本发明涉及一种lesinurad中间体杂质二聚物及其制备方法和应用，属于药物合成及分析技术领域。
背景技术
痛风是由单钠尿酸盐沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关。全球痛风患者高达2000多万。lesinurad是一种促尿酸排泄口服药，可抑制肾脏近端小管尿酸转运子urat1。lesinurad的化学名为2-[[5-溴-4-(4-环丙基-1-萘)-4h-1，2，4-三唑-3-基]硫代]乙酸，cas号为878672-00-5，该药物的化学结构式如下所示：
目前，报道的关于lesinurad的工艺和晶型的研究极为活跃。如现有报道的以1-萘胺-4-环丙基为起始原料，与硫光气反应后制备4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯，再与甲酰肼反应，然后，在碳酸钠作用下环合得到关键中间体4-(4-环丙基-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇，再经过与溴乙酸甲酯缩合、nbs溴代，水解，得到相应的lesinurad产物。该反应可以通过以下方程式表示：
同时，对于lesinurad合成过程中的杂质报道，涉及的也较多，但是，关于其合成过程中产生的杂质结构及其控制的报道很少，给研究并控制lesinurad的质量带来很多困难。发明人经过大量的实验发现，lesinurad的质量直接取决于其合成中间体的质量控制，而lesinurad中间体的质量控制在分析方法的建立上必需使用杂质对照品进行定位，因而lesinurad中间体杂质是lesinurad质量控制的必需品。此外，杂质的存在还有可能引起严重的副作用，因而本领域迫切需要有效鉴定lesinurad合成中产生的杂质。
技术实现要素：
本发明针对以上现有技术中存在的缺陷，提供一种lesinurad中间体杂质二聚物及其制备方法和应用，解决的问题是如何实现提供能用于对lesinura中间体合成过程中杂质的分析和监控的对照品。
本发明的目的之一是通过以下技术方案得以实现的，一种lesinurad中间体杂质二聚物，该二聚物的结构式如下式ⅰ所示：
本发明的上述lesinurad中间体杂质二聚物，是本发明人在以4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯与甲酰肼反应合成中间体的过程中发现含有的未知杂质，而由于该中间体本身并不稳定难以纯化，这就需要将含有的该未知杂质带入后续的产物中，导致需经过重结晶纯化来提高质量，直接影响了收率和杂质的控制。在本发明经过大量的研究分析，发现了该未知杂质的结构式是以二聚物的形式，并经过分析该二聚物也正好能够对应以4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯与甲酰肼反应合成中间体的过程中发现含有的未知杂质，从而实现有效的提供该杂质的对照品，有效对该杂质的控制和分析，有利于提高产物的质量要求，避免因该杂质的存在而进行的重结晶和纯化等过程，有利于提高产物的收率和生产效率。也就是说，本发明lesinurad中间体杂质二聚物是监控lesinurad中间体及产物质量的必需对照品，能够有效鉴定lesinurad中间体合成中产生的杂质，从而控制lesinurad的药品质量。
本发明的目的之二是通过以下技术方案得以实现的，一种lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法，该方法包括以下步骤：
将式ⅱ化合物和甲酰肼进行反应得到的含有式ⅰ化合物lesinurad中间体杂质二聚物的式ⅲ化合物，再通过柱层析分离，分离出相应的式ⅰ化合物，得到式ⅰ结构式的lesinurad中间体杂质二聚物；
由于以式ⅱ化合物和甲酰肼进行反应过程是产生该二聚物杂质的主要工艺路线，在式ⅲ化合物的中间体中会含有该杂质成分，通过直接柱层析分离，能够有效的分离出该二聚物杂质，也能够保证较好的纯度质量要求，实现作为lesinurad产物的中间体的对照分析，且本方法具有产物提取便捷，利于实际操作，无需另外增加相应的设备和原料等要求。
在上述lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，作为优选，所述式ⅲ化合物中lesinurad中间体杂质二聚物的含量为1％～6％。一般在该式ⅲ化合物中的杂质的含量通过较少，而该中间体的杂质含量相对较高，说明可以直接采用原来的反应得到的中间体中直接分离得到，无法考虑其来源的合成过程，有利于实际生产需要，能够避免因该二聚物仅是杂质存在含量低不易分离出来的现象，一般使反应过程中控制该二聚物杂质的含量在5％以下，均可以保证直接从含中间体产物中将该二聚物杂质分离出来作为对照品作用，且也能够保证该分离出来的杂质本身的纯度要求。
在上述lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，作为优选，所述柱层析分离采用硅胶柱层析，所述硅胶柱层析采用200～300目的球状硅胶；所述硅胶柱层析采用的洗脱液为乙酸乙酯和正已烷的混合液。有利于洗脱分离，使式ⅲ化合物与该二聚物杂质的分离现象更明显，便于分段洗脱，进一步的保证洗脱的含二聚物杂质的洗脱液中该杂质的含量和质量要求，为后续更快捷的提供高纯度的杂质质量要求，避免过多的杂质纯化过程。作为进一步的优选，所述乙酸乙酯与正已烷的质量比为1：10～1：1。
在上述lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，对应该反应按照一般的合成工艺条件均可，保证反应的有效进行及ⅲ化合物中间体的合成，以及合成过程中产生的相应杂质二聚物。这里对于反应的溶剂一般在有机溶剂中进行即可。作为优选，所述反应在dmf溶剂中进行，且所述反应的温度为-10～30℃。使主要合成式ⅲ化合物中间体，保证该中间体是合成过程中的主要中间产物，避免杂质的过多形成，使不利于中间体的产物收率和原料的浪费。
在上述的lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，作为另一种实施方案，该lesinurad中间体杂质二聚物还可以通过以下方法合成得到，该方法包括以下步骤：
将式ⅱ化合物和联氨进行反应，得到相应的式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物；
通过直接以式ⅱ化合物和联氨(联氨又称为肼)为原料，能够一步法合成，得到相应的二聚物杂质化合物，具有工艺路线短，便于操作的优点，且由于反应过程中采用的原料相对较少，也能够减少不必要的其他杂质的产生，使有效的合成高纯度质量要求的该二聚物杂质，具有较高的收率和纯度质量要求。
在上述的lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，作为优选，所述反应在非水溶性溶剂中进行。使反应能够温和的进行，利于操作。
在上述的lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，作为优选，所述非水溶性溶剂为dmf，且所述反应的温度为-10～20℃。反应条件温和，使能够在较低的温度下就能保证反应的有效进行，有利于安全生产。
在上述的lesinurad中间体杂质二聚物的制备方法中，对于反应过程中原料的用量比例可以根据实际需要调整，按照一般的反应摩尔当量即可。作为优选，最好使所述式ⅱ化合物和联氨(联氨又称为肼)的摩尔比为1：1.0～2.0。既能够使反应充分反应，又不会造成原料的过多浪费。
本发明的目的之三是通过以下技术方案得以实现的，一种lesinurad中间体杂质二聚物的应用，如上述的lesinurad中间体杂质二聚物用于lesinurad中的杂质对照分析。
由于本发明的lesinurad中间体杂质二聚物是lesinurad合成过程中的杂质之一，而lesinurad的质量直接取决于其合成中间体的质量控制，而质量控制在分析方法的建立上必需使用相应杂质的对照品进行定位分析，因此能够作为lesinurad质量控制和分析过程中的杂质对照品进行对照分析的必需品，实现有效管控该杂质二聚物和准确的鉴定分析，有利于减少该杂质可能引起的严重副作用，提高药物的药效安全性。
综上所述，本发明与现有技术相比，具有以下优点：
1.本发明的杂质二聚物能够实现提供用于对lesinura中间体合成过程中杂质的分析和监控，有效的提供该杂质的对照品，有利于提高lesinura中间体及产物的质量要求，避免因该杂质的存在而进行的重结晶和纯化等过程，有利于提高产物的收率和生产效率。
2.本杂质二聚物的合成方法具有工艺简单和易于操作的优点，且得到的杂质二聚物具有纯度质量要求高的效果。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明，但是本发明并不限于这些实施例。
实施例1
将25g式ⅱ化合物4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯(les1)、10g甲酰肼加入反应瓶中，再加入dmf溶剂100ml，然后，控制水浴温度在20～30℃的条件下进行搅拌反应5h，反应结束后，将反应液慢慢倾倒至搅拌下的500ml冰水中，再继续搅拌1h，进行充分析晶，使有大量固体析出，过滤后，得到相应的就得到lesinura中间体式ⅲ化合物(les5)。通过分析该lesinura中间体式ⅲ化合物(les5)中含有对应式ⅰ化合物lesinurad中间体杂质二聚物。该式ⅲ化合物中lesinurad中间体杂质二聚物的含量为1％～6％之间。
实施例2
将25g式ⅱ化合物4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯(les1)、11g甲酰肼加入反应瓶中，再加入dmf溶剂100ml，然后，控制水浴温度在-10～10℃的条件下进行搅拌反应6h，反应结束后，将反应液慢慢倾倒至搅拌下的500ml冰水中，再继续搅拌1h，进行充分析晶，使有大量固体析出，过滤后，得到相应的就得到lesinura中间体式ⅲ化合物(les5)。通过分析该lesinura中间体式ⅲ化合物(les5)中含有对应式ⅰ化合物lesinurad中间体杂质二聚物。该式ⅲ化合物中lesinurad中间体杂质二聚物的含量为1％～6％之间。
实施例3
准备一根玻璃柱，里面填装200g的硅胶(200～300目)，其中的硅胶为球状硅胶，取10g实施例1得到的les5固体与20g硅胶(200～300目)混合均匀，放入上述玻璃柱的最顶端。配置500ml的洗脱液1(乙酸乙酯与正己烷重量比为1:6)和配置1000ml的洗脱液2(乙酸乙酯与正己烷重量比为1:4)，分别用洗脱液1和洗脱液2进行洗脱，在切换成洗脱液2进行洗脱之后，开始进行tlc薄层色谱监控，当出现相应的“二聚物”杂质化合物的单点时开始切换收集相应的洗脱液，一直到该“二聚物”杂质化合物的单点基本消失为止，合并含有该“二聚物”杂质化合物单点的所有洗脱液，在40～60℃下进行减压浓缩至干，就得到式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物(简称“二聚物”杂质)0.6g，纯度≥98％。
将得到的式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物进行相应的结构分析，具体分析结果如下：
hrms：calcdforc28h26n4s2482.16，found482.1487。
1h-nmr(400m,dmso-d6)δ:10.07(br,1h，nh),9.87(br,1h,nh),7.26-8.43(m,6h,arh),2.39-2.50(m,1h,ch),1.07-1.10(m,2h,ch2),0.73-0.77(m,2h,ch2)。
实施例4
准备一根玻璃柱，里面填装200g的硅胶(200～300目)，其中的硅胶为球状硅胶，取10g实施例2得到的les5固体与20g硅胶(200～300目)混合均匀，放入上述玻璃柱的最顶端。配置500ml的洗脱液1(乙酸乙酯与正己烷重量比为1:10)和配置1000ml的洗脱液2(乙酸乙酯与正己烷重量比为1:5)，分别用洗脱液1和洗脱液2进行洗脱，在切换成洗脱液2进行洗脱之后，开始进行tlc薄层色谱监控，当出现相应的“二聚物”杂质化合物的单点时开始切换收集相应的洗脱液，一直到该“二聚物”杂质化合物的单点基本消失为止，合并含有该“二聚物”杂质化合物单点的所有洗脱液，在40～60℃下进行减压浓缩至干，就得到式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物(简称“二聚物”杂质)0.52g，纯度≥98.5％。
将得到的式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物进行相应的结构分析，具体分析结果同实施例3中的hrms和1h-nmr(400m,dmso-d6)δ的分析结果相一致。
实施例5
将式ⅱ化合物4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯(les1)25g、联氨(又称肼)2g加入反应瓶中，再加入dmf100ml，然后，控制水浴温度0～5℃的温度条件下进行反应1h，就得到富含式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物(简称“二聚物”)的反应液，再经过硅胶柱层析(洗脱液采用乙酸乙酯与正己烷的重量比为1:4)，合并含有该二聚物杂质单点的所有洗脱液，在40～60℃的条件下减压浓缩至干，得到相应的式i化合物的lesinurad中间体杂质二聚物21g，纯度≥98％。
将本实施例方法得到的式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物进行相应的结构分析，具体分析结果如下：
hrms：calcdforc28h26n4s2482.16，found482.1487。
1h-nmr(400m,dmso-d6)δ：10.06(br,1h，nh),9.87(br,1h，nh),7.29-8.33(m,6h,arh),2.36-2.51(m,1h,ch),1.08-1.10(m,2h,ch2),0.74-0.79(m,2h,ch2)。
同样，说明采用直接合成的方法也能够有效的得到相应的二聚物杂质，且该杂质产物的纯度也较高。
实施例6
将式ⅱ化合物4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯(les1)25g、联氨(又称肼)3.2g加入反应瓶中，再加入dmf溶剂100ml，然后，控制水浴温度20～30℃的温度条件下进行反应1.0h，就得到富含式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物(简称“二聚物”)的反应液，再经过硅胶柱层析(洗脱液采用乙酸乙酯与正己烷的重量比为1:6)，合并含有该二聚物杂质单点的所有洗脱液，在40～60℃的条件下减压浓缩至干，得到相应的式i化合物的lesinurad中间体杂质二聚物22g，纯度≥98.5％。
将得到的式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物进行相应的结构分析，具体分析结果同实施例5中的hrms和1h-nmr(400m,dmso-d6)δ的分析结果相一致。
实施例7
将式ⅱ化合物4-环丙基-1-萘基异硫氰酸酯(les1)25g、联氨(又称肼)6.4g加入反应瓶中，再加入dmf溶剂100ml，然后，控制水浴温度15～20℃的温度条件下进行反应1.5h，就得到富含式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物(简称“二聚物”)的反应液，再经过硅胶柱层析(洗脱液采用乙酸乙酯与正己烷的重量比为1:4)，合并含有该二聚物杂质单点的所有洗脱液，在40～60℃的条件下减压浓缩至干，得到相应的式i化合物的lesinurad中间体杂质二聚物21.2g，纯度≥98.2％。
将得到的式i化合物lesinurad中间体杂质二聚物进行相应的结构分析，具体分析结果同实施例5中的hrms和1h-nmr(400m,dmso-d6)δ的分析结果相一致。
随机选取上述实施例得到的相应二聚物作为lesinurad中间体的对照品进行对照效果说明，来表明本发明的二取物能够有效的用于lesinurad中间体检测中的对照分析和监控质量的特性。
将上述实施例1的方法得到的lesinurad中间体(les5)进行液相色谱检测分析，检测结果的出峰情况如下表1所示，其中，表1中是les5的hplc图谱分析中各峰的保留时间和相对面积信息数据。
表1：
从上述表1中各峰数据信息表明其中，lesinurad中间体les5的色谱峰序号为5，如式i所示化合物二聚物杂质的出峰的色谱峰序号为4。
将上述实施例3得到的式i化合物的lesinurad中间体杂质二聚物(简称“二聚物”)进行液相色谱检测分析，色谱检测分析条件与上述les5的检测分析条件相一致，检测结果的出峰情况如下表2所示，其中，表2中是les5的hplc图谱分析中各峰的保留时间和相对面积信息数据。
表2：
从上述表2的中各峰数据信息表明，其中如式i所示的化合物二聚物杂质的色谱峰序号为2。可见，该二聚物杂质的出峰保留时间与les5的hplc检测分析中的相应保留时间处的杂质出峰一致，说明本发明的二聚物能够有效的作为lesinurad中间体的对照品应用，用于分析和监控相应的二聚物杂质，提高产物的质量要求。
综合以上各例及表1和表2的hplc检测分析数据的结果可见，本发明的lesinurad中间体“二聚物”杂质(如式i所示的化合物二聚物)能够有效鉴定lesinurad中间体中产生的杂质，并计算出其在lesinurad中间体中的含量，从而控制最终成品lesinurad的药品质量。
本发明中所描述的具体实施例仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。