一种桃胶多糖及其制备方法与流程

本发明涉及中药
技术领域：
，具体而言，涉及一种桃胶多糖及其制备方法。
背景技术：
桃胶是桃树蔷薇科植物的树干受损伤如虫咬、切伤等或致病后分泌出来的胶质半透明物质。《唐本草》记载：“桃胶，味甘苦，平，无毒，主下石淋，破血，中恶疰忤。”《本经逢源》指出“桃树上胶，最通津液，能治血淋，石淋。痘疮黑陷，必胜膏用之。”而桃胶中主要成分为多糖，其多糖含量高达90％以上。大量的研究证实多糖的药理作用十分广泛，诸如提高免疫、抗肿瘤、清除自由基抗衰老、抗感染、降血脂、降血糖等作用。现有的桃胶聚合度大，葡萄糖醛酸含量又低，水溶性很差，一般只能浸胀，而很难溶解。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种桃胶多糖的制备方法，方法简单，产率高。本发明的第二目的在于提供一种桃胶多糖，由上述制备方法制备得到，溶解性好，有利于制剂的开发应用。基于上述第一目的，本发明是采用以下技术方案实现的：一种桃胶多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)、在水中加入桃胶浸泡后加热煮沸4－6h，过滤，取滤液；(2)、在滤液中加入二氯甲烷和正己烷混合溶剂，分液，取上层液；(3)、将上层液与醇类混合提取得到桃胶多糖。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述步骤(1)中，水与桃胶的质量比为1：(80－120)。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述步骤(1)中，浸泡在60－80℃条件下进行。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述步骤(2)中，二氯甲烷和正己烷的体积比为(3－7)：1。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述步骤(2)之间，还包括进行第一次浓缩的步骤，步骤(2)之后，还包括进行第二次浓缩的步骤。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述第二次浓缩之后，还包括加入双氧水进行脱色的步骤。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述步骤(3)中，醇类为乙醇。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述乙醇的质量浓度为90％－100％。进一步地，本发明较佳的实施例中，上述乙醇的质量是上层液质量的4－6倍。基于上述第二目的，本发明是采用以下技术方案实现的：一种桃胶多糖，由上述桃胶多糖的制备方法制备得到。本发明的较佳实施例提供的桃胶多糖的制备方法的有益效果是：先使桃胶在水中溶胀，桃胶中的碳水化合物在水中不断发生水解产生不溶于水中的物质，同时，桃胶中的多糖和蛋白质进入水中，通过过滤以后，得到的滤液中主要含有桃胶多糖、蛋白质和水等。在滤液中加入二氯甲烷和正己烷混合溶剂，可以使滤液中的蛋白质变性，并通过分液，得到桃胶多糖的悬浮液。通过醇类进行醇沉，使桃胶多糖与水分离，从而得到桃胶多糖。此制备方法得到的桃胶多糖的产率高。本发明提供的桃胶多糖具有较好的溶解性，利于人体的吸收。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图也属于本发明的保护范围。图1为本发明实施例2提供的桃胶多糖的红外光谱分析图；图2－图4为本发明实验例4提供的桃胶多糖的制备方法的响应面分析图。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本发明实施例的桃胶多糖及其制备方法进行具体说明。桃胶多糖的制备方法包括如下步骤：1、在水中加入桃胶浸泡后加热煮沸4－6h，过滤，取滤液。先使桃胶在水中溶胀，桃胶中的碳水化合物在水中不断发生水解产生不溶于水中的物质，同时，桃胶中的多糖和蛋白质进入水中，通过过滤以后，得到的滤液中主要含有桃胶多糖、蛋白质和水等。可选地，水与桃胶的质量比为1：(80－120)，使桃胶的溶胀和水解效果好，以便后续能够分离出更多的桃胶多糖，提高桃胶多糖的产率。浸泡在60－80℃条件下进行，使桃胶的溶胀和水解效果更好，以便后续能够分离出更多的桃胶多糖，提高桃胶多糖的产率。将滤液进行第一次浓缩，提高滤液的浓度。可选地，第一次浓缩为减压浓缩，可选地，减压浓缩在旋转蒸发仪中进行，以便后续能够在使用较少的混合溶剂的情况下使第一次浓缩后的滤液蛋白质变性。详细地，先将原桃胶打磨成桃胶粉，过筛除大颗粒杂质，在80－120质量份的蒸馏水中加入1质量份的桃胶份，放入温度为60－80℃的恒温烘箱中进行浸泡后加热煮沸4－6h，采用纱布过滤，取滤液。将滤液置于旋转蒸发仪中浓缩，得到浓缩滤液。2、在滤液中加入二氯甲烷和正己烷混合溶剂，分液，取上层液。二氯甲烷和正己烷可以使滤液中的蛋白质变性，并通过分液，得到桃胶多糖的悬浮液。可选地，二氯甲烷和正己烷的体积比为(3－7)：1，以便浓缩滤液中的蛋白质完全变性，使桃胶多糖的纯度高，并且，能够避免多糖发生变化，桃胶多糖的得率高。可选地，混合试剂的量和浓缩滤液的量一致。在不浪费混合试剂的情况下，使混合试剂和浓缩滤液能够混合，以便浓缩滤液中的蛋白质能够充分变性，并在后续将变性的蛋白质分离。可选地，通过分液漏斗将变性的蛋白质分离，通过分液漏斗分液以后，上层为桃胶多糖悬浮液，中层为蛋白，下层为二氯甲烷和正己烷的混合溶剂。可选地，将混合溶剂和浓缩滤液混合使蛋白变性，并通过分液漏斗将变性的蛋白去除可以多次进行，以便能够完全去除浓缩滤液中的蛋白。桃胶多糖的悬浮液经过旋转蒸发仪的第二次浓缩以后，使其浓度增加，并且，浓缩以后的上层液为焦糖色，不美观。可以加入体积分数为30％的双氧水进行脱色，使其成为亮白色。详细地，将二氯甲烷和正己烷混合溶剂加入到浓缩滤液中使两者混合，通过分液漏斗分液，取上层液经过旋转蒸发仪的第二次浓缩以后得到浓缩上层液，加入体积分数为30％的双氧水进行脱色，得到脱色后的上层液。3、将上层液与醇类混合提取得到桃胶多糖。通过醇类进行醇沉，使桃胶多糖与水分离，从而得到桃胶多糖。可选地，醇类为乙醇。乙醇的质量浓度为90％－100％。乙醇的质量是上层液质量的4－6倍。可选地，乙醇的质量是脱色后的悬浮液的质量的4－6倍，以便能够将桃胶多糖醇沉，得到纯桃胶多糖。醇沉后的桃胶多糖通过离心分离，取固态物质，并将其通过烘箱烘干，打磨成粉，得到成品桃胶多糖。详细地，在脱色后的上层液中加入质量浓度为90％－100％的乙醇进行醇沉12－24h，离心分离、干燥、打磨成粉，得到成品桃胶多糖。一种桃胶多糖，由上述桃胶多糖的制备方法制备得到。制得的桃胶多糖具有很好的溶解性，容易被人体吸收，具有更高的药用价值。实施例1一种桃胶多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)、在水中加入桃胶浸泡后加热煮沸5h，过滤，取滤液。(2)、在滤液中加入二氯甲烷和正己烷混合溶剂，分液，取上层液。(3)、将上层液与醇类混合提取得到桃胶多糖。实施例2一种桃胶多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)、先将原桃胶打磨成桃胶粉，过筛除大颗粒杂质，在110质量份的蒸馏水中加入1质量份的桃胶份，放入温度为70℃的恒温烘箱中进行浸泡后加热煮沸5h，采用纱布过滤，取滤液。将滤液置于旋转蒸发仪中浓缩，得到浓缩滤液。(2)、将二氯甲烷和正己烷混合溶剂加入到浓缩滤液中使两者混合，通过分液漏斗分液，重复多次，直到中层无蛋白层，取上层液经过旋转蒸发仪的第二次浓缩以后得到浓缩上层液，加入体积分数为30％的双氧水进行脱色，得到脱色后的上层液。(3)、在脱色后的上层液中加入质量浓度为95％的乙醇进行醇沉16h，离心分离、干燥、打磨成粉，得到成品桃胶多糖。实施例3一种桃胶多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)、先将原桃胶打磨成桃胶粉，过筛除大颗粒杂质，在80质量份的蒸馏水中加入1质量份的桃胶份，放入温度为60℃的恒温烘箱中进行浸泡后加热煮沸4h，采用纱布过滤，取滤液。将滤液置于旋转蒸发仪中浓缩，得到浓缩滤液。(2)、将二氯甲烷和正己烷混合溶剂加入到浓缩滤液中使两者混合，通过分液漏斗分液，取上层液经过旋转蒸发仪的第二次浓缩以后得到浓缩上层液，加入体积分数为30％的双氧水进行脱色，得到脱色后的上层液。(3)、在脱色后的上层液中加入质量浓度为90％的乙醇进行醇沉12h，离心分离、干燥、打磨成粉，得到成品桃胶多糖。实施例4一种桃胶多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)、先将原桃胶打磨成桃胶粉，过筛除大颗粒杂质，在120质量份的蒸馏水中加入1质量份的桃胶份，放入温度为80℃的恒温烘箱中进行浸泡后加热煮沸6h，采用纱布过滤，取滤液。将滤液置于旋转蒸发仪中浓缩，得到浓缩滤液。(2)、将二氯甲烷和正己烷混合溶剂加入到浓缩滤液中使两者混合，通过分液漏斗分液，取上层液经过旋转蒸发仪的第二次浓缩以后得到浓缩上层液，加入体积分数为30％的双氧水进行脱色，得到脱色后的上层液。(3)、在脱色后的上层液中加入质量浓度为100％的乙醇进行醇沉24h，离心分离、干燥、打磨成粉，得到成品桃胶多糖。实验例1将实施例2提供的制备方法得到的桃胶多糖进行红外光谱分析得到图1。从图1可以看出，在波数3398.57cm－1处的强吸收峰为羟基的伸缩振动，2933.73cm－1处为－ch2的非对伸缩振动，而在1624.06cm－1带有许多小锯齿状的中强度吸收峰，说明为桃胶多糖的－cho。1419.61－1200.00cm－1之间有较大的锯齿状吸收峰，说明有苯环的三个特征骨架振动，而在1043.49cm－1处有较强吸收峰，表明有c－0－c的伸缩振动。结果证明本发明所制备的为一种多糖。实验例2以实施例2提供的方法，在条件相同的情况下，进行三组实验。分别是步骤1中的浸泡时间不同，步骤1中的桃胶粉与水的比例不同，步骤3中的乙醇的浓度不同，进行三组单因素对比实验，得到表1。表1各参数对桃胶多糖提取率的影响煮沸时间(h)提取率料液比提取率乙醇质量分数(％)提取率454％1：8059％9060.5％4.558％1：9061％9261％562％1：10062.5％9461.5％5.563％1：11062.3％9562.1％660％1：12062％9862.2％6.558％1：13053％10062.3％从表1中可以看出，煮沸时间为5－6h时，提取率较高；桃胶粉与水的比例为1：(100－120)时，提取率较高；乙醇的浓度为95％－100％时，提取率较高。实验例3以实施例3提供的方法，在条件相同的情况下，仅混合溶剂为变量，得到的桃胶多糖的提取率如表2。表2溶剂对桃胶多糖提取率的影响从表2中可以看出，混合溶剂中，二氯甲烷：正己烷的体积比为＝(4－6)：1时，进行蛋白变性的重复次数较少，提取率较高，提高制备效率，降低混合溶剂的消耗。实验例4从实验例2中可以看出，煮沸时间、料液比、乙醇质量分数为提取率的考察因子。分别用x1、x2、x3表示，并以－1、0、1分别代表自变量的低、中、高水平，采用design－expert8.0.6软件对实验数据进行回归分析。该模型通过最小二乘法拟合二次多项方程可以表达为：y为预测响应值，即桃胶多糖得率。β0为常数项；βi为线性系数，βii为二次项系数，βij为交互项系数，xi，xj(i≠j)为自变量编码值。实施响应曲面法筛选方案，如表3：表3：响应曲面法筛选条件按照实施例4提供的方法，使用表3中的参数进行制备，加权结果如表4。表4加权结果design－expert8.0.6软件处理得响应面分析结果如图2－图4，加权后再采用响应曲面法优化提取工艺，得到最佳的提取条件。结合提取工艺步骤，从节省原料及环境保护，清洁的角度考虑，我们得到最佳的筛选工艺的条件，即煮沸时间为5h，料液比为1：100，乙醇质量分数为95％时为本发明实施例优化工艺的最佳条件。以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。当前第1页12