本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及的是一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基及发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌方法。
背景技术：
：发酵工程是指采用工程技术手段，利用生物(主要是微生物)和有活性的离体酶的某些功能，为人类生产有用的生物产品，或直接用微生物参与控制某些工业生产过程的一种技术。人们熟知的利用酵母菌发酵制造啤酒、果酒、工业酒精，乳酸菌发酵制造奶酪和酸牛奶，利用真菌大规模生产青霉素等都是这方面的例子。随着科学技术的进步，发酵技术也有了很大的发展，并且已经进入能够人为控制和改造微生物，使这些微生物为人类生产产品的现代发酵工程阶段。现代发酵工程作为现代生物技术的一个重要组成部分，具有广阔的应用前景。例如，用基因工程的方法有目的地改造原有的菌种并且提高其产量；利用微生物发酵生产药品，如人的胰岛素、干扰素和生长激素等。基于发酵工程的显著工业化生产优势，一系列通过发酵工程技术，发酵生产特定的有益菌、药物、细菌代谢物，得到广泛应用，如l-天冬氨酸基因工程菌的培养。l-天冬氨酸酶基因工程菌的菌体内含有大量的l-天冬氨酸酶(ec4.3.1.1)，而l-天冬氨酸酶是一种重要的工业用酶，该酶广泛存在于细菌、酵母和植物体中，该酶由4个相同亚基组成，催化氨和富马酸发生加成反应得到天冬氨酸。因此，改进l-天冬氨酸酶基因工程菌的发酵培养技术，对于提高生产l-天冬氨酸酶活性，提高l-天冬氨酸工业化生产意义重大。然而，目前l-天冬氨酸酶基因工程菌规模化培养存在的主要问题是生长较为缓慢，酶的活性不高，而合适的培养基能极大地促进l-天冬氨酸酶基因工程菌的生长，增加细胞密度，同时提高酶的活性。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于如何解决目前l-天冬氨酸酶基因工程菌规模化培养生长较为缓慢，酶的活性不高的问题。本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉2-10g/l、蛋白胨5-20g/l、乳糖1-10g/l、氯化钠1-10g/l、黄豆饼粉1-15g/l、玉米浆1-5g/l、籼米粉0.5-5g/l、钼酸铵0.5-2g/l、钴盐0.5-10mg/l。优选地，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述钴盐为硝酸钴。优选地，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉2-5g/l、蛋白胨5-10g/l、乳糖1-5g/l、氯化钠1-5g/l、黄豆饼粉1-10g/l、玉米浆1-5g/l、籼米粉1-5g/l、钼酸铵0.5-1g/l、硝酸钴0.5-5mg/l。优选地，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉4g/l、蛋白胨7g/l、乳糖3g/l、氯化钠4g/l、黄豆饼粉5g/l、玉米浆4g/l、籼米粉2g/l、钼酸铵0.7g/l、硝酸钴1.5mg/l。优选地，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉2.5g/l、蛋白胨6.5g/l、乳糖3.5g/l、氯化钠2.5g/l、黄豆饼粉7.5g/l、玉米浆2.5g/l、籼米粉3.5g/l、钼酸铵0.8g/l、硝酸钴1.5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。同时，本发明公开一种以上述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基为培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法，具体包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为25-37℃，调节培养基内培养液的ph为7.2-7.6，发酵培养8-14h后，即得。优选地，所述步骤s2中控制发酵温度为30℃，调节培养基内培养液的ph为7.5，发酵培养10h后，即得。优选地，所述步骤s2中控制发酵温度为32℃，调节培养基内培养液的ph为7.5，发酵培养8h后，即得。优选地，所述步骤s2中控制发酵温度为35℃，调节培养基内培养液的ph为7.3，发酵培养12h后，即得。本发明相比现有技术具有以下优点：1、培养基组分配方配伍合理，采用上述培养基培养l-天冬氨酸酶基因工程菌，不仅菌细胞密度大，且l-天冬氨酸酶基因工程菌增殖快速，细胞浓度较高。2、培养基组分中的硝酸钴能够明显促进l-天冬氨酸酶基因工程菌的增殖，能够促进l-天冬氨酸酶基因工程菌催化合成l-天冬氨酸，相对于现有技术公开的其他盐如镁盐、钙盐，硝酸钴对l-天冬氨酸酶基因工程菌的代谢影响更加显著。具体实施方式下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例1一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉2g/l、蛋白胨5g/l、乳糖1g/l、氯化钠1g/l、黄豆饼粉1g/l、玉米浆5g/l、籼米粉0.5g/l、钼酸铵0.5g/l、硝酸钴0.5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为30℃，调节培养基内培养液的ph为7.5，发酵培养10h后，即得。实施例2一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉10g/l、蛋白胨20g/l、乳糖10g/l、氯化钠10g/l、黄豆饼粉15g/l、玉米浆5g/l、籼米粉5g/l、钼酸铵2g/l、硝酸钴10mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为30℃，调节培养基内培养液的ph为7.5，发酵培养12h后，即得。实施例3一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉5g/l、蛋白胨10g/l、乳糖5g/l、氯化钠5g/l、黄豆饼粉10g/l、玉米浆5g/l、籼米粉5g/l、钼酸铵1g/l、硝酸钴5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为25℃，调节培养基内培养液的ph为7.6，发酵培养14h后，即得。实施例4一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉2g/l、蛋白胨5g/l、乳糖5g/l、氯化钠2g/l、黄豆饼粉5g/l、玉米浆2g/l、籼米粉0.5g/l、钼酸铵0.5g/l、硝酸钴0.5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为37℃，调节培养基内培养液的ph为7.2，发酵培养8h后，即得。实施例5一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉2g/l、蛋白胨5g/l、乳糖1g/l、氯化钠5g/l、黄豆饼粉10g/l、玉米浆5g/l、籼米粉1g/l、钼酸铵0.5g/l、硝酸钴5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为32℃，调节培养基内培养液的ph为7.2-7.6，发酵培养9h后，即得。实施例6一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉5g/l、蛋白胨10g/l、乳糖5g/l、氯化钠1g/l、黄豆饼粉1g/l、玉米浆1g/l、籼米粉5g/l、钼酸铵1g/l、硝酸钴0.5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为32℃，调节培养基内培养液的ph为7.5，发酵培养8h后，即得。实施例7一种l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，所述l-天冬氨酸酶基因工程菌培养基包括以下质量浓度的组分：酵母粉5g/l、蛋白胨10g/l、乳糖5g/l、氯化钠1g/l、黄豆饼粉1g/l、玉米浆1g/l、籼米粉5g/l、钼酸铵1g/l、硝酸钴0.5mg/l。上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基的制备方法如下：按照重量组份配比，将酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉和籼米粉混匀后，加入乳糖、氯化钠、钼酸铵和硝酸钴，加水搅拌均匀，灭菌后，即得。采用上述l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基，发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的方法包括以下步骤：s1、按照l-天冬氨酸酶基因工程菌的常规培养方法将l-天冬氨酸酶基因工程菌培养至对数期；s2、将对数期的l-天冬氨酸酶基因工程菌接种到l-天冬氨酸酶基因工程菌发酵培养基中，控制发酵温度为35℃，调节培养基内培养液的ph为7.3，发酵培养12h后，即得。发酵培养试验：为了验证采用上述实施例发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌的效果，进行以下发酵试验：试验方法：试验分为实验组、第一对照组和第二对照组，其中，实验组按照实施例1-6公开的培养基和发酵方法，进行发酵培养l-天冬氨酸酶基因工程菌。发酵完毕，称取l-天冬氨酸酶基因工程菌的平均湿重。第一对照组采用lb培养基，培养发酵l-天冬氨酸酶基因工程菌，发酵方法与实施例1相同，第二对照组与实验组的区别是:第二对照组使用的培养基中不添加有硝酸钴。试验结果如表1所示：表1试验/组别平均菌湿重/g/l实施例128.9实施例228.2实施例328.6实施例431.3实施例528.4实施例629.1第一对照组11.2第二对照组20.9由表1公开的数据可知：本发明公开的培养基配方，用于l-天冬氨酸酶基因工程菌的发酵培养中，l-天冬氨酸酶基因工程菌增殖更为显著，且组分中的硝酸钴能够明显提高l-天冬氨酸酶基因工程菌的增殖。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12