本发明涉及从包含因子VIII蛋白和血管性血友病因子蛋白的第一组合物中，特别是血浆中，分离因子VIII的方法，并涉及方法产品，即具有减少量的FVIII和/或FVIII/vWF复合物的血液产品。发明背景血友病是一组遗传性遗传疾病，其损害身体控制血液凝结或凝固的能力。在其最常见的形式血友病A中，凝固因子VIII(FVIII)是缺乏的，血友病A在每5,000至10,000个男性新生儿中发生1例。FVIII蛋白是血液凝固中的必需辅助因子，具有多功能特性。可以用源自血浆的FVIII浓缩物或用重组产生的FVIII治疗FVIII缺乏。用FVIII浓缩物治疗的血友病患者可正常生活。历史上，血友病A已经用源自人血浆的FVIII治疗。在血浆中，在正常条件下，FVIII分子总是与其辅因子血管性血友病因子(vWF)结合，所述辅因子使FVIII分子稳定免于不同形式的变性。已经描述了许多方法用于从血浆或重组产生因子VIII(rFVIII)的培养物中纯化因子VIII，存在或不存在血管性血友病因子。通常，具有少量vWF的纯化的FVIII产物含有添加的人白蛋白和/或其他稳定剂(包括钙离子和增加的盐浓度)以稳定FVIII分子。用于从血浆中纯化FVIII的方法通常是不同沉淀方法的组合，例如低温沉淀，氢氧化铝沉淀等，以及色谱步骤，主要是离子交换、亲和以及凝胶过滤步骤。为了改进FVIII产物，使用亲和色谱法，其有效地将污染物移除从而高度纯度FVIII，还包括降低vWF的可能(Farrugia等，1993)。在90年代，第一种重组FVIII(rFVIII)产品在市场上销售，分为全长rFVIII分子，模拟血浆中FVIII的主要形式，以及B结构域缺失的rFVIII分子(Eriksson等，2001)，其中一个非活性部分(B-结构域)已被除去，这两者都具有高纯度(均不含vWF)。rFVIII也通过几个纯化步骤纯化，包括亲和色谱，如WO2009/156430和McCue等，2009所述。这些文献公开了使用亲和色谱步骤纯化重组产生的因子VIII(不存在血管性血友病因子)，使用基于非动物衍生的Fab片段的亲和树脂，其中13kD配体结合至因子VIII的轻链(参见Winge等，2015)。生物活性因子VIII可以用不同的体外分析方法(FVIII：C)测量，例如FVIII生色测定和/或一阶段凝块测定(Girma等，1998)。生色测定法是两阶段光度测定法，其测量因子VIII作为FIXa的辅因子的生物活性。在该方法中，FX在钙离子和磷脂的存在下被FIXa活化为FXa。形成的FXa将生色底物切割成产物，其可以通过分光光度法定量。一阶段凝块测定基于含有因子VIII的样品在磷脂、接触活化剂和钙离子存在下校正缺乏因子VIII的血浆的凝固时间的能力。在一步中测量出现纤维蛋白凝块的时间。为了测试rFVIII或纯化的FVIII样品，通常使用先天性FVIII缺乏型血浆，例如来自Helena生物科学公司的固有“因子VIII缺乏血浆(先天性)”。然而，这些先天性血浆的可用性是有限的，因为它来自血友病A患者，因此这些血浆的量是有限的。还可以通过从正常血浆中去除FVIII来产生FVIII缺乏型血浆，即使用对FVIII/vWF复合物特异的抗体从血浆中去除FVIII/vWF复合物，所述抗体通常是针对FVIII的亲和配体，其不受vWF至FVIII的结合的干扰。示例是的AffinityBioogicalsTM公司的因子VIII缺乏型血浆。技术实现要素：本发明基于但不限于以下令人惊讶的发现：对FVIII轻链特异的配体，特别是以名称“VIIISelect”出售的基于Fab片段的亲和树脂，在限定条件下有效地结合至FVIII和vWF的复合物。本发明人能够确定结合的特定最佳条件。因此，根据第一方面，本发明提供了从包含因子VIII(FVIII)蛋白和vWF蛋白的第一组合物中分离FVIII蛋白的方法，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中所述FVIII蛋白可以与所述vWF蛋白形成复合物，所述方法包括以下步骤：-使所述第一组合物与包含配体和基质的亲和树脂接触，其中所述配体对FVIII的轻链具有亲和力，和-将所述亲和树脂与混合物分离，得到第二组合物和改性的第一组合物，其中第二组合物含有所述亲和树脂、FVIII以及所述FVIII蛋白与所述vWF蛋白的复合物。重要的是，不仅FVIII与配体结合。本发明人已经确定了FVIII与vWF复合的结合条件，因此可以将FVIII/vWF复合物与血液产品，特别是血浆分离。因此，根据第二方面，本发明提供了一种用于生产改性的血液产品的方法，包括以下步骤：-提供包含血液产品，特别是血浆的第一组合物；-根据本发明的第一方面进行FVIII的分离；和-收集改性的血液产品。因此，在第三方面，本发明提供了通过根据第二方面的方法获得的经改性的血浆，其中FVIII的浓度小于健康人类供体的血浆的平均FVIII浓度的4％。具有减少量的FVIII的改性的血浆，特别是FVIII缺乏型血浆，可用于治疗疾病或病症，例如弥散性血管内凝血(DIC)或败血症。因此，根据第四方面，本发明提供用于治疗的改性的血浆，其中所述改性的血浆根据本发明第三方面定义。然而，根据第三方面的改性的血液产品的替代应用是在FVIII样品的分析测试中的应用。基于此，根据第五方面，本发明提供了改性的血液产品，特别是根据本发明的第三方面的改性的血浆用于测试样品中FVIII的浓度和/或活性的用途。根据第一方面的分离方法不仅可用于从血液产品样品中分离血液衍生的FVIII，而且还可用于纯化FVIII，vWF或其复合物。因此，根据第六方面，本发明提供了纯化或富集FVIII蛋白、vWF蛋白或FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物的方法，包括以下步骤：-提供包含FVIII蛋白和vWF蛋白的第一组合物，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中FVIII蛋白可与vWF蛋白形成复合物，-进行根据第一方面的分离方法；-任选地对第二组合物进行至少一个洗涤步骤，其中第二组合物含有亲和树脂和FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物；和-任选地洗脱包含vWF的第三组合物，特别是用包含CaCl2的洗脱缓冲液洗脱；和-从亲和树脂中洗脱第四组合物，其包含FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物或FVIII蛋白。最后，根据第七方面，本发明提供了一种组合物，其包含通过根据第六方面的方法获得的FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物或纯化的FVIII蛋白，或纯化的vWF蛋白。附图说明图1显示了分批吸附图，测量了在用亲和树脂VIIISelect经过不同孵育时间后血浆中FVIII的浓度。FVIII浓度显示在Y轴上，时间示于X轴上。在血浆与VIIISelect混合之前、4小时后和24小时后测量血浆样品中的FVIII浓度。该图的图例显示了VIIISelect材料(g)与血浆体积(ml)的比例。指示的温度(20-25℃)显示孵育温度。图2显示了使用VIIISelect和OctaplasTM作为起始材料的分批吸附实验的图。血液产品中FVIII的浓度显示在Y轴上，时间示于X轴上。显示了柱材料与起始材料的不同比例。图3显示了使用VIIISelect和冷上清液(Cryosupernatant)作为起始材料的分批吸附实验的图。血液产品中FVIII的浓度显示在Y轴上，时间示于X轴上。显示了柱材料与起始材料的不同比例。图4显示了直接酰胺分解活性的测量结果。Y轴上显示水解速率ΔOD405nm/his，X轴上显示不同的测试样品。每个样品的左栏表示S-2366的水解速率，右栏表示S-2288的水解速率。样品是根据实施例1和2生产的血液产品，并且与市售产品“SiemensDP”，“Helena”和“Affinity”相比较。图5显示了根据实施例1和2获得的所选血液产品中rhFVIII的稳定性测试结果。每个样品的柱代表在不同时间点(孵育前、3小时后、5小时后和8小时后)的样品中FVIII的浓度。图6显示了实施例1和2中获得的三种所选血液产品以及比较的商购FVIII缺乏型血浆的的rhFVIII的效力分配结果。图7显示了从冷上清液中连续柱分离FVIII的流速测试结果图。在图中，Y轴以百分比显示FVIII活性，X轴以cm/小时显示流速。图8显示了不同血浆的直接酰胺分解活性的测量结果。在实验中，将蛋白酶底物S-2288和S-2366加入到不同的血浆中，即改性的血浆(全部在VIIISelect色谱柱上纯化的预测试1(Pre-Pilot1)，预测试2和预测试3)或参考血浆，即市售的Helena先天型和Siemens。在柱状图中，左栏表示S-2238的水解速率，右栏表示S-2366的水解速率。图9显示了在根据本发明产生的FVIII缺乏型血浆(即预测试1、预测试2和预测试3，以及比较的血浆(Siemens,Helena))中稀释至1IU/ml的rhFVIII的稳定性测量结果。图10显示三种改性的血浆预测试3、预测试2和预测试1和Helena先天型的rhFVIII的效力分配结果，与浓度为250IU/ml的rhFVIII进行比较。图11显示三种改性的血浆预测试3、预测试2和预测试1和Helena先天型的rhFVIII的效力分配结果，与浓度为2000IU/ml的rhFVIII进行比较。发明详述本发明人开发了一种在vWF存在下结合FVIII蛋白，并因此使用对FVIII轻链特异的配体分离FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物的新方法。这是令人惊讶的，因为已知vWF与FVIII的轻链结合(参见例如Wang等，2003，第5页，左栏和Chiu等，2015)，因此在与vWF复合时应当防止FVIII的轻链特异性配体结合到FVIII。因此，本发明提供了纯化FVIII/vWF复合物的其他选择。此外，通过确定血浆衍生的FVIII/vWF复合物结合的任选条件，本发明提供了用于产生FVIII缺乏型血浆的合适方法。根据第一方面，本发明提供了从包含因子VIII(FVIII)蛋白和vWF蛋白的第一组合物中分离FVIII蛋白的方法，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中所述FVIII蛋白可以与所述vWF蛋白形成复合物，所述方法包括以下步骤：-使所述第一组合物与包含配体和基质的亲和树脂接触，其中所述配体对FVIII的轻链具有亲和力，和-将所述亲和树脂与混合物分离，得到第二组合物和改性的第一组合物，其中第二组合物含有所述亲和树脂、FVIII以及FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物。根据本发明的FVIII蛋白可以是人或动物全长因子VIII及其任何片段，突变体或变体。FVIII蛋白可以是血浆衍生的或重组的。此外，FVIII蛋白可以是糖基化的或未糖基化的。人类中的因子VIII由F8基因编码，其在六个外显子(axon)中包含187,000个碱基对。转录的mRNA具有9,029个碱基对的长度并且被翻译成具有2,351个氨基酸的蛋白质，其经翻译后修饰从中除去19个氨基酸。人类中的FVIII分子在31个氨基酸的侧链上被糖基化(25×N-糖基化，6×O-糖基化)。翻译后，氨基酸链被特异性蛋白酶切割一些位置，形成具有约200kDa的重链和具有约80kDa的轻链。结构域构成通常表征为A1-A2-B-A3-C1-C2。轻链由结构域A3-C1-C2组成。重链主要由结构域A1-A2-B组成。在血浆中发现的重链具有不均匀的组成，分子量在90至200kDa之间变化。其原因是其糖基化的异质性、存在剪接变体和存在蛋白水解产物，例如B结构域缺失的重链A1A2。全长FVIII的氨基酸序列于1986年7月21日由SwisProt的P00451的氨基酸20至2,351鉴定。特别地，FVIII蛋白的氨基酸序列与1986年7月21日的SwissProt的P00451的氨基酸20至2351具有至少80％，85％，90％，95％，98％，99％或100％的序列相同性。优选地，与P00451的氨基酸20至2351所定义的氨基酸序列的序列同源性为至少95％。重链和轻链关联的确切条件尚不清楚，但文献表明金属离子桥的参与与疏水相互作用一起形成并将复合物保持在一起。已经提出不同的金属离子参与相互作用，包括钙，铜，锌，锰等(Wang等，2003)。对于最近开发的B结构域缺失的重组因子VIII产物，据说该分子含有三种金属离子：钙，铜和锌(Svensson等)。根据本发明的分离方法使得FVIII蛋白与第一组合物分离。由于vWF蛋白也存在于样品中并且包含vWF的FVIII结合结构域，第一组合物中存在的FVIII蛋白的至少一部分将是与vWF蛋白的复合物形式。根据第一方面的一个实施方式，第一组合物包含血液产品。根据本发明的方法可用于降低血液产品中FVIII的浓度或从血液产品中除去FVIII。如本文所用，“血液产品”是指哺乳动物的全血或全血亚组，特别是血浆，血清或血浆和血清的其他亚组。如本文所用，“经改性的血液产品”是血液产品，其经历进一步的处理步骤，例如沉淀步骤(尤其是冷沉淀步骤)，病毒灭活，化学或热处理或/和特定组分的去除。因此，通过处理血浆获得改性的血浆。通过对全血的进一步处理步骤获得改性的全血。如本文所用的“血浆”是指哺乳动物的血浆。它是一种淡白色，有时是黄色的液体血液成分，通常将血液中的血细胞保持在悬浮状态。血浆主要是水，含有溶解的蛋白质，葡萄糖，凝固因子，电解质，激素和二氧化碳。血浆可以由血液制备，例如通过离心含有抗凝剂的新鲜血液，其中血细胞移动到离心管的底部。该过程的上清液是血浆。如本文所用，“全血亚组”是指衍生自全血的悬浮液溶液，其包含全血的一部分组分。如本文所用，“凝血因子”是指天然存在于血液中的蛋白质，其是凝血级联的一部分，例如纤维蛋白原，凝血酶原，因子VII，因子IX或因子VIII。如本文所用的“冷沉淀物(Cryoprecipitate)”是由血浆制备的血液产品。为了获得冷沉淀物，将通常冷冻的血浆温热至约0摄氏度，然后离心并收集沉淀物。如本文所用的术语“冷上清液”是指已从中除去冷沉淀物的血浆。得到的血浆具有降低水平的、但仍然相当量的FVIII、vWF、FXIII、纤连蛋白和纤维蛋白原。根据一个实施方式，FVIII蛋白选自人血浆衍生的FVIII，天然存在于血液中的FVIII衍生物，特别是天然存在于人血液中的FVIII衍生物，重组人全长FVIII和重组人B结构域缺失的FVIII。根据优选的实施方式，FVIII蛋白是人血浆衍生的FVIII。人血浆衍生的FVIII特别是全长FVIII，包括所有亚结构域A1，A2，B，A3，C1和C2。如果根据第一方面的分离方法用于血液产品作为第一组合物，则这尤其相关。因此，FVIII蛋白可以是血液中天然存在的任何FVIII衍生物，尤其包括全长FVIII和人B结构域缺失的FVIII。或者，分离FVIII蛋白的方法可与重组产生的FVIII蛋白一起使用。重组产生的FVIII蛋白可以是具有人全长FVIII的氨基酸序列的FVIII。或者，重组FVIII蛋白可以是重组人B结构域缺失的FVIII。如本文所用的“FVIII轻链”涉及因子VIII的一部分。特别地，FVIII轻链的氨基酸序列与1986年7月21日的SwissProt的P00451的氨基酸1668至2351具有至少80％，85％，90％，95％，98％，99％或100％的序列同源性。优选地，与P00451的氨基酸1668至2351所定义的氨基酸序列的序列同源性为至少95％。重组FVIII蛋白包括FVIII融合蛋白，如Oldenburg等2014中描述的FVIII白蛋白融合蛋白和/或FVIIIFC融合蛋白。根据本发明的重组FVIII蛋白可以在任何已知的重组表达系统中产生，包括但不限于酵母表达系统，杆状病毒/昆虫细胞表达系统，哺乳动物表达系统如CHO或BHK以及在人细胞系如HEK293F细胞中。在人细胞系中表达的重组FVIII蛋白是优选的，因为它们模拟人糖基化模式。根据本发明的vWF蛋白可以是人或动物全长vWF及其任何片段，突变体或变体。vWF是存在于哺乳动物血浆中的多聚体粘附糖蛋白，其具有多种生理功能。在初次止血期间，vWF充当血小板表面上的特定受体和细胞外基质的组分(例如胶原蛋白)之间的介质。此外，vWF充当促凝血因子VIII的载体和稳定蛋白。VWF在内皮细胞和巨核细胞中合成为2813个氨基酸的前体分子。前体多肽，预前vWF(pre-pro-vWF)，由在成熟血浆血管性血友病因子中发现的2050个残基的多肽、22个残基的信号肽和741个残基的前肽组成(Fischer等，1994)。全长vWF识别为Uniprot条目P04275。在分泌到血浆中时，vWF以具有不同分子大小的各种物质的形式循环。这些vWF分子由2050个氨基酸残基的成熟亚基的寡聚体和多聚体组成。vWF通常可以在血浆中作为多聚体存在，其大小约为500至20,000kDa(Furlan等，1996)。根据一个实施方式，vWF蛋白是血浆衍生的vWF多聚体。根据一个实施方式，vWF蛋白是血浆衍生的vWF单体。特别地，vWF具有至少80％，85％，90％，95％，98％，99％或100％的Uniprot条目P04275的任何序列的氨基酸序列。根据本发明的重组vWF蛋白可以在任何已知的重组表达系统中产生，包括但不限于酵母表达系统，杆状病毒/昆虫细胞表达系统，哺乳动物表达系统如CHO或BHK以及在人细胞系如HEK293F细胞中。在人细胞系中表达的重组vWF蛋白是优选的，因为它们模拟人糖基化模式。根据本发明的配体可以是对FVIII的轻链具有亲和力的任何分子或实体。如本文所用，“亲和力”涉及特异性结合至靶标(此处为FVIII的轻链)的性质。配体与FVIII的结合可以是共价的或非共价的，可逆的或不可逆的。优选地，结合是非共价的和可逆的。根据一个实施方式，配体是对FVIII的轻链具有亲和力的多肽。如本文所用的“肽”可以由任何类型的任何数量的氨基酸组成，优选天然存在的氨基酸，该氨基酸优选通过肽键连接。特别地，肽包含至少3个氨基酸，优选至少5个，至少7个，至少9个，至少12个，或至少15个氨基酸。此外，肽的长度没有上限。然而，优选地，根据本发明的肽的长度不超过500个氨基酸，更优选地，其长度不超过300个氨基酸；甚至更优选地，其长度不超过250个氨基酸。因此，术语“肽”包括“寡肽”，其通常是指长度为2至10个氨基酸的肽，以及“多肽”，其通常是指长度超过10个氨基酸的肽。术语“蛋白质”是指具有至少60、至少80、优选至少100个氨基酸的肽。根据本发明的术语“融合蛋白”涉及通过接合最初编码分开的蛋白质/肽的两个或多个基因、cDNA或序列而产生的蛋白质。基因可以天然存在于相同的生物体或不同的生物体中，或者可以是合成的多核苷酸。两个氨基酸序列之间的相关性由参数“序列相同性”描述。出于本发明的目的，使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970,J.Mol.Biol.48:443-453)确定两个氨基酸序列之间的序列相同性程度，其通过EMBOSS包的Needle程序(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)，Rice等，2000，TrendsGenet.16：276-277)实施，优选3.0.0版本或更新。使用的任选参数是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。标记为“最长相同性”的Needle的输出(使用thenobrief选项获得)用作百分比相同性并且计算如下：(相同残基×100)/(比对长度–比对中的间隙总数)与“包括”，“含有”或“特征在于”同义的过渡术语“包含”是包含性的或开放式的，并且不排除另外的、未列举的元素或方法步骤。过渡短语“由……组成”不包括权利要求中未指定的任何特征、步骤或成分，除了通常与之相关的杂质之外。当短语“由……组成”在权利要求正文的一个条款中，而不是紧接在序言之后时，它仅限制该条款中所述的特征；其他特征不排除在权利要求整体之外。过渡术语“基本由…组成”将权利要求的范围限制到特定的物质或步骤以及要求保护的发明的“本质上不影响基本和新特征的那些”。“‘基本由…组成’型权利要求处于‘由……组成’型的封闭权利要求和‘包含’型的全开放权利要求之间的中间地带”。本文所用的“亲和树脂”是对特定蛋白质具有亲和力的色谱介质。亲和树脂至少包含基质和对蛋白质具有亲和力的配体。如本文所用的“基质”是通常呈珠状的物质，特定配体与其共价结合。根据本发明的基质应：-不溶于该过程中使用的溶剂和缓冲液；-化学和机械稳定；和-容易与配体或间隔臂连接，配体可以连接在该间隔臂上。另外，它应该表现出良好的流动性并且具有相对大的附着表面积。优选地，基质由琼脂糖，玻璃，纤维素或聚丙烯酰亚胺制成。根据一个实施方式，基质是高度交联的琼脂糖。如实施例中所示，VIIISelect允许在vWF蛋白和/或FVIII/vWF复合物存在下有效结合FVIII。VlllSelect基于高度交联的琼脂糖基质。该琼脂糖碱基基质结合13kDaFab片段，其特异性结合至FVIII的轻链。13kDaFab片段通过亲水间隔物与琼脂糖基质连接。因此，根据本发明的配体优选是重组多肽。根据一个实施方式，配体的大小为2-50kDa。优选地，多肽配体的分子量为5至30kDa，更优选10至20kDa。由于在FVIII的轻链上存在vWF，大于30kDa的大小可能导致空间位阻。小于5kDa的分子量可能具有与靶分子结合的特异性较低的缺点。根据优选的实施方式，所述多肽是抗体Fab片段。Fab是抗体的抗原结合片段。抗体和抗体片段对其结合靶标即抗原表现出特别高的结合亲和力。因此，Fab片段是用于分离FVIII的优选配体。多肽，特别是Fab片段，优选是在非动物来源中产生的重组多肽。在非动物源中的生产具有以下优点：使患者可能存在问题的病毒或其他毒素的风险最小化。根据优选的实施方式，配体是在酵母细胞中产生的重组多肽。根据一个实施方式，配体通过间隔物与树脂偶联。选择根据本发明的间隔臂，使得其改善配体与FVIII轻链的结合概率。特别地，间隔物应具有一定长度以减少基质对配体和FVIII轻链之间结合的空间位阻。根据优选实施方式，间隔物由以下结构表示：根据一个实施方式，间隔物是亲水性化合物。基质优选为多孔珠的形式。根据优选的实施方式，偶联配体的树脂是VIIISelect。VIIISelect是可从GE健康护理公司商购的亲和纯化树脂(数据文件28-9662-37AB，GE健康护理公司)。容量通常为20000IU/ml凝胶。VIIISelect在pH3-10下具有长期pH稳定性，在pH2-12下具有短期稳定性，其可用于亲和树脂的再生以能够对VIIISelect亲和树脂进行重复纯化。亲和树脂优选通过施加不同缓冲液而在与第一组合物接触之前制备。为了平衡，亲和树脂优选用一种或多种以下缓冲液处理：再生缓冲液，洗涤缓冲液，洗脱缓冲液和/或平衡缓冲液。可以用洗涤缓冲液处理亲和树脂，然后用平衡缓冲液处理。特别是之前未使用的亲和树脂可以这种方式处理。之前使用的亲和树脂可优选用洗脱缓冲液、再生缓冲液和平衡缓冲液依次处理。再生缓冲液优选包含HAc，更优选浓度为0.1M的HAc。洗涤缓冲液优选包含NaCl，更优选浓度为0.5-1M。优选地，洗涤缓冲液中CaCl2的浓度为至多50mM。更优选地，洗涤缓冲液在产生FVIII缺乏的血浆时不含钙，特别是CaCl2。洗脱缓冲液优选包含50％乙二醇或50％丙二醇或2MMgCl2。pH优选为6.2-6.8，更优选6.4-6.6。优选地，洗脱缓冲液中CaCl2的浓度为至多50mM。平衡缓冲液优选包含NaCl和柠檬酸钠。优选地，平衡缓冲液中CaCl2的浓度为至多50mM。更优选地，平衡缓冲液在产生FVIII缺乏的血浆时不含钙，特别是CaCl2。所有缓冲区都可以还包含：咪唑，组氨酸，磷酸钠，柠檬酸钠，Tris，HEPES，甘氨酸，NaCl和吐温80。更优选地，平衡缓冲液包含30g/kgNaCl和6.0g/kg柠檬酸钠，pH为6.4-6.6。亲和树脂优选储存在乙醇中，优选在20％乙醇中。根据本发明的分离步骤可以以柱形式或分批形式连续进行。如实施例中所示，分批分离和亲和色谱均导致FVIII与样品分离。然而，通过连续柱色谱可以在更短的时间内获得相当或更好的分离结果。因此，根据优选的实施方式，分离是连续进行的，即以柱色谱的形式进行。根据一个实施方式，在柱中提供偶联配体的树脂，形成树脂床，用于接触第一组合物。根据一个实施方式，树脂床的高度为至少2cm。高度小于2cm时，接触时间/流速低，加工时间长，因此每单位时间树脂结合配体的结合能力太低。优选地，亲和树脂床的高度为至少5cm，或更优选至少10cm，特别是至少20cm。床高越高，相同流速下的接触时间越长，每单位时间的结合能力越高。然而，随着珠高度的增加，背压也会增加。因此，优选珠高度经选择而使得背压不超过0.3MPa的最大值。高于0.3MPa的背压可能导致柱材料坍塌。通常，对于亲和色谱法，优选高流速，因为它使工艺步骤的时间最小化。但是，如实施例所示，流速对分离效率有很大影响。在柱色谱中，第一组合物和改性的第一组合物的流速是相同的。第一组合物是起始材料，具体包括含有FVIII和vWF的血液产品。改性的第一组合物是在使第一组合物与亲和树脂接触后获得的亲和色谱流通物。根据一个实施方式，第一组合物的流速等于或低于30cm/小时。柱上的流速由体积流速(L/h)确定，其等于流动相在柱上的流动速度(cm/小时)。以下公式定义了这种关系：体积流速(L/h)＝流动速度(cm/小时)×柱横截面积(cm2)/100030cm/小时或更低的流速导致FVIII与第一组合物分离。15cm/小时或更低的流速导致第三组合物中FVIII的浓度大大降低。因此，根据一个实施方式，流速等于或低于15cm/小时。为了从血浆中完全除去FVIII，如实施例中所示，需要等于或低于10cm/小时的流速。因此，根据一个实施方式，流速等于或低于10cm/小时。根据另一个实施方式，流速等于或低于7.5cm/小时。根据一个实施方式，第一组合物中FVIII蛋白的浓度等于或低于1IU/mL。如实施例中所示，FVIII，特别是FVIII/vWF复合物的分离效率可取决于第一组合物中FVIII的浓度，特别是血液产品中的FVIII浓度。从实验中可以看出，该组合物中FVIII的浓度可以等于或低于1IU/mL。浓度为1IU/mL是健康个体血液中FVIII的正常浓度。根据一个实施方式，第一组合物中FVIII蛋白的另一浓度等于或低于0.7IU/mL。根据一个实施方式，浓度等于或低于0.4IU/mL。为了从第一组合物中完全除去FVIII，第一组合物中FVIII蛋白的浓度优选等于或低于0.2IU/mL。完全去除定义为低于0.01IU/mL的浓度。浓度低于0.01IU/mL的血浆称为“FVIII缺乏型血浆”。样品中FVIII蛋白的浓度以FVIII活性/体积得到。如实施例中所示，第一组合物的体积与亲和树脂的体积的比率对FVIII蛋白与第一组合物的分离效率有影响。亲和树脂的体积通过除去树脂的液体环境来确定，例如通过在保留树脂的过滤膜上抽吸，并测量剩余的树脂体积。通常，特别是对于基于琼脂糖基质的树脂，亲和树脂的密度为约1g/ml。因此，亲和树脂的体积与亲和树脂中的基质的量成比例，并因此与结合到基质上的配体成比例。根据一个实施方式，第一组合物体积与亲和树脂体积为5:1至100:1。浓度为100:1可能超过亲和树脂的最大负载量，因此导致FVIII蛋白与第一组合物的分离效率较低。低于5:1的浓度，分离过程不是时间和成本有效的，因为每亲和树脂量一次只能产生少量产物。优选地，第一组合物的体积与亲和树脂的体积的比率在10:1至70:1的范围内。因此，根据一个实施方式，第一组合物的体积与亲和树脂的体积的比率在10:1至50:1的范围内。基于实施例，具体显示出不应超过50:1的限定的实验设置浓度，以便在第一组合物中获得有效的FVIII降低。实验中提供的实验数据表明，在所选择的实验设置中，第一组合物与亲和树脂体积的比例应在20:1至40:1的范围内，以提供足够的FVIII缺乏性血浆的产率。因此，根据优选实施方式，第一组合物的体积与亲和树脂的体积的比率在20:1至40:1的范围内。发明人还确定接触时间是分离方法效率的相关参数。对于分批和连续分离方法都发现了这一点。对于连续分离，接触时间取决于流速和尺寸，特别是柱的长度、直径，因此取决于亲和树脂珠的体积。为了在第一组合物中获得FVIII/vWF复合物的显著减少，第一组合物和亲和试剂的接触时间为至少5分钟。根据一个实施方式，第一组合物和亲和试剂的接触时间为至少10分钟。为了从血浆中除去FVIII/vWF复合物，即获得低于0.01IU/mL的FVIII浓度，接触时间应至少为20分钟。优选地，接触时间至少为30分钟。如果在使用例如频率为约10-50波/分钟的波浪板或其他类似的混合装置的连续温和混合期间以分批形式进行分离，则至少4小时的接触时间会导致第一组合物中的FVIII显著减少。根据一个实施方式，分离以分批形式进行，并且第一组合物和亲和树脂的接触时间为至少12小时。更优选地，接触时间至少为24小时。接触时间为24小时，可以将浓度降低至0.01IU/mLFVIII活性以下。根据一个实施方式，第一组合物中vWF蛋白单体/多聚体的数量高于FVIII蛋白单体的数量。因此，即使FVIII从第一组合物中完全除去，vWF的主要部分即使在除去FVIII后也将留在第一组合物中。然而，去除的FVIII仍然会结合一些vWF分子，但由于FVIII和vWF的初始浓度的巨大差异(通常在人血液中vWF与FVIII的比例约为50:1)，第一组合物中vWF的减少不会很大。根据一个实施方式，vWF蛋白与FVIII蛋白的比例为至少1:5。优选地，vWF蛋白与FVIII蛋白的比例至少为10:1。更优选地，第一组合物中vWF蛋白与FVIII蛋白的比例为至少20:1。根据一个实施方式，vWF蛋白单体与FVIII蛋白的比例为至少50:1。vWF通常以多聚体的形式存在于人血液中。因此，一个FVIII蛋白可能与一个以上的vWF结合。因此，为了在从血液产品中消耗FVIII的同时保持足够量的vWF，vWF蛋白与FVIII蛋白的比例需要高。如实施例中所示，在较高温度下亲和纯化后，配体与FVIII的结合效率得到改善，即改性的第一组合物(改性的血浆)中的FVIII活性降低。因此，优选地，第一组合物和亲和树脂的接触步骤期间的温度高于4℃。更优选地，温度高于15℃。如所示，通过20至25℃的温度范围实现从第一组合物中分离FVIII的良好结果。出于稳定性考虑，温度优选不高于37℃。根据该方法的一个实施方式，接触步骤期间的温度高于20℃。根据一个实施方式，第一组合物包含血液产品。第一组合物也可以由血液产品组成。血液产品可选自全血或血液产品，血浆或血清。根据优选的实施方式，血液产品是人血液产品。根据一个实施方式，第一组合物还包含缓冲液。缓冲物质可选自HEPES，MES，乙酸钠，磷酸钠和组氨酸，赖氨酸和精氨酸。缓冲液具体是在pH范围为6-8的缓冲液。根据一个实施方式，缓冲液是HEPES。例如，HEPES可以以0.001g/mL至0.1g/mL的浓度(基于第一组合物的总体积)存在于第一组合物中，优选在0.005g/mL至0.05g/mL的范围内，更优选约0.01g/mL，pH在6.5-7.5之间。根据一个实施方式，血液产品是血浆，特别是来自人的血浆。血浆可以是预处理的血浆或病毒灭活的血浆。预处理的血浆包括冷沉淀物和冷上清液。冷上清液和冷沉淀物优选通过冷冻新鲜血浆并在约0℃的温度下解冻导致沉淀而获得。沉淀物是冷沉淀物，上清液称为冷上清液。血浆最优选是冷上清液。病毒灭活的血浆具体是化学病毒灭活的血浆。病毒灭活血浆的示例是以商品名“OctaplasTM”销售的血浆。根据本发明的分离方法不仅可以用于改变人血液或血浆中FVIII的浓度，特别是从血浆中除去FVIII，还可以用作纯化重组复合物中的步骤。因此，根据另一个实施方式，FVIII蛋白或vWF蛋白是重组表达的蛋白。根据优选的实施方式，FVIII蛋白和vWF蛋白都是重组表达的蛋白。在重组表达的情况下，vWF蛋白具体可以是人vWF的特定亚结构域。vWF的亚结构域优选具有与P04275-1的氨基酸764至1035所定义的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，98％，99％或100％的序列同源性的氨基酸序列。优选地，序列同源性为至少95％。根据第一方面的分离方法特别用于制备改性的血液产品，特别是FVIII缺乏的血液产品。因此，根据第二方面，本发明提供了一种用于生产改性的血液产品的方法，包括以下步骤：-提供包含血液产品的第一组合物；-进行根据第一方面的分离方法；和-收集改性的血液产品。在该方面，血液产品优选是血浆，因此改性的血液产品优选是改性的血浆。经改性的血液产品更优选为FVIII缺乏型血液产品，特别是FVIII缺乏型血浆。根据第二方面的方法可以直接与血浆的产生组合，以获得改性的血浆，特别是FVIII缺乏型血浆。因此，根据第二方面的一个实施方式，本方法包括以下步骤中的一个或多个：-提供全血样品；-通过离心和/或过滤从全血中除去血细胞以获得血浆；-冷冻血浆-任选地储存冷冻血浆；-将冷冻血浆解冻至0℃左右，导致蛋白质沉淀；-通过离心和/或过滤从冷冻血浆中除去蛋白质沉淀物，得到冷沉淀的血浆；和-在该过程的下一步骤之前任选地冷冻，储存和解冻冷上清液。根据替代实施方式，第二方面的方法还包括以下所有步骤：-提供全血样品；-通过离心和/或过滤从全血中除去血细胞以获得血浆；-冷冻血浆-任选地储存冷冻血浆；-将冷冻血浆解冻至0℃左右，导致蛋白质沉淀；-通过离心和/或过滤从冷冻血浆中除去蛋白质沉淀物，得到冷上清液；和-在该过程的下一步骤之前任选地冷冻，储存和解冻冷上清液。根据一个实施方式，本方法包括以下步骤中的一个或多个：-提供全血样品；-通过离心和/或过滤从全血中除去血细胞以获得血浆；-冷冻血浆；-任选地储存冷冻的血浆；-将冷冻的血浆解冻至约10-25℃的温度；-进行化学处理以获得经化学处理的血浆；-去除病毒灭活化学物质，特别是通过油萃取和疏水相互作用色谱法，从而获得病毒灭活的血浆，和-在该过程的下一步骤之前任选地冷冻，储存和解冻病毒灭活的血浆。根据一个实施方式，本方法包括下述所有步骤：-提供全血样品；-通过离心和/或过滤从全血中除去血细胞以获得血浆；-冷冻血浆；-任选地储存冷冻的血浆；-将冷冻的血浆解冻至约10-25℃的温度；-进行化学处理以获得经化学处理的血浆；-去除病毒灭活化学物质，特别是通过油萃取和疏水相互作用色谱法，从而获得病毒灭活的血浆；-在该过程的下一步骤之前任选地冷冻，储存和解冻病毒灭活的血浆。优选通过添加1％TNBP和1％TritonX-100并轻轻搅拌至少30分钟来进行化学处理。对于某些用途，将外源性vWF蛋白添加到血液产品(特别是血浆)中可能是有益的。根据本发明的外源性vWF是不源自血液产品的vWF。外源性vWF可以是血浆衍生的或重组的vWF。将vWF添加到血液产品中的过程称为掺入。掺入vWF可能是必要的，以便恢复改性的血浆中vWF的天然浓度值，所述改性的血浆中通过所述过程血浆中FVIII浓度小于0.01IU/mL且vWF明显降低。利用根据第二方面的方法，可以生产FVIII水平大幅降低的改性的血浆。根据一个实施方式，通过根据第二方面的方法获得的改性的血浆具有的FVIII浓度小于健康供体的血浆的平均FVIII浓度的4％。健康供体的血浆通常含有一定浓度的健康供体血浆，通常含有约1IU/mL的FVIII浓度。对于若干应用，可能希望提供具有甚至更低浓度的FVIII的血浆。因此，根据一个实施方式，FVIII的浓度小于健康供体的血浆的平均FVIII浓度的3％。因此，根据另一个实施方式，FVIII的浓度小于健康供体的血浆的平均FVIII浓度的2％。如上所定义，如果改性的血浆含有小于健康供体的浓度的1％，即约0.01IU/mL，则定义为FVIII缺乏。由于血液(特别是人体血液)以及来自血液的血浆，含有比FVIII更高量的vWF，因此vWF没有被完全耗尽。例如，改性的血浆可用于测试血浆衍生的或重组的FVIII样品。为此，血浆必须含有除FVIII之外的所有凝血因子，特别是改性的血液产品含有足够浓度的vWF。优选地，vWF的浓度是健康人类供体的血浆的平均vWF浓度的至少20％。更优选地，vWF的浓度是健康人类供体的血浆的平均vWF浓度的至少30％。改性的血浆中vWF的浓度也可以是健康人类供体血浆的平均vWF浓度的至少40％。根据优选的实施方式，vWF的浓度是健康人类供体的血浆的平均vWF浓度的至少50％。浓度为健康人类供体浓度的50％时，vWF浓度应足以进行FVIII测试。然而，由于不同的原因，例如在FVIII分析期间增加FVIII产品的稳定性环境，和/或由于在需要更高vWF量的不同特定疗法中使用改性的血浆，所以在改性的血浆中可能需要更高浓度的vWF。因此，通过用外源性vWF、重组或血浆衍生的vWF掺入改性的血浆，可以获得vWF浓度为健康人类供体血浆的平均vWF浓度的至少75％，优选至少85％，更优选至少90％，特别是至少约100％的改性的血浆。对于在用于检测FVIII和特定疗法的分析方法中使用血浆，FVIII的浓度特别地低于0.01IU/mL，即健康人类供体的血浆FVIII浓度的1％，并且vWF浓度至少为健康人类供体的血浆vWF浓度的90％。根据第二方面的用于制备改性的血浆，特别是具有降低的FVIII含量的血浆的方法，优选不会导致改性的血浆中纤维蛋白原的显著降低。根据第三方面的改性的血浆的一个实施方式，基于改性的血浆的体积，纤维蛋白原的浓度为至少1g/ml，优选至少1.3g/ml，更优选1.5g/ml。改性的血浆的FX活性优选为至少0.5IU/mL，更优选为0.9-1.1IU/mL。改性的血浆应优选具有低的酰胺分解(amidolytic)活性。酰胺分解活性可以例如基于蛋白酶底物S-2288或S-2366。基于S-2288底物的酰胺分解活性如实施例4中所示测定。基于实施例4中所示的测定方法，相对于S-2288的酰胺分解活性优选等于或低于1mOD/分钟，更优选等于或低于0.5mOD/分钟，特别优选等于或低于0.2mOD/分钟。此外，基于实施例4中所示的测定方法，相对于S-2366的酰胺分解活性等于或低于0.5mOD/分钟，优选等于或低于0.2mOD/分钟，更优选等于或低于0.1mOD/分钟。如上所述，根据第三方面的改性的血浆有数种用途。特别地，改性的血浆可用于治疗。因此，根据第四方面，本发明提供了用于治疗的改性的血浆。使用改性的血浆的实例是治疗需要降低凝血活性的疾病。具体地，这可能是在弥散性血管内凝血(DIC)期间的情况。DIC是一种病理过程，其特征在于凝血级联的广泛激活，其导致在整个身体的小血管中形成血凝块。这导致组织血流的损害并且最终可导致多器官损伤。施用FVIII缺乏型血浆引起FVIII的稀释和蛋白酶抑制剂如抗凝血酶，蛋白C，蛋白S等的添加，其也具有抗炎作用，因此与降低的凝固活性相结合，使身体能更好地控制DIC情况。脓毒症在许多情况下都是DIC的前期阶段。因此，在某些情况下，为了进一步模拟发生DIC的风险的预防性原因，在脓毒症的治疗期间稀释FVIII浓度并添加新鲜量的蛋白酶抑制剂/抗炎物质可能是有利的。或者，具有降低的FVIII浓度的改性的血浆可用于在分析方法中测试样品中FVIII的浓度和/或活性。因此，根据第五实施方式，本发明提供了根据第三实施方式的改性的血浆用于测试样品中FVIII的浓度和/或活性的用途。对于全长FVIII及其功能衍生物，活性是浓度的直接量度，通常用于测定浓度。FVIII的活性和浓度以下述方式相关：1IU/mL相当于0.1μg/mL浓度的B-结构域缺失的FVIII，对于全长FVIII因素约高2倍。利用根据本发明的方法，不仅可以去除或降低样品中FVIII的浓度。如所示，对轻链具有FVIII亲和力的示例也结合至FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物。因此，根据第六方面，本发明提供了纯化和/或富集FVIII蛋白、vWF蛋白或FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物的方法，包括以下步骤：-提供包含FVIII蛋白和vWF蛋白的第一组合物，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中FVIII蛋白可与vWF蛋白形成复合物，-进行根据第一方面的分离方法；-任选地对第二组合物进行至少一个洗涤步骤，其中第二组合物含有亲和树脂和FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物；和-任选地洗脱包含vWF的第三组合物，特别是用包含CaCl2的洗脱缓冲液洗脱；和-从亲和树脂中洗脱第四组合物，其包含FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物或仅含FVIII蛋白。根据第六方面的一个实施方式，本方法用于纯化和/或富集FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物，并包括以下步骤：-提供包含FVIII蛋白和vWF蛋白的第一组合物，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中FVIII蛋白可与vWF蛋白形成复合物，-进行根据第一方面的分离方法；-任选地对第二组合物进行至少一个洗涤步骤，其中第二组合物含有亲和树脂和FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物；和-从亲和树脂中洗脱包含FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物的第四组合物。根据第六方面的一个实施方式，本方法用于纯化和/或富集FVIII蛋白，并包括以下步骤：-提供包含FVIII蛋白和vWF蛋白的第一组合物，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中FVIII蛋白可与vWF蛋白形成复合物；-进行根据第一方面的分离方法；-任选地对第二组合物进行至少一个洗涤步骤，其中第二组合物含有亲和树脂和FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物；-洗脱包含来自亲和树脂的vWF蛋白的第四组合物；和-从亲和树脂中洗脱包含FVIII蛋白的第五组合物。根据一个实施方式，在与第一组合物接触之前用平衡缓冲液平衡亲和树脂。平衡缓冲液优选自咪唑，组氨酸，磷酸钠，柠檬酸钠，Tris，HEPES，甘氨酸，NaCl和吐温80。优选地，平衡缓冲液的pH在6.9至7.8的范围内，优选在7.2至7.6的范围内。根据一个实施方式，咪唑的浓度为约10mM，甘氨酸的浓度为约0.5至1％，NaCl的浓度为约0.1M，吐温的浓度为约0.02％。pH优选约为7.4。优选地，平衡缓冲液中CaCl2的浓度为至多50mM。更优选地，平衡缓冲液不含钙，特别是CaCl2。洗涤步骤优选用洗涤缓冲液进行。洗涤缓冲液优选自咪唑，组氨酸，磷酸钠，柠檬酸钠，Tris，HEPES，甘氨酸，NaCl和吐温80。优选地，平衡缓冲液的pH在6.0至7.5的范围内，优选在6.3至6.7的范围内。根据一个实施方式，咪唑的浓度为约10-20mM，甘氨酸的浓度为约0.5至1％，NaCl的浓度为约0.4-1.0M，吐温的浓度为约0.02％。pH优选约为6.5。优选地，洗涤缓冲液中CaCl2的浓度为至多50mM。更优选地，洗涤缓冲液不含钙，特别是CaCl2。为了从结合复合物的亲和树脂洗脱vWF蛋白，必须破坏FVIII蛋白和vWF蛋白的结合。该分离优选通过下述过程实现：使结合复合物的亲和树脂与包含钙离子的溶液(例如0至0.5MCaCl2的梯度)在填充有结合复合物的亲和树脂的柱上接触，和收集柱出口处通过280nm吸光度检测的vWF蛋白峰。或者，从亲和树脂洗脱vWF蛋白可以通过逐步增加CaCl2浓度来进行，优选0.15MCaCl2，更优选0.25MCaCl2，可高达约0.5MCaCl2。vWF分离过程的pH范围为6至8，优选7.4。根据一个实施方式，用vWF洗脱缓冲液洗脱vWF。vWF洗脱缓冲液优选自咪唑，组氨酸，磷酸钠，柠檬酸钠，Tris，HEPES，甘氨酸，NaCl和吐温80。优选地，在洗脱缓冲液中，咪唑的浓度为约10mM，甘氨酸的浓度为约0.5至1％，NaCl的浓度为约0.4M，CaCl2的浓度为约0.25M，吐温的浓度为约0.02％。如果，在第一次简单应用后不与亲和树脂结合的流份不打算用于FVIII缺乏型血浆等，则在vWF洗脱缓冲液中加入的典型0.25MCaCl2可以加入到起始材料中和/或平衡缓冲液中以破坏FVIII和vWF之间的相互作用，从而使仅FVIII与亲和树脂结合。在第二步中去除和洗脱vWF后，可以洗脱FVIII蛋白。根据第六方面的另一个实施方式，通过使亲和树脂接触第二洗脱缓冲液来洗脱包含FVIII的第五组合物，所述第二洗脱缓冲液包含醇，特别是乙二醇，优选浓度为50％，pH值为6至8。在此方面，优选亲和树脂是VIIISelect。在仅富集/纯化vWF的情况下，该方法在没有FVIII的最后洗脱的情况下进行。因此，根据第六方面的一个实施方式，本方法用于纯化和/或富集vWF蛋白，并包括以下步骤：-提供包含FVIII蛋白和vWF蛋白的第一组合物，所述FVIII蛋白至少含有FVIII的轻链，所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域，其中FVIII蛋白可与vWF蛋白形成复合物；-进行根据第一方面的分离方法；-任选地对第二组合物进行至少一个洗涤步骤，其中第二组合物含有亲和树脂和FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物；和-洗脱包含来自亲和树脂的vWF蛋白的第四组合物。根据使用根据第六方面的纯化和/或富集技术，获得包含FVIII蛋白、vWF蛋白或FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物的组合物。因此，根据第七方面，本发明提供了包含FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物或纯化的FVIII蛋白或纯化的vWF蛋白的组合物。因此，根据一个实施方式，组合物包含FVIII与vWF蛋白的复合物。根据第六方面的另一个实施方式，组合物包含纯化的FVIII蛋白。根据第六方面的另一个实施方式，组合物包含纯化的vWF蛋白。纯化的vWF可用于添加到FVIII缺乏型血浆中，特别是通过根据本发明的方法获得的FVIII缺乏型血浆。纯化的FVIII蛋白或纯化的vWF蛋白或FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物可用于治疗。因此，根据第七方面，本发明提供了根据第六方面的组合物，其用于治疗。具体地，该组合物用于治疗需要增加凝血活性的出血性疾病。这种出血性疾病的示例是血友病A患者和/或vWF缺乏型患者的不同情况。出血性疾病的治疗具体可以包含组合物的皮下或静脉内施用。下面的实施例进一步说明了本发明。实施例实施例所用材料表1：材料实施例1-用VIIISelect树脂从不同血液产品中分批分离FVIII1.1.概述VlllSelect是市售凝胶，具有至少25000IUFVIII/mL的预期结合能力。VlllSelect是一种亲和树脂，设计用于纯化重组β-结构域缺失的因子VIII。测试了三种不同的起始材料：血浆，OctaplasTMSD和冷上清液。通过加入0.25gHEPES/25mL血浆来缓冲血浆和冷上清液，得到pH为6.9-7.5。Hepes未添加到OctaplasTM中，因为它在生产过程中已经缓冲。它含有0.39g二水合磷酸二氢钠/kg血浆(其在最终产品中为约2至7.5mmol/L)和5g甘氨酸/kg血浆，其pH为6.9至7.4。1.2.分批吸附实验使用以下缓冲液制备VIIISelect树脂：1.再生缓冲液0.1MHAc2.洗涤缓冲液0.5MNaCl3.洗脱缓冲液20mML-组氨酸,0.5MNaCl,20mMCaCl2,在50％乙二醇中，pH6.4-6.64.平衡缓冲液30g/kgNaCl,6.0g/kg柠檬酸钠pH6.4–6.65.存储方案20％乙醇未使用的凝胶用缓冲液2处理，然后用缓冲液4处理。用过的凝胶在使用前用洗脱缓冲液，再生缓冲液，洗涤缓冲液和平衡缓冲液(缓冲液3、1、2和4)处理。将所有凝胶储存在20％乙醇中。用50mL各缓冲液处理2-20g亲和树脂3次。对于每次处理，将缓冲液施加到树脂上，并在温和搅拌期间与亲和树脂一起孵育1小时。使用室温离心将亲和树脂与血液产品分离。研究以下组合，并在不同时间点取出样品以追踪FVIII结合。表2：测试样品分批吸附VIIISelect树脂的概述在取样时使用离心将所有三种血液产品与凝胶分离。在分配和冷冻之前目视检查来自所有样品的材料，并且所有材料都是光学透明的，没有凝块形成的倾向。1.3.FVIII浓度的测量使用CoatestSPFVIII或CoatestSP4FVIII试剂盒(克罗莫基因公司)根据包装说明书使用手动微孔板终点法进行FVIII活性分析，期望在较低浓度的FVIII分析中包括更多标准稀释液以更好地进行检测低浓度的FVIII。1.4.样品分析的结果从几个不同的分批吸附实验中，研究了凝胶浓度、温度和时间的影响，发现当这三个变量中的任何一个增加时，FVIII的结合得到改善。结果示于图1-3。在20-25℃孵育24小时后，使用5gVIIISelect/25mL血浆使得血浆的残余FVIII活性为1.4％，OctaplasTM的为3％。即使在将凝胶浓度增加至15gVIIISelect/25mLOctaplasTM之后，也不可能除去OctaplasTM中的所有残余FVIII活性。用于血浆的VIIISelect的最高浓度为5g/25mL。相反，可以使用VIIISelect凝胶以1g/25mL冷上清液的凝胶浓度结合存在于冷上清液中的所有FVIII。结合速率随温度的升高而增加。实施例2-用VIIISelect树脂进行柱色谱FVIII吸附实验2.1.方案与实施例1中一样，使用三种不同的血液产品作为起始材料。在每个实验中，将VIIISelect树脂填充在XK16柱(GE生命科学)中至最终柱体积为10mL树脂，得到5cm床高。通过两个泵P-50(0.5mL/分钟)和P-1(0.01-0.05ml/分钟)(法玛西亚生物技术公司(PharmaciaBiotech)将样品施加到柱上。当获得280nm处的稳定吸光度时，收集流过材料。表3：VIIISelect柱实验的设置起始材料流速[cm/小时]流量(ml/分钟)血浆150.5OctaplasTM150.5OctaplasTM150.5OctaplasTM0.3–1.50,01-0.05冷上清液150.52.2.结果表4表示编辑的结果。从数据可以清楚地看出OctaplasTM中FVIII与VIIISelect的结合强烈依赖于所用的流速。因此，当将流速从0.5mL/分钟降低至0.05mL/分钟时，残余FVIII活性从0.17降至0.03IU/mL。但应注意，0.05mL/分钟(1.5cm/小时)的流速对于临时大规模制造过程而言太低。使用血浆作为FVIII的来源，仅测试0.5mL/分钟的流速，结果类似于分批吸附实验，即与OctaplasTM相比获得略低的残余FVIII活性(0.13对比0.17IU/mL)。相反，当使用0.5mL/分钟的流速时，从冷上清液的VIIISelect色谱也获得FVIII活性的完全消耗。使用0.5mL/分钟的流速对含有0.17U/mLFVIII的OctaplasTM空池(voidpool)进行重新色谱。此处，残余FVIII活性为0.08IU/mL，而在具有0.2IU/mL的初始FVIII活性的冷上清液的相同条件下进行色谱分离后未检测到FVIII活性。表4-结果柱色谱实验实施例3-来自实施例1和2的血液产品的详细分析进一步测试来自分批和色谱实验的所选制剂作为rhFVIII稀释剂的适用性。3.1.FVIII浓度的测定对起始材料、参考缺乏型血浆和选择的最终材料进行更广泛的FVIII分析。根据包装说明书使用低和高范围进行测定。使用SSC#4作为标准品并在稀释剂(高范围)和具有恒定水平(1/81)的先天性缺乏型血浆的稀释剂(低范围)中稀释。低范围样品是相对于在先天性缺乏型血浆中稀释的标准品分配的效力，以便在标准品和样品中具有相同量的血浆以遵守相似相比原理并且避免高估样品FVIII活性。在两个独立的测定系列中以真实重复分析样品。3.2.FVIII活性测定的结果三种可商购的FVIII缺乏型血浆用作参考(Siemens，Helena先天型，Affinity)。所有三种参考血浆都具有残余FVIII活性，这些活性是不可检测的或低于0.005IU/mL(0.5％)。结果总结在表5中。通过分批吸附从冷上清液制备的缺乏型血浆具有残余FVIII活性，其不可检测或低于0.005IU/mL。与VIIISelect在室温下孵育24小时的血浆(5g/25mL血浆)和与VIIISelect孵育的OctaplasTM(15g/25mL)具有0.012-0.014IU/mL的残余活性。只有当使用0.3-1.5cm/小时(0.01-0.05mL/分钟)的极低流速时，才能通过色谱法从OctaplasTM中消除FVIII，并且即使使用VIIISelect，残余活性也接近0.04。表5-结果不同的FVIII缺乏型血浆的FVIII分析3.3.vWF浓度的测定使用自动胶乳增强免疫测定血管性血友病因子抗原(仪器实验室公司)或相同方法的手动形式，在起始材料、参考缺乏型血浆和来自分批和色谱实验的所选材料中测量vWF浓度。该方法采用动力学读数的手动方法，并且SSC#4用作标准。将标准品在盐水中以1:4至1:20稀释，将样品在盐水中1:8稀释。每个样品在两个独立的测定系列中以重复的方式分配效力。3.4.vWF抗原测定的结果表6显示了vWF浓度测量的结果。表6-结果vWF抗原，1U/mL冷上清液和源自冷上清液的缺乏型血浆具有低浓度的vWF抗原。这也是亲和生物公司(AffinityBiologicals)的缺乏型血浆的情况。分批吸附或柱色谱不会导致vWF的任何重大损失。用VIIISelect(5g/25mL)孵育的血浆比参考缺乏型血浆具有更高的vWF抗原含量(1.6对比1.2-1.4IU/mL)。3.5.纤维蛋白原浓度的测定使用试剂盒Q.F.A凝血酶(仪器实验室公司)测定纤维蛋白原含量，基于Clauss方法。SSC#4用作标准品。初步测试表明，手动进行方法时无法使用Clauss方法。Clauss方法基于记录的凝固时间，并且使用标准Clauss测定的凝固时间<15秒，导致在开始吸光度测量之前完全凝固。Clauss试验将样品1:10稀释至200μL的体积，并在37℃下孵育3-4分钟。然后加入100μL凝血酶溶液(浓度100IU/mL)并进一步在37℃孵育。测量凝块形成的时间。代替Clauss测定，使用基于血浆完全凝固后的浊度或光散射的变化的改进测定：将样品1:10稀释至250μL的体积。测量在405nm处的吸收。50μL凝血酶溶液(浓度25IU/mL)。在405nm处进行吸收测量，直到吸光度达到平台期。该测定在室温下进行，并且每个样品在两个独立的测定系列中以重复的方式分配效力。这种改进的测定，有时称为凝血酶原时间衍生的方法，通常与Clauss方法具有非常好的相关性(参见ECAT测定过程(ECATAssayProcedures)2012，PalaretiG等，ClinChem1991，RossiE等，ThrombRes1988)。3.6.纤维蛋白原测定结果纤维蛋白原的结果列于表7中。使用VlllSelect的分批吸附似乎不会引起纤维蛋白原的任何损失，因为在分批吸附之前和之后发现大约相同浓度的纤维蛋白原。然而，对于使用15gVIIISelect/25mlOctaplasTM孵育的OctaplasTM，损失超过70％(从2.8到0.8mg/mL)。这可由解冻样品中发现的沉淀物/凝块所解释。获得的对照值2.5和2.7mg/mL在2.33-3.16mg/mL的分配范围内。表7-纤维蛋白原测定的结果3.7.因子X浓度的测定使用基于RVV的生色方法测定因子X活性，其中样品FX被蛇毒RVV激活成FXa。SSC#4用作标准品。以1:20至1：200的稀释度分析标准品，并以1:40稀释度分析样品。所有稀释均在Tris缓冲液中进行。根据以下方案进行测量。3.8.因子X活性测定的结果因子X分析的结果总结在表8中。表7显示FVIII耗尽过程对FX活性没有任何大的影响。包括参考缺乏型血浆的所有样品具有远高于0.5IU/mL的FX活性。在与15gVIIISelect/25mLOctaplasTM孵育的OctaplasTM中FX活性较低，因此该结果与vWF和纤维蛋白原分析的结果一致。表8-结果因子X活性，IU/mL实施例4-直接酰胺分解活性的测定4.1测量定性检查任何预活化的存在并与SSC#4比较，通过孵育起始材料、参考缺乏型血浆和来自分批和色谱实验的所选材料，使用两种不同的生色底物S-2288(一般丝氨酸蛋白酶底物)和S-2366(凝血酶，因子Xla和APC)。所有样品在Tris缓冲液(TB035Rossix)中以1:5和1:10稀释。比较样品的水解速率与SSC#4血浆的水解速率。在一些情况下，以底物浓度和孵育温度的微小变化进行以下过程，以优化不同样品之间的分析比较。4.2.直接酰胺分解活性的结果结果总结于表9和图4中。通过与两种生色底物孵育来定性测试蛋白酶的存在：S-2288，一般丝氨酸蛋白酶底物；和S-2366，凝血酶、因子XIa和APC的敏感底物。总体而言，结果(表9)表明活性蛋白酶的存在非常有限，Siemens缺乏型血浆例外，其与其他样品相比具有明显更高的水解速率。表9-结果直接酰胺分解活性4.3.测定rhFVIII的稳定性通过测定掺入参考缺乏型血浆中的纯rhFVIII的稳定性和来自实施例1和2的分批和色谱实验的选定材料的稳定性，在反向稳定性研究中隐含地测试预活化程度。实验设计基于以下假设：预活化的增加将导致rhFVIII活化并因此降低rhFVIII稳定性。将rhFVIII稀释至1IU/mL的标称浓度，分配每种FVIII缺乏型血浆并在≤-70℃冷冻。进行反向稳定性研究，其中样品在3小时、5小时和8小时解冻，并与测定开始前解冻即刻的样品相比。使用CoatestSPFVIII试剂盒，使用高范围和手动微孔板方法测定rhFVIII活性。在独立制备的重复中分析每个样品。在Helena先天性缺乏型血浆中将标准品稀释至1IU/mL。4.4.在FVIII缺乏型血浆中稀释的rhFVIII稳定性测试的结果结果总结于表10和图5中。当在各种缺乏型血浆中稀释至1IU/mL时，rhFVIII的稳定性没有显著差异。当相对于在Helena先天性缺乏型血浆中稀释的标准物分配效力时，在其他制剂中t＝0时几乎相同的rhFVIII恢复支持实施例4.6中的发现，即对于所有缺乏型血浆来说，测定活性是相同的。表10-结果稳定性4.5.使用不同的缺乏型血浆作为稀释介质的rhFVIII的效力分配将浓缩的rhFVIII溶液在7种不同的缺乏型血浆中稀释至1IU/mL，并相对于在相同缺乏型血浆中稀释的标准品分配效力。当使用不同的缺乏型血浆作为稀释剂时，未观察到效力分配的显著差异(表11，图6)。rhFVIII制剂的平均分配活性为4213IU/mL，并且不同缺乏型血浆的所有平均结果均为均值的+/-4％内，范围为4058-4394IU/mL。标准品的斜率不依赖于缺乏型血浆。这是因为样品和标准品在相同的缺乏型血浆中稀释，因此试验中两者的活性都降低了。在该实验设置中，rhFVIII的效力分配不依赖于缺乏型血浆中残余FVIII活性的程度，因为标准品和样品在相同的缺乏型血浆中稀释。因此，残余FVIII活性的潜在贡献对于样品和标准都是相同的。在所有情况下，任何残余FVIII活性的贡献都很低，以至于它不会显著影响标准曲线的斜率。表11-结果rhFVIII的效力分配实施例5-不含FVIII活性的vWF的纯化用于纯化vWF的起始材料是Wilate，其是由奥克特珐玛公司以名称出售的人FVIII和vWF的复合物。将VIIISelect填充到XK16/20柱(GE健康护理)中，使床高为4.5cm，柱体积等于9mL。实验期间的流速为0.25mL/分钟，等于7.5cm/小时。用下列平衡缓冲液平衡柱子。平衡缓冲液：将在4ml0.25MCaCl2中重建30分钟，以破坏FVIII和vWF之间的相互作用。将重建的应用于VIIISelectXK16/20柱，流速为0.25ml/分钟，其中FVIII主部与亲和树脂结合，收集的流通物包含vWF和一些其他蛋白质，如纤维蛋白原等。流通沉淀缓冲液甘氨酸2.6M(19.5g/100ml)Tris20mM(0.242g/100ml)NaCl0.3M(1.8g/100ml)向来自VIIISelect柱的1体积流通物中加入3.34体积的流通缓冲液和3.13gNaCl。高甘氨酸浓度使vWF分子沉淀。将溶液在室温下搅拌30分钟，然后以600rpm离心10分钟，得到含有vWF的沉淀。在重建缓冲液中快速重建沉淀物。重建缓冲液重建后，将其在28-32℃孵育约10小时，以除去任何残余FVIII活性。最后，使用HiPrep脱盐柱和具有40mMHepes与0.15MNaCl的pH7的平衡缓冲液除去EDTA。上述方案导致vWF回收率为20-25％，残余FVIII活性小于0.01IUFVIII/100IUvWFAg。实施例6-测试不同的流速6.1.方案进行了有限的研究以调查流速对残余FVIII活性的影响。将冷上清液应用于填充有VIIISelect的XK16柱，床高4cm，柱体积8mL。测试120-7.5cm/小时的流速(1mL/分钟＝30cm/小时)。基于该结果，选择7.5cm/小时(0.25mL/分钟)的流速用于纯化FVIII缺乏型血浆。6.2.结果结果示于图7。残余FVIII活性与流速线性相关。低于10cm/小时的流速提供FVIII缺乏型血浆的可靠生产，该血浆具有小于1％的FVIII活性。在直径为1.6cm的XK16柱上使用的流速7.5cm/小时＝0.25mL/分钟，导致施加200mL血浆时的处理时间为13小时。200mL血浆对应于柱体积的25倍，并且在该过程中未发现FVIII的泄漏增加。在所有柱纯化过程中压力稳定。实施例7-FVIII缺乏型血浆的生产从两批不同的冷上清液中产生三批不同的FVIII缺乏型血浆。将冷上清液在室温下在水浴中解冻，并通过加入0.25gHepes/25mL血浆得到40mMHepes来缓冲，除了一批用20mMHepes缓冲(预测试3)。使用填充有VIIISelect，床高4cm，柱体积8mL的XK16柱(GE生命科学)和Pure150色谱系统(GE生命科学)进行纯化。使用26g/kgNaCl，6.0g/kg柠檬酸钠，pH6.4-6.6作为平衡缓冲液。使用7.5cm/小时(0.25mL/分钟)的流速，并且对每批的每个柱施加200-250mL冷上清液，导致13-17小时的处理时间。将来自预测试3的FVIII缺乏型血浆掺入根据实施例5生产的vWF，至标称浓度为1IU/mlvWFAg。将缺乏型血浆分配在96×1mL的架子中并在<70℃下冷冻。实施例8-FVIII缺乏型血浆的表征8.1.残余FVIII活性的测定使用CoatestSP4FVIII试剂盒(克罗莫基因公司)测量残余FVIII活性，并根据CoatestSP4FVIII包装说明书使用低范围进行测定。使用SSC#4作为标准品并在试剂盒缓冲液中稀释。从稀释度1:81分析实施例7获得的样品。8.2.测定vWFAg浓度使用血管性血友病因子抗原试剂盒(仪器实验室公司)测定vWF浓度，并使用凝固仪器ACLTOP700和试剂盒的板上应用进行测定。SSC#4用作标准品。8.3.纤维蛋白原浓度的测定使用试剂盒Q.F.A.凝血酶(仪器实验室公司)测定纤维蛋白原含量，并使用凝固仪器ACLTOP700和试剂盒的板上应用进行测定。SSC#4用作标准品。8.4.因子X浓度的测定使用基于RVV的生色方法测定因子X活性，其中样品FX被蛇毒酶RVV-X激活成FXa。SSC#4用作标准品。以1:20至1：200的稀释度分析标准品，并以1:40稀释度分析样品。所有稀释均在Tris缓冲液中进行。表12总结了用于测定FX浓度的方案。表12：生色FX方法8.5.吸光度测量使用EppendorfBioPhotometer测量280和600nm处的吸光度。8.6.结果所有样品的残余FVIII活性<1％。Rossix预测试3掺入了约20-30％至约100％水平的vWF。vWF的这种浓度与测试的Siemens缺乏型血浆相当，并且与来自Helena生物科学公司的先天性FVIII缺乏型血浆中的vWFAg浓度相比高约30％。预测试1和2的vWF浓度在20-30％之间。与参考血浆相比，预测试血浆具有略(约20％)低的纤维蛋白原浓度。原因很可能是起始材料是冷上清液血浆，并且在冷沉淀过程中，部分纤维蛋白原分子是共沉淀的。对于所有测试的缺乏型血浆，因子X活性是正常的。从视觉观察和预期可以看出，与Rossix预测试相比，参考血浆更加混浊，OD600高1.5-2倍。这与预测试来自冷沉淀血浆并且使用离心步骤去除冷沉淀物的事实有关，该离心步骤减少了冷上清液中的特定物质。Rossix预测试在280nm处的吸光度(可用作蛋白质浓度的测量值)相似或略高，可能源于不同血浆批次之间的批次间差异。表13：缺乏型血浆的分析表征实施例9-预活化测试9.1.直接酰胺分解活性-实验方案通过将缺乏型血浆与两种不同的生色底物，4mMS-2288(一般丝氨酸蛋白酶底物)和2mMS-2366(凝血酶、因子Xla和APC)一起孵育来定性检查任何预活化的存在。所有样品在Tris缓冲液(TB035Rossix)中1:10稀释。表14方法直接酰胺分解活性9.2.直接酰胺分解活性-结果结果如图8所示。通过与两种生色底物(S-2288，一般丝氨酸蛋白酶底物；和S-2366，凝血酶、因子XIa和APC的敏感底物)孵育来定性测试蛋白酶的存在。总体而言，结果表明活性蛋白酶的存在非常有限，除了Siemens缺乏型血浆，其与其他样品相比具有明显更高的水解速率。9.3.测定rhFVIII的稳定性通过测定掺入缺乏型血浆中的纯的B结构域缺失的rhFVIII的稳定性，在反向稳定性研究中隐含地测试预活化程度。实验设计基于以下假设：预活化的增加将导致rhFVIII活化并因此降低rhFVIII稳定性。将获自瑞典奥克特珐玛AB公司的2000IU/小瓶的用每种FVIII缺乏型血浆稀释至1IU/mL的标称浓度，分配并在≤-70℃冷冻。进行反向稳定性研究，其中样品在3小时和6小时解冻，并与测定开始前解冻即刻的样品相比。使用CoatestSPFVIII试剂盒，使用高范围和手动微孔板方法测定rhFVIII活性。以真正的一式四份(独立制备)分析每个样品，并且相对于从t＝0样品池中制备的标准品分配效力。9.4.在FVIII缺乏型血浆中稀释的rhFVIII的稳定性-结果当在各种缺乏型血浆中稀释至标称值1IU/mL时，2000IU/小瓶的稳定性没有显著差异。在20-25℃储存6小时后活性的变化在-3至+2％的范围内。表15：Nuwiq在缺乏型血浆中稀释至1IU/mL的稳定性9.5.在不同的缺乏型血浆中稀释至1IU/mL后，rhFVIII(250IU小瓶和2000IU小瓶)的效力分配。效力分配的结果显示在表15和16以及图13和14中。所有测定系列均可用于平行、回归和线性分析。在不同的缺乏型血浆之间，2000IU/小瓶的变异或效力分配没有显著差异。当预测试1和2预先稀释时，250IU/小瓶显示出更大的变异和降低2-5％的分配效力。这些是具有低vWFAg浓度的两个预测试，并且对稍低结果的解释可能是较低的vWFAg导致较不稳定的rhFVIII稀释。约290IU/小瓶和2550IU/小瓶的所获得的效力不同于250IU/小瓶和2000IU/小瓶的标称活性，分别对应于+16％和+28％。对于所有使用的缺乏型血浆来说，标准品和样品的剂量响应是相似的。表15效力分配-250IU小瓶表16效力分配-2000IU小瓶参考文献1.Farrugia等,生物技术和血浆分级分离工业。凝血FVIII生产进展的影响(Biotechnologyandplasmafractionationindustry.TheimpactofadvancesintheproductionofcoagulationFVIII.)Biotechnology,1993,卷3,第1期2.Fay,因子VIII：功能和结构(FactorVIII:Functionandstructure),InternationalJournalofHematology卷832006,103-108页3.因子VIII亚基的金属离子非依赖性关联和钙和铜离子对辅因子活性和亚细胞间亲和力的作用(Metalion-independentassociationofFactorVIIIsubunitsandtherolesofcalciumandcopperionsforcofactoractivityandinter-sub-unitaffinity),Biochemistry2001,卷40,10293-103004.Wang等,凝血因子VIII；结构与稳定性(CoagulationFactorVIII；structureandstability),InternationalJournalofpharmaceutics2003,卷259,1-15页.5.Furlan,血管性血友病因子：分子大小和功能活性(VonWillebrandfactor:molecularsizeandfunctionalactivity),AnnHematol.1996卷72(6),341-348页6.Svensson等,重组凝血因子VIII中的金属结合位点的评估鉴定了具有独特金属结合位点的两个位点(Evaluationofthemetalbindingsiteinarecombinantco-agulationfactorVIIIidentifiestwositeswithuniquemetalbindingsites),BiologicalChemistry2013；卷394(6),761-765页7.Eriksson等,B-结构域缺失的重组FVIII的制造方法(ThemanufacturingprocessforB-domaindeletedrecombinantFVIII),SeminarsinHematology,2001,卷38,第2期,增刊424-31页8.Girma等,使用单克隆抗体的新商购ELISA对294名A型血友病患者的因子VIII抗原(FVIILCAg)的分析(AssayofFactorVIIIantigen(FVIII:CAg)in294HaemophiliaApatientsbyanewcommercialELISAusingmonoclonalantibodies),Haemophilia,1998,卷4,98-103页9.Fischer等,重组血管性血友病因子的结构分析：异二聚体和同二聚体的鉴定(StructuralanalysisofrecombinantvonWillebrandfactor:identificationofhetero-andhomo-dimers),FEBSLetters1994,卷351,345-348页10.ECAT分析程序实验室技术手册(ECATAssayProceduresaManualofLaboratoryTechniques),Springer出版社，2012年10月11.Palareti等,纤维蛋白原检测：六种不同方法的合作研究(Fibrinogenassays:acollaborativestudyofsixdifferentmethods),ClinicalChemistry,1991；卷37，714-19页12.Rossi等新型ACL血凝仪测定功能性(可凝固的)纤维蛋白原的方法(Methodforthedeterminationoffunctional(clottable)fibrinogenbythenewfamilyofACLcoagulometers).ThrombRes1988,卷52,453-468页13.McCue等,用于捕获和纯化重组因子VIII化合物的新型亲和吸附剂的应用(ApplicationofanovelaffinityadsorbentforthecaptureandpurificationofrecombinantFactorVIIIcompounds),JournalofChromatographyA,卷1216,2009,7824-7830页14.Muyldermans，单结构域骆驼抗体：当前状态(Singledomaincamelantibodies:currentstatus),ReviewsinMoleculerBiotechnology,卷74,2001,277-302页15.Rosen,因子VIII的测定:C，具有显色底物(AssayofFactorVIII:Cwithachromogenicsubstrate),ScandJHaemetol-增刊40,卷33,1984,139-145页16.Winge等,人类clrhFVIII-人细胞系中产生的新一代重组因子VIII-的纯化方法的开发、升级和验证，(Development,upscalingandvalidationofthepurificationprocessforhuman-clrhFVIIIanewgenerationrecombinantfactorVIIIproducedinahumancell-line),ProteinExpressionandPurification,卷115,2015,165–175页17.Chiu等,通过电子显微镜和质谱绘制因子VIII和血管性血友病因子之间的相互作用(MappingtheInteractionbetweenFactorVIIIandvonWillebrandFactorbyElectronMicroscopyandMassSpectrometry),Blood,2015；卷126(8),935-938页当前第1页1 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