本发明属于生物来源的化合物提取分离工艺技术领域，具体涉及一种从皱瘤海鞘中分离癸二烯醇类化合物的方法及其癸二烯醇类化合物。
背景技术：
海鞘是尾索动物亚门海鞘纲的尾索动物，在自然界中已知有1500余种，主要分布在热带及亚热带海域。我国海鞘资源丰富，已记录的中国沿海海鞘种类有100余种，且有很多为我国所特有。据报道，海鞘中含有多种具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等活性的化合物，因此，近年来，海鞘的化学成分及其生物活性成为了海洋天然产物研究的热门领域。
皱瘤海鞘(styelaplicata)是海鞘中的一种，主要分布于我国中南沿海的福建、广东和海南等，部分地区也有人工养殖。皱瘤海鞘经常在一些海产养殖过程中一同生长起来，虽然皱瘤海鞘在部分地区有作为食物食用的习惯，但大部分的皱瘤海鞘仍然是作为养殖过程中的副产物被丢弃掉，造成了大量的浪费。因此，如果能将皱瘤海鞘进行有效的利用，不仅具有一定的经济价值，也可以解决浪费问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种从皱瘤海鞘中分离癸二烯醇类化合物的方法及其癸二烯醇类化合物，该分离方法简单易操作，所得到的癸二烯醇类化合物(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇还未见报道，对于海洋天然产物有效成分的研究具有十分重要的意义。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：
一种从皱瘤海鞘中分离癸二烯醇类化合物的方法，包括：
1)取皱瘤海鞘，用乙酸乙酯反复浸提若干次直至浸提液呈无色后，合并浸提液，浓缩得到粗提物；
2)步骤1)得到的粗提物用甲醇溶解，用高速逆流液相色谱分离：溶剂体系为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2，充分混合后静置分层，然后分离上相与下相；取上述用甲醇溶解的粗提物，用上相溶解为浓度480～520mg/ml；以上相为固定相，以下相为流动相，流速2～4ml/min，正接正转，转速800～900r/min；温度34～36℃；检测波长：205～215nm；收集68～125min出峰对应的组份；
3)取步骤2)中68～125min出峰对应的组份，用反相液相色谱分离，固定相：ymc-triartc18；流动相：甲醇-水混合液；梯度洗脱1.5～2.5h，流动相中甲醇浓度从4～6％均匀递增到100％；流速55～65ml/min；柱温24～26℃；检测波长195～205nm、250～260nm、305～315nm
4)收集步骤3)中流动相中甲醇浓度为65％～100％时对应的组份，用高速逆流液相色谱分离：溶剂体系为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝1.8～2.2:0.8～1.2:0.8～1.2:2.8～3.2，充分混合后静置分层，然后分离上相与下相；取上述的步骤3)中甲醇浓度65％～100％时对应的组份，用上相溶解为浓度480～520mg/ml；以上相为固定相，以下相为流动相，流速2～4ml/min，正接正转，转速800～900r/min；温度34～36℃；收集40～50min出峰对应的组份；
5)取步骤4)中收集的40～50min出峰对应的组份，用甲醇配制成95～105mg/ml，用高效液相色谱分离：固定相：ymc-triartc18半制备柱；流动相：甲醇浓度为45～55％的甲醇-水混合液，再加入0.08～0.12％的甲酸；流速：1.5～2.5ml/min；柱温24～26℃；检测波长：195～205nm和205～215nm；收集115～130min出峰对应的组份；
6)取步骤5)中收集的115～130min出峰对应的组份，用45～55％甲醇配制成48～52mg/ml，用高效液相色谱纯化：固定相：ymc-triartc18半制备柱；流动相：甲醇浓度为45～55％的甲醇-水混合液，再加入0.08～0.12％的甲酸；流速：1.5～2.5ml/min；柱温24～26℃；检测波长：195～205nm和205～215nm；收集200～210min的出峰对应的组份，得到所述癸二烯醇类化合物，为(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇。
一实施例中：所述步骤2)中，以上相为流动相，以下相为流动相，用35～45ml/min的流速将固定相泵满，调节转速为800～900r/min，温度34～36℃，以2～4ml/min的流速向柱中泵入流动相，当流动相从主机出口稳定流出时，证明体系已经达到流体动力学平衡；随后再用于粗提物的高速逆流液相色谱分离。
一实施例中：所述步骤2)中，高速逆流液相色谱采用tbe-300b。
一实施例中：所述步骤3)中，反相液相色谱采用
一实施例中：所述步骤4)中，以上相为流动相，以下相为流动相，用40ml/min的流速将固定相泵满，调节转速为800～900r/min，温度34～36℃，以2～4ml/min的流速向柱中泵入流动相，当流动相从主机出口稳定流出时，证明体系已经达到流体动力学平衡；随后再用于粗提物的高速逆流液相色谱分离。
一实施例中：所述步骤4)中，高速逆流液相色谱采用tbe-300b。
一实施例中：所述步骤5)中，所述高效液相色谱采用岛津高效液相色谱仪制备系统lc-6ad；所述固定相ymc-triartc18半制备柱的规格为10×250mm，粒径5μm。
一实施例中：所述步骤6)中，所述高效液相色谱采用岛津高效液相色谱仪制备系统lc-6ad；所述固定相ymc-triartc18半制备柱的规格为10×250mm，粒径5μm。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：
一种癸二烯醇类化合物，为(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇，其结构式如下式所示：
本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：
本发明以人工养殖的皱瘤海鞘为原料进行分离，原料易得，能够对皱瘤海鞘进行充分回收利用，避免浪费；采用高速逆流色谱(hsccc)进行分离，具有样品无损失、无污染、高效、快速和分离量大的优点，且具体分离步骤简单易操作；所得的新化合物(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇未见报道，在作为香料、驱除白蚁、驱虫等方面具有潜在活性和用途，对于海洋天然产物有效成分的研究具有十分重要的意义。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1为本发明分离得到的(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇在15％乙腈洗脱时的uplc分析图谱。
图2为本发明分离得到的(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇的ms图谱。
图3为本发明分离得到的(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇的1h图谱。
图4为本发明分离得到的(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇的13c图谱。
具体实施方式
下面通过实施例具体说明本发明的内容：
1)将湿重10kg的皱瘤海鞘冻干后，切成碎片，以粉碎机打碎置于5000ml烧杯中，用乙酸乙酯超声加速浸提若干次直至浸提液呈无色后，合并浸提液，旋转蒸发仪抽干溶剂，浓缩得到粗提物(qe)；
2)步骤1)得到的粗提物(qe)27.1g，用甲醇溶解，用高速逆流液相色谱分离：
高速逆流液相色谱系统tbe-300b；溶剂体系为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝1:1:1:1(v/v)，按比例将四种溶剂混合配制好，摇匀，超声30min使其充分混合，静置过夜使上下相充分饱和平衡，分层，分离上相与下相；
开主机；以上相为流动相，以下相为流动相，用40ml/min的流速将固定相泵满聚四氟乙烯管，调节转速为850r/min，恒温水浴35℃，以3ml/min的流速向柱中泵入流动相，当流动相从主机出口稳定流出时，证明体系已经达到流体动力学平衡；计算分配系数k值为60％；
取上述用甲醇溶解的粗提物，用上相(根据需要也可适当加些下相)溶解为浓度500mg/ml；进样量14ml；以上相为固定相，以下相为流动相，流速3ml/min泵入柱中，仪器为正接正转，转速850r/min；温度35℃；柱口流出物通过紫外检测器在210nm下连续监测；收集70～123min出峰对应的流出物为第一组份，收集123～252min出峰对应的流出物为第二组份；然后改为以下相为固定相，以上相为流动相，流速3ml/min泵入柱中，仪器为反接正转，转速850r/min，温度35℃，收集252～315min出峰对应的流出物为第三组份；分离完成后，停止主机，用空气将柱内溶剂推出，吹干；第一组份、第二组份、第三组份分别旋转蒸发得到qe-1、qe-2、qe-3。
或者，也可按照分配系数k值收集，收集1k值对应的流出物得到上述的第一组份，收集2k、3k值对应的流出物得到上述的第二组份，仪器反接正转后，收集流出物得到上述的第三组份，可以与本实施例之中按照保留时间分别收集的方式实现相同的技术效果。
3)取步骤2)中70～123min出峰对应的第一组份(qe-1)17.83g，用反相制备液相色谱分离：
4)收集步骤3)中流动相中甲醇浓度为69％～100％时对应的组份(qe-1-6)，用高速逆流液相色谱分离：
高速逆流液相色谱系统tbe-300b；溶剂体系为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝2:1:1:3(v/v)，按比例将四种溶剂混合配制好，摇匀，超声30min使其充分混合，静置过夜使上下相充分饱和平衡，分层，分离上相与下相；
开主机；以上相为流动相，以下相为流动相，用40ml/min的流速将固定相泵满聚四氟乙烯管，调节转速为850r/min，恒温水浴35℃，以3ml/min的流速向柱中泵入流动相，当流动相从主机出口稳定流出时，证明体系已经达到流体动力学平衡；
取上述的步骤3)中甲醇浓度69％～100％时对应的组份(qe-1-6)，用上相(根据需要也可适当加些下相)溶解为浓度500mg/ml；进样量14ml；以上相为固定相，以下相为流动相，流速3ml/min泵入柱中，仪器为正接正转，转速850r/min；温度35℃；分别收集38～42min、42～47min、47～303min、303～375min出峰对应的四个组份，选用第二出峰(42～47min)对应的组份(qe-1-6-2)；分离完成后，停止主机，用空气将柱内溶剂推出，吹干；
5)取步骤4)中收集的第二出峰(42～47min)对应的组份(qe-1-6-2)856.8mg，用甲醇配制成100mg/ml，用高效液相色谱分离：
岛津高效液相色谱仪制备系统lc-6ad，lc-6ad(shimadzu)溶液传输单元，sil-10ap高效进样器，spd-m20a高灵敏度二级管阵列检测器；固定相：ymc-triartc18半制备柱(10×250mm，粒径5μm)；流动相：甲醇浓度为50％的甲醇-水混合液，再加入0.1％的甲酸；流速：2ml/min；进样量1ml；柱温25℃；检测波长：200nm和210nm；分离得到七个组份，收集第二出峰(117～127min)对应的组份(qe-162-2)；
6)取步骤5)中收集的第二出峰(117～127min)对应的组份(qe-162-2)105mg，用50％甲醇配制成50mg/ml，用高效液相色谱纯化：
岛津高效液相色谱仪制备系统lc-6ad，lc-6ad(shimadzu)溶液传输单元，sil-10ap高效进样器，spd-m20a高灵敏度二级管阵列检测器；固定相：ymc-triartc18半制备柱(10×250mm，粒径5μm)；流动相：甲醇浓度为50％的甲醇-水混合液，再加入0.1％的甲酸；流速：2ml/min；进样量1ml；柱温25℃；检测波长：200nm和210nm；收集205min的大峰对应的组份，浓缩得到化合物约8mg，纯度为95％，uplc分析情况如图1，uplc参数如下：
uplc型号：nexerax2岛津；
检测器：spd-m20a；
色谱柱：ymc-triartc18柱，50×3.0mm，粒径1.9μm；
液相条件：
流动相：乙腈-水混合液，5％乙腈→100％乙腈，20min；
流速：0.3ml/min，柱温：35℃，进样量：1.0μl；
检测波长：210nm。
上述分离方法得到的化合物为黄色油状，由正离子分辨质谱(图2)确定其分子式为c10h18o，ms类型为esi源，分子离子峰为154，[m+h+]m/z测得值155.1542，计算值155.1504，由红外光谱ir图显示有oh基(3300)的伸缩信号，根据1h-nmr图谱(图3)表明该化合物分子式中有一个末端甲基ch3：δ0.83(3h,t)，五个亚甲基：δ1.91[2h,m,h-6]，δ1.93[2h,m,h-10]，δ1.98[2h,m,h-7]，δ2.24[2h,brd(6.24),h-3]，δ3.87[2h,brt(6.60,6.60),h-2]，其中h-2为接氧亚甲基，四个双键质子：δ5.35[1h,dt(15.10,6.20),h-4]，δ544[1h,dt(15.10,6.20),h-5]，δ5.20[1h,dt(15.00,7.10),h-8]，δ5.25[1h,dt(15.00,7.20),h-9]，推测此化合物为癸二烯醇类化合物。
cosy2维图显示h-2/h-3，h-3/h-4，h-4/h-5，h-6/h-5，h-7/h-8，h-8/h-9，h-9/h-10，h-10/h-11，有氢氢相关可连出一个癸二烯醇的骨架(如图3)，由hmqc和hmbc2维图显示h-2/c-3,4,h-4/c-5,6,2,h-6/c-7,5,h-7/c-6,8,9，h-9/c-8,10,11,有氢碳相关，可进一步确定癸-3,7-二烯-1-醇的平面结构，最后由h-4和h-5，h-8和h-9的偶合常数分别为15.10和15.00显示双键的立体为反式，可以此新化合物结构确定为(e,e)癸-3,7-二烯-1-醇(deca-3,7-dien-1-ol)，其结构式如下式所示：
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。