min，其中的甘薯渣液糖的来源与实施例2中的甘薯渣液糖的制备方法相同。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在28℃的条件下扩大培养24小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为200r/min；取2ml所得种子液接种于含200ml发酵培养基的2000ml的发酵瓶中，摇床的转速为200r/min，在28℃条件下发酵12h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体，取所得30g菌体，采用高氯酸方法制备饲料，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，分离上清，即得脱核蛋白饲料。实施例12利用本发明提供的热带假丝酵母制备饲料实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨1.5%、葡萄糖0.5%、酵母粉1%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖7°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.02%、硫酸镁0.01%、尿素0.1%、酵母粉0.05%，ph4.5，121℃灭菌20min。甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210090800.8的专利申请文件公开的方法制备获得，利用中国农科院生物技术所hplc分析对所得甘薯渣液糖进行分析。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在30℃的条件下扩大培养20小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为220r/min；取2ml所得种子液接种于含200ml发酵培养基的2000ml的发酵瓶中，摇床的转速为220r/min，在30℃条件下发酵10h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体，取所得30g菌体，采用高氯酸方法制备饲料，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，分离上清，即得脱核蛋白饲料。实施例13利用本发明提供的热带假丝酵母制备饲料实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉3%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖9°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.03%、尿素0.2%、酵母粉0.15%，ph5.5，121℃灭菌20min。甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210090800.8的专利申请文件公开的方法制备获得，利用中国农科院生物技术所hplc分析对所得甘薯渣液糖进行分析。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在26℃的条件下扩大培养28小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为180r/min；取1ml所得种子液接种于含100ml发酵培养基的1000ml的发酵瓶中，摇床的转速为180r/min，在26℃条件下发酵20h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体。取所得30g菌体，采用高氯酸方法制备饲料，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，分离上清，即得脱核蛋白饲料。实施例14利用本发明提供的热带假丝酵母制备饲料实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，108℃灭菌30min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨1.5%、葡萄糖0.5%、酵母粉1%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖9°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min，其中的甘薯渣液糖的来源与实施例2中的甘薯渣液糖的来源相同。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有3ml种子培养基），在30℃的条件下扩大培养20小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为220r/min；取2ml所得种子液接种于含200ml发酵培养基的2000ml的发酵瓶中，摇床的转速为220r/min，在30℃条件下发酵10h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体，取所得30g菌体，采用高氯酸方法制备饲料，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，分离上清，即得脱核蛋白饲料。实施例15利用本发明提供的热带假丝酵母制备饲料实验材料：分离培养基平板（以g/ml计）：蛋白胨2%、葡萄糖1%、酵母粉2%、琼脂糖1.5%、余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。种子培养基（以g/ml计）：蛋白胨2.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉3%，余量的水，ph自然，121℃灭菌20min。发酵培养基（以g/ml计）：甘薯渣液糖7°（以葡萄糖的糖度表示）、磷酸二氢钾0.025%、硫酸镁0.02%、尿素0.15%、酵母粉0.1%，ph5.0，121℃灭菌20min。甘薯渣液糖：按照专利授权号zl201210090800.8的专利申请文件公开的方法制备获得，利用中国农科院生物技术所hplc分析对所得甘薯渣液糖进行分析。将保藏编号为cgmccno.9085的热带假丝酵母在分离培养基平板中划线，挑取单菌落接种于试管中（试管中培养基为种子培养基，每个试管中装有2ml种子培养基），在26℃的条件下扩大培养28小时作为种子液，扩大培养过程中摇床的转速为180r/min；取1ml所得种子液接种于含100ml发酵培养基的1000ml的发酵瓶中，摇床的转速为180r/min，在26℃条件下发酵20h后，收集所有发酵液，于4000r/min，离心10min，弃去上清液，收集菌体，用100ml生理盐水洗涤所得菌体，共洗涤两次，离心后，收集菌体。取所得30g菌体，采用高氯酸方法制备饲料，具体为：在不同的发酵时间，吸取2ml发酵液，于4000r/min离心10min，弃去上清液，用生理盐水洗涤菌体2次离心后，再加1ml生理盐水在振荡器上混匀后，再加1ml10%的高氯酸混匀盖好盖后，70℃水浴保温20min（每5min振荡一次）、再于10000r/min离心5min，分离上清，即得脱核蛋白饲料。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12