一种干细胞增殖促进剂的制作方法

本发明属于干细胞领域，涉及促进干细胞增殖的试剂。
背景技术：
：目前用于组织工程的种子细胞有骨髓间充质干细胞、牙周膜干细胞、胚胎干细胞等。骨髓间充质干细胞被证明是最理想的种子细胞，因为其容易获得，且在大量扩增时可以维持其多向分化潜能，所以对骨髓间充质干细胞的研究开发也最为热门。为了在短时间内体外大量获得骨髓间充质干细胞，研究者们一直在寻找开发可以促进骨髓间充质干细胞体外增殖的化合试剂。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种促进骨髓间充质干细胞增殖的试剂。本发明上述目的通过如下技术方案实现：一种促进干细胞增殖的试剂，活性成分为去氢钩藤碱。进一步地，所述干细胞为骨髓间充质干细胞。去氢钩藤碱在促进干细胞增殖方面的应用。进一步地，所述干细胞为骨髓间充质干细胞。一种促进干细胞增殖的试剂，活性成分为去氢毛钩藤碱。进一步地，所述干细胞为骨髓间充质干细胞。去氢毛钩藤碱在促进干细胞增殖方面的应用。进一步地，所述干细胞为骨髓间充质干细胞。有益效果：本发明发现，去氢钩藤碱、去氢毛钩藤碱具有显著促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用，显著优于钩藤碱、毛钩藤碱。因此，去氢钩藤碱、去氢毛钩藤碱可以制备成促进骨髓间充质干细胞体外增殖的试剂。附图说明图1为钩藤碱、去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱的化学结构式；图2为钩藤碱、去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱对骨髓间充质干细胞增殖的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。一、实验材料钩藤碱、去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱纯度不低于98％，化学式如图1所示。大鼠采用24个月龄健康雄性sd大鼠。低糖dmem培养基(dmem-lg)、胎牛血清(fbs)购自美国hyclone公司；四甲基偶氮唑盐mtt购自美国sigma公司。二、实验方法1、骨髓间充质干细胞分离培养采用全骨髓贴壁法培养，大鼠麻醉后，75％乙醇浸泡5min，无菌条件取单侧股骨、胫骨，剔除肌肉附着组织，眼科剪刀剪去两侧骺端，用1ml注射器抽取完全培养基(含10％fbs的dmem-lg)反复冲洗骨髓腔，直至冲洗液透亮，收集细胞悬液，1000r/min室温离心5min，用完全培养基重悬细胞，按5×106ml密度接种于25cm2细胞培养瓶中，37℃、5％co2培养箱中静止培养。24h后更换培养基，以后每48～72h更换培养基。当细胞逐渐铺满瓶底80％～90％后按照1:3进行细胞传代。2、mtt法检测bmscs增殖活性第3代骨髓间充质干细胞铺满瓶底80％～90％时，胰酶消化，在96孔板中每孔中央配置200μl的单细胞悬液(含待测细胞2000个/孔)，待细胞贴壁后，吸弃培养基，添加：1)钩藤碱组：200μl含5μm钩藤碱的完全培养基；2)去氢钩藤碱组：200μl含5μm去氢钩藤碱的完全培养基；3)毛钩藤碱组：200μl含5μm毛钩藤碱的完全培养基；4)去氢毛钩藤碱组：200μl含5μm去氢毛钩藤碱的完全培养基；5)对照组：200μl完全培养基；每组设6个复孔，37℃、5％co2培养箱中静止培养96h后，每孔加入mtt(5mg/ml)溶液20μl，继续培养4h，弃上清，每孔再加上dmso150μl，振荡10min，选择490nm波长测定各孔光吸收值(od)，计算增殖促进率(％)。增殖促进率(％)＝(给药组od值-对照组od值)/对照组od值×100％3、数据处理采用spss19.0统计软件进行数据分析，结果采用均值±标准差表示。多组样本均数间比较采用one-wayanova检验，p＜0.05为差异有统计学意义。三、实验结果各组d值及增殖促进率计算结果如表1和图2所示。表1各组od值及增殖促进率(％)od值增殖促进率(％)对照组0.4105±0.0142/钩藤碱组0.3863±0.0177-5.90去氢钩藤碱组0.5593±0.018636.25毛钩藤碱组0.4391±0.01656.97去氢毛钩藤碱组0.5906±0.017543.87结果表明，去氢钩藤碱、去氢毛钩藤碱具有显著促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用，显著优于钩藤碱、毛钩藤碱(其中，钩藤碱对骨髓间充质干细胞表现出一定的增值抑制作用)。因此，去氢钩藤碱、去氢毛钩藤碱可以制备成促进骨髓间充质干细胞体外增殖的试剂。上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。技术特征：技术总结本发明公开了一种干细胞增殖促进剂。本发明发现，去氢钩藤碱、去氢毛钩藤碱具有显著促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用，显著优于钩藤碱、毛钩藤碱。因此，去氢钩藤碱、去氢毛钩藤碱可以制备成促进骨髓间充质干细胞体外增殖的试剂。技术研发人员：胡艳受保护的技术使用者：胡艳技术研发日：2018.08.12技术公布日：2018.12.07