从血液产品分离因子VIII的方法与流程

文档序号:15733738发布日期:2018-10-23 21:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从包含因子VIII(FVIII)蛋白和血管性血友病因子(vWF)蛋白的第一组合物中分离FVIII蛋白的方法,所述FVIII蛋白至少包含FVIII的轻链,所述血管性血友病因子(vWF)蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域,其中所述FVIII蛋白可以与所述vWF蛋白形成复合物,所述方法包括以下步骤:

-使所述第一组合物与包含配体和基质的亲和树脂接触,其中所述配体对FVIII的轻链具有亲和力,和

-将所述亲和树脂与混合物分离,得到第二组合物和改性的第一组合物,其中第二组合物含有所述亲和树脂以及所述FVIII蛋白与所述vWF蛋白的复合物。

2.如权利要求1所述的方法,其中所述FVIII蛋白选自:人血浆衍生的FVIII,天然存在于人血液中的FVIII衍生物、重组人全长FVIII和重组人B结构域缺失的FVIII。

3.如权利要求1或2所述的方法,其中所述vWF蛋白选自:人血浆衍生的vWF多聚体,人血浆衍生的vWF单体和重组人全长vWF。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法,其中配体是多肽,优选重组多肽,更优选在非动物来源中产生的重组多肽,特别是在酵母细胞中产生的重组多肽。

5.如权利要求4所述的方法,其中所述配体是抗体Fab片段,优选13kD Fab片段。

6.如权利要求5所述的方法,其中所述基质由高度交联的琼脂糖组成,并且优选所述亲和树脂是VIIISelect。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中在填充柱上连续进行分离,并且第一组合物和/或改性的第一组合物的流速等于或低于30cm/小时,优选等于或低于15cm/小时,更优选等于或低于10cm/小时,特别是等于或低于7.5cm/小时。

8.如权利要求7所述的方法,其中基于所述第一组合物的总体积,所述第一组合物中的FVIII蛋白的浓度等于或低于1IU/mL,优选等于或低于0.7IU/mL,更优选等于或低于0.4IU/mL,最优选等于或低于0.2IU/mL。

9.如权利要求6-7中任一项所述的方法,其中所述第一组合物的体积与所述树脂的体积的比率为5:1至100:1,优选10:1至70:1,更优选10:1至50:1,特别是20:1至40:1。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法,其中所述第一组合物包含血液产品,优选人血液产品,所述血液产品选自全血、血浆和血清。

11.如权利要求10所述的方法,其中所述血液产品是血浆,特别是预处理的血浆,例如冷上清液或化学病毒灭活的血浆,例如OctaplasTM

12.如权利要求1至10中任一项所述的方法,其中所述FVIII蛋白和/或vWF蛋白,特别地FVIII蛋白和vWF蛋白,是重组表达的蛋白。

13.一种生产改性的血液产品的方法,包括步骤:

-提供包含血液产品、特别是血浆的第一组合物;

-如权利要求2至12中任一项所述进行FVIII的分离;和

-收集包含改性的血液产品、特别是改性的血浆的改性的第一组合物。

14.如权利要求13所述的方法,还包括向所述血浆添加基本上不含FVIII的外源vWF蛋白。

15.通过权利要求13或14的方法获得的改性的血浆,其中FVIII的浓度小于健康人供体血浆的平均FVIII浓度的4%,优选小于3%,更优选小于2%,特别地小于1%。

16.通过权利要求13或14的方法获得的改性的血浆,其中vWF的浓度为健康人供体的血浆平均vWF浓度的至少75%,优选至少85%,更优选至少90%,特别地至少100%。

17.一种用于治疗的改性的血浆,特别是用于治疗需要降低的凝血活性的疾病,优选DIC或败血症,其中所述改性的血浆如权利要求15或16中任一项所定义。

18.如权利要求15或16的改性的血浆用于测试样品中FVIII蛋白的浓度和/或活性的用途。

19.一种纯化和/或富集FVIII蛋白、vWF蛋白或FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物的方法,包括步骤:

-提供包含FVIII蛋白和vWF蛋白的第一组合物,所述FVIII蛋白至少包含FVIII的轻链,所述vWF蛋白至少包含vWF的FVIII结合结构域,其中FVIII蛋白可与vWF蛋白形成复合物,

-进行权利要求1至12中任一项的分离方法;

-任选地,对第二组合物进行至少一个洗涤步骤,和

-任选地洗脱包含vWF的第三组合物,特别是用包含CaCl2的洗脱缓冲液洗脱;和

-从亲和树脂中洗脱包含FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物或FVIII蛋白的第四组合物。

20.通过权利要求19的方法获得的包含FVIII蛋白与vWF蛋白的复合物,或纯化的FVIII蛋白,或纯化的vWF蛋白的组合物。

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