本发明属于血清制备技术领域，特别涉及一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法。
背景技术：
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。现有的胎牛血清制备工艺复杂、成本高，且纯度低，不利于体外细胞培养。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，包括以下步骤：
1)采用含有体积含量5％～8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2％～0.6％柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液a置入取血容器内充分滋润容器内壁；
2)将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；
3)将混合均匀的含有胎牛血液的混合液b置入采血试管，保持血液在39℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以30000～14000r/min转速旋转20分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；
4)将已存放血浆的采血试管置入-22℃～0℃环境下保存备用；
5)取6g～12g氯化钠、0.1g～0.5g磷酸二氢钾和1.4g～2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300ml～700ml去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为18％～25％的盐酸溶液调节ph为7.3～7.5，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25～38℃，静置8～20min，得混合液c；
6)将上述的混合液c放入离心机中离心分离8～20min，转速设定为3000-10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8～2.4mpa，温度设定为38～47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；
7)将半透膜上部残留物按0.3～10.0％的体积比例加入辛辛酸液，调节ph至4.0～7.5，搅拌时间0.3～5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3～1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。
作为优选，所述步骤1)中采用含有体积含量6％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.5％柠檬酸钠的水溶液进行混合得混合液a。
与现有技术相比，本发明所具有的有益效果是：本发明提取胎牛血清的工艺简单、易操作，能够保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养。
具体实施方式
为使本领域技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作详细说明。
一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，包括以下步骤：
1)采用含有体积含量5％～8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2％～0.6％柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液a置入取血容器内充分滋润容器内壁；
2)将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；
3)将混合均匀的含有胎牛血液的混合液b置入采血试管，保持血液在39℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以30000～14000r/min转速旋转20分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；
4)将已存放血浆的采血试管置入-22℃～0℃环境下保存备用；
5)取6g～12g氯化钠、0.1g～0.5g磷酸二氢钾和1.4g～2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300ml～700ml去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为18％～25％的盐酸溶液调节ph为7.3～7.5，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25～38℃，静置8～20min，得混合液c；
6)将上述的混合液c放入离心机中离心分离8～20min，转速设定为3000-10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8～2.4mpa，温度设定为38～47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；
7)将半透膜上部残留物按0.3～10.0％的体积比例加入辛辛酸液，调节ph至4.0～7.5，搅拌时间0.3～5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3～1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。
作为优选，所述步骤1)中采用含有体积含量6％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.5％柠檬酸钠的水溶液进行混合得混合液a。
本发明提取胎牛血清的工艺简单、易操作，能够保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养。
以上实施例仅为本发明的示例性实施例，不用于限制本发明，本发明的保护范围由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本发明的实质和保护范围内，对本发明做出各种修改或等同替换，这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。