专利名称：一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞培养的方法，特别是涉及一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法。
背景技术：
对人工培养细胞来说， 一般要求在培养液中含有5%-20%的血清，血清主要作用包括提 供基本营养物质；提供激素和各种生长因子；提供结合蛋白；提供促接触和伸展因子使细 胞贴壁免受机械损伤；对培养中的细胞起到某些保护作用。但是使用血清培养细胞也存在 以下缺点(1)对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损 伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常 状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)； (2)血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反 应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响 细胞生长，甚至造成细胞死亡；(3)动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异 甚大，其成分不能保持一致；(4)取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响， 可能导致实验失败或实验结果不可靠；(5)血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其 中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成；(6)大规模生产 中，血清来源越来越困难，价格昂贵。由于血清既昂贵又使用不方便，现有技术中的高血清浓度不良影响尤为明显，因此， 亟需一种能在较低的血清浓度或无血清的条件下培养细胞的方法。 发明内容本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法。本发明的技术方案概述如下一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其特征是包括如下步骤用含容积比为 0-1%的血清培养液，在高于1个标准大气压10-180mmHg的压力下培养细胞20-50h。 优选的是培养液中血清的浓度为0-0.5%。本发明的一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其关键是利用应压力代替较高浓 度的血清。细胞在无血清或低血清和一定应压力的条件下生长，可降低实验成本，简化实 验条件、减轻或排除血清中种类繁多的生长因子对细胞生长的影响，有利于更准确的观察 特定实验刺激如单一的生长刺激因子或单一的生长抑制因子的生理、药理和病理的作用。 无血清或低血清细胞培养，为廉价生产基因工程相关产物，如单克隆抗体提供了可能。
图1为不同压力对平滑肌细胞生长的影响。图2为含容积比0. 5%血清常压培养24h的人脐静脉内皮细胞。图3为含容积比0. 5%血清高于1个标准大气压180mmHg压力培养24h的人脐静脉内 皮细胞。图4为无血清常压培养48h的大鼠平滑肌细胞。图5为无血清高于1个标准大气压lOO隱Hg压力培养48h的大鼠平滑肌细胞。图6为可调压力细胞培养箱示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。 实施例1低血清培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12株)37°C、 5%(:02条件，HUVEC-12细胞常压培养于含容积比为10%胎牛血清、100 U/ml 青霉素和100 U/ml链霉素的DMEM完全培养基中，待生长融合后，细胞用含容积比0. 5% 胎牛血清的DMEM洗三次，并用0. 5%胎牛血清的DMEM培养24h，使其同步化，继续分别在 高于1个标准大气压OmmHg和180mraHg恒压、37°C、 5%0)2条件下培养细胞24h。结果见图2和图3，图3显示高压培养的血管内皮细胞在0.5%胎牛血清的条件下，细 胞生长速度较常压培养的血管内皮细胞在0.5%胎牛血清的条件下(图2)生长速度快，细 胞计数结果显示高压培养比常压培养细胞数增加30%。5%(:02混合气体由衡阳市西园气站提供(也可以采用其它企业出售的5%0)2混合气 体)。可调压力细胞培养箱由普通细胞培养箱改造，培养箱门被改装加固能承受一定的压力。 另外在外面设置了压力控制器可以稳定压力。具体结构见图6。 实施例2无血清培养血管平滑肌细胞大鼠第10代平滑肌细胞PBS洗三次，传代后分别在高于1个标准大气压OmmHg和 100mmHg恒压、37°C、 5%(:02条件下培养于含100U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的无血 清的DMEM培养液中，培养细胞48h。结果见图4和图5，图4显示，无血清常压培养细胞全部凋亡，图5显示无血清高压 培养大鼠平滑肌细胞仍能生长繁殖。 实施例3无血清培养血管平滑肌细胞大鼠第10代平滑肌细胞PBS洗三次，传代后在高于1个标准大气压10mmHg恒压、 37°C 、 5%C02条件下培养于含100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的无血清DMEM培养液 中，培养细胞50h。 实施例4低血清培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12株) HUVEC-12细胞生长融合后，PBS洗三次，传代后在高于1个标准大气压180 mmHg恒压、 37°C、 5%C0条件下用含100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的0. 5%胎牛血清DMEM培养 24h。 实施例5低血清培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12株)HUVEC-12细胞生长融合后，PBS洗三次，传代后在高于1个标准大气压150 mmHg恒压、 37°C、 5%C0条件下用含100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的0. 1%胎牛血清DMEM培养 20h。 实施例637°C、 5%0)2条件，大鼠第3-10代平滑肌细胞常压培养于含体积分数为10%胎牛血 清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的DMEM完全培养基中，待生长融合后，细胞用含 PBS洗三次，用10%血清的DMEM高于1个标准大气压0 mmHg和30mmHg—180ramHg恒压培 养24h，采用血管紧张素ll作为阳性对照组(见图l)。上述结果提示含10%的血清培养液条件下，高压培养还能促进细胞的生长。同时说明 可调压力细胞培养箱能够正常工作。
权利要求
1.一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其特征是包括如下步骤用含容积比为0-1％的血清培养液，在高于1个标准大气压10-180mmHg的压力下培养细胞20-50h。
2. 根据权利要求1所述的一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其特征是所述培养 液中血清的浓度为0-0.5%。
全文摘要
本发明公开了一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，包括如下步骤用含容积比为0-1％的血清培养液，在高于1个标准大气压10-180mmHg的压力下培养细胞20-50h，本发明的一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其关键是利用应压力代替较高浓度的血清，细胞在无血清或低血清和一定应压力的条件下生长，可降低实验成本，简化实验条件、减轻或排除血清中种类繁多的生长因子对细胞生长的影响，有利于更准确的观察特定实验刺激如单一的生长刺激因子或单一的生长抑制因子的生理、药理和病理的作用，无血清或低血清细胞培养，为廉价生产基因工程相关产物，如单克隆抗体提供了可能。
文档编号C12N5/06GK101113432SQ200710057738
公开日2008年1月30日 申请日期2007年6月25日 优先权日2007年6月25日
发明者廖端芳, 佳 张, 凯 李, 李君牧, 莉 肖, 许灿新, 陈成立 申请人:南华大学