含有膦酰基的羧酸盐、其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种含有膦酰基的羧酸盐及其制备方法。
背景技术：
：γ-谷氨酰转肽酶(γ-ggt，γ-glutamyltranspeptidase)，又称γ-谷氨酰转移酶，是一种水解谷胱甘肽(gsh)中甘氨酸和半胱氨酸之间的键(γ-glu-cys-gly)的细胞膜结合酶，gsh代谢的关键酶之一，并参与了氨基酸的跨膜转运，可特异性催化γ-谷氨酰基的转移反应，通过gsh代谢形式参与诸多生物活动。酶学研究表明，γ-ggt只对含γ-谷氨酰化合物如gsh及其巯基衍生物、l-γ-谷氨酰-对硝基苯胺等有光学和立体专一性催化作用。γ-ggt是生物体内催化利用gsh的最初也是最关键的一步，将gsh上的γ-谷氨酰基转到另一受体分子上，这些受体分子可以是l-氨基酸、二肽或是gsh分子自身。当受体为氨基酸、二肽或三肽时就发生转肽反应，形成相应的l-γ-谷氨酰氨基酸或l-γ-谷氨酰-二肽和三肽，且胺也可以作为酶反应受体底物。由于γ-谷氨酰转肽酶是谷胱甘肽稳态的关键酶，而谷胱甘肽是一种基本的三肽，不仅介导细胞的氧化还原平衡，而且介导外源性化合物的解毒和活性氧物质的清除，异常高水平的ggt可能通过谷胱甘肽的消耗和氧化应激的升高来破坏细胞。因此，ggt功能障碍与许多生理疾病如癌症，糖尿病，肝炎，肾炎，以及呼吸道和心血管疾病有密切的关系。目前，ggt代表了一个有吸引力的药物靶点。由于γ-ggt在谷氨酰胺代谢中的重要作用，抑制肿瘤细胞内谷氨酰胺酶的活性也成为抑制肿瘤生长的一个切入点。hayetaberkane等在体外实验中还发现γ-ggt抑制剂可以竞争γ-ggt的活性位点，抑制γ-ggt的活性，从而减少其对谷氨酰胺的酵解，阻断肿瘤细胞的营养供应，为临床治疗癌症提供了新思路。阿西维辛(at-125)是γ-ggt不可逆抑制剂，目前已得到广泛应用。阿西维辛对一些肿瘤的治疗有效，但是它不仅抑制γ-ggt还对天冬酰胺合成酶有抑制作用，有一定的毒副作用。为此，人们一直在寻找选择性更佳，安全性更高，活性更强的γ-ggt抑制剂。2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸是一种具有高度选择性的γ-ggt抑制剂，对天冬酰胺合成酶没有抑制作用；而且对人ggt的抑制作用是阿西维辛的约100倍。同时，现有技术报道了该化合物可以应用于化妆品中，但是由于该化合物对皮肤有刺激作用，从而限制了它的使用。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是现有技术中2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸(化合物i)对皮肤有刺激作用，从而提供一种化合物i的盐、其制备方法和应用。本发明的化合物i的盐减轻了化合物i对皮肤的刺激作用，从而能够更好地应用于化妆品中。本发明提供了一种化合物i的盐：所述的盐为钠盐、钾盐或铵盐(即nh4+)；每一分子的盐具有一分子的钠离子、钾离子或铵离子(即nh4+)。在本发明的一个实施方案中，所述的盐为钠盐。在本发明的一个实施方案中，所述的盐为钾盐。在本发明的一个实施方案中，所述的盐为铵盐。在本发明的一些实施方案中，所述的盐选自如下任一结构：本发明还提供了一种如上所述的盐的制备方法，其包括如下步骤：在溶剂中，将化合物i和碱进行中和反应，得到所述的盐即可，所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨气(即nh3)。所述的中和反应的反应条件可以为本领域该类反应的常规条件。所述的中和反应中，所述的溶剂可以为水和/或醇类溶剂，所述的醇类溶剂可以为甲醇和/或乙醇。在本发明的一个实施方案中，所述的溶剂为甲醇。在本发明的另一个实施方案中，所述的溶剂为乙醇。所述的中和反应中，所述的溶剂的用量可以不做具体限定，只要不影响反应进行即可。所述的化合物i和所述的碱的摩尔比可以为约1:1。所述的中和反应的反应温度可以为-10～20℃，例如0～5℃。当所述的碱为氨气时，氨气可以以溶液(如氨水、氨的醇溶液)的形式加入反应体系中。所述的中和反应一般以化合物i不再反应时作为反应终点，例如5-20min。所述的中和反应的操作可以包括如下步骤：将如式ii所示的化合物溶于溶剂中(溶液1)，将碱溶于溶剂中(溶液2)，在0～5℃下，将溶液2滴加入溶液1中。所述的中和反应的后处理可以采用如下步骤：反应完成后，蒸干溶剂后得到产品。本发明还提供了一种如上所述的盐在制备γ-谷氨酰转肽酶抑制剂中的应用。本发明还提供了一种如上所述的盐在制备用于治疗癌症的药物中的应用。本发明还提供了一种如上所述的盐作为化妆品添加剂的应用。本发明的化合物i和化合物i的盐还包括其互变异构体，化合物i的互变异构体的例子如下，化合物i的钠盐的互变异构体的例子如下：在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：本发明的化合物i的盐减轻了化合物i对皮肤的刺激作用，从而能够更好地应用于化妆品中。附图说明图1示出了效果实施例5中钠盐精华液测试品对疤痕部位黑色素的效果(*表示组间p<0.05)。图2示出了效果实施例5中钠盐精华液测试品对疤痕部位红色素的效果(*表示组间p<0.05)。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例1称取2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸3.33克，溶解于30ml甲醇中，用冰盐浴冷却至0℃以下，边搅拌边滴加0.4克氢氧化钠溶于10ml甲醇的溶液，继续搅拌5分钟，减压下脱去溶剂，残留物干燥得其钠盐3.55克。1hnmr(d2o)δh:1.72-1.98(2h,m),2.11-2.30(2h,m),3.70(2h,s),4.09(1h,dd,j＝6.0和6.0hz),7.05-7.07(3h,m),7.33(1h,dd,j＝7.7和7.7hz)。13cnmr(d2o)δc:25.2(d,j＝137hz),27.0(d,j＝2.9hz),42.9,56.0(d,j＝17.3hz),122.4(d,j＝4.3hz),124.6(d,j＝4.3hz),128.2,132.7,138.5,154.1(d,j＝7.2hz),174.4,179.2。31pnmr(d2o)δp:23.4。hresims(m/z):[m+h]+c13h18nnao7p,理论值：354.0719；实测值：354.1032。实施例2称取2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸3.33克，溶解于30ml甲醇中，用冰盐浴冷却至0℃以下，边搅拌边滴加0.56克氢氧化钾溶于10ml甲醇的溶液，继续搅拌5分钟，减压下脱去溶剂，残留物干燥得其钾盐3.69克。1hnmr(d2o)δh:1.71-1.98(2h,m),2.12-2.31(2h,m),3.71(2h,s),4.10(1h,dd,j＝6.0和6.0hz),7.04-7.08(3h,m),7.32(1h,dd,j＝7.7和7.7hz)。hresims(m/z):[m+h]+c13h18nko7p,理论值：370.0458；实测值：370.1154。实施例3称取2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸3.33克，溶解于30ml甲醇中，用冰盐浴冷却至0℃以下，边搅拌边滴加0.68克25％氨水溶于10ml甲醇的溶液，继续搅拌5分钟，减压下脱去溶剂，残留物干燥得其铵盐3.50克。1hnmr(d2o)δh:1.71-2.00(2h,m),2.13-2.32(2h,m),3.69(2h,s),4.09(1h,dd,j＝6.0和6.0hz),7.03-7.09(3h,m),7.35(1h,dd,j＝7.7和7.7hz)。hresims(m/z):[m+h]+c13h19n2o7p,理论值：349.1145；实测值：349.1891。实施例4称取2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸3.33克，溶解于30ml乙醇中，用冰浴冷却至5℃以下，边搅拌边滴加0.4克氢氧化钠溶于10ml乙醇的溶液，继续搅拌5分钟，减压下脱去溶剂，残留物干燥得其钠盐3.55克。1hnmr、13cnmr同实施例1。hresims(m/z):[m+h]+c13h18nnao7p,理论值：354.0719；实测值：354.0972。实施例5称取2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸3.33克，溶解于30ml乙醇中，用冰浴冷却至5℃以下，边搅拌边滴加0.56克氢氧化钾溶于10ml乙醇的溶液，继续搅拌5分钟，减压下脱去溶剂，残留物干燥得其钾盐3.69克。1hnmr同实施例2。hresims(m/z):[m+h]+c13h18nko7p,理论值：370.0458；实测值：370.0897。实施例6称取2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸3.33克，溶解于30ml乙醇中，用冰浴冷却至5℃以下，边搅拌边滴加0.68克25％氨水溶于10ml乙醇的溶液，继续搅拌5分钟，减压下脱去溶剂，残留物干燥得其铵盐3.50克。1hnmr同实施例3。hresims(m/z):[m+h]+c13h19n2o7p,理论值：349.1145；实测值：349.1277。效果实施例1以acivicin作为阳性对照，测试了钠盐(实施例1)、钾盐(实施例2)和铵盐(实施例3)对人和大肠杆菌ggt的抑制活性。抑制剂效力通过kon值进行评价，该值为抑制剂和酶之间的结合速度常数。测试结果如下表1所示：表1：对人和大肠杆菌ggt的抑制活性得到的钠盐、钾盐和铵盐对人类ggt均显示了良好的抑制活性，其活性为阳性对照药acivicin的117～134倍之间。效果实施例2表2：实施例1钠盐在精华液中的应用配方工艺简述：1、预先将wsk与1,3-丁二醇混合，然后依次将a相各组分加入水中。2、加热至80℃，快速搅拌至溶解均匀后，开始降温。3、加入b相，搅拌至均匀。4、当降温至40-45℃时，加入预先混合的c相。5、搅拌均匀后，出料。精华液的使用效果：以表2中的精华液为测试样品，对照品为将表2配方中实施例1钠盐替换成酸(即2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸)的精华液对照样品。分别涂抹在人的左右两个手臂上，测试人群为30名，年龄在20-60岁之间，且均为敏感性皮肤。表3精华液刺激性测试结果涂抹对照品涂抹测试品手臂出现红斑的数量20人0人对照品会使人产生明显的红斑，而实施例1钠盐的测试品无刺激性，无红斑现象。试验结果表明将酸转化为其钠盐后明显改善了其刺激性。效果实施例3表4：实施例2的钾盐在精华液中的应用配方工艺简述：1、预先将wsk与1,3-丁二醇混合，然后依次将a相各组分加入水中。2、加热至80℃，快速搅拌至溶解均匀后，开始降温。3、加入b相，搅拌至均匀。4、当降温至40-45℃时，加入预先混合的c相。5、搅拌均匀后，出料。精华液的使用效果：以表4中的精华液为测试样品，对照品为将表4配方中实施例2钾盐替换成酸(即2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸)的精华液对照样品。分别涂抹在人的左右两个手臂上，测试人群为30名，年龄在20-60岁之间，且均为敏感性皮肤。表5实施例2钾盐精华液刺激性测试结果涂抹对照品涂抹测试品手臂出现红斑的数量20人0人对照品会使人产生明显的红斑，而实施例2钾盐的测试品无刺激性，无红斑现象。试验结果表明将酸转化为其钾盐后明显改善了其刺激性。效果实施例4表6：实施例3铵盐在精华液中的应用配方工艺简述：1、预先将wsk与1,3-丁二醇混合，然后依次将a相各组分加入水中。2、加热至80℃，快速搅拌至溶解均匀后，开始降温。3、加入b相，搅拌至均匀。4、当降温至40-45℃时，加入预先混合的c相。5、搅拌均匀后，出料。精华液的使用效果：以表6中的精华液为测试样品，对照品为将表6配方中实施例3铵盐替换成酸(即2-氨基-{[3-(羧甲基)苯氧基](甲氧基)磷酰}丁酸)的精华液对照样品。分别涂抹在人的左右两个手臂上，测试人群为30名，年龄在20-60岁之间，且均为敏感性皮肤。表7实施例3铵盐精华液刺激性测试结果涂抹对照品涂抹测试品手臂出现红斑的数量20人0人对照品会使人产生明显的红斑，而实施例3铵盐的测试品无刺激性，无红斑现象。试验结果表明将酸转化为其铵盐后明显改善了其刺激性。效果实施例5效果实施例2、效果实施例3和效果实施例4中举例的精华液测试品在使用的过程中，发现除了可以降低产品刺激性之外，还意外的发现，在使用过程中有明显的祛疤，去皱的功效，同时有抗自由基，激活细胞活力的作用。对疤痕部位黑色素和红色素的改善。30位身体有疤痕的志愿者使用效果实施例2中的钠盐精华液测试品后，如图1所示，受试者疤痕黑色素含量在第14天、28天、56天分别减少了4.71％、8.27％、20.89％；如图2所示，疤痕红色素含量在第14天、28天、56天分别减少了2.08％、4.18％、6.8％。面部疤痕处的皮肤弹性在14天、28天、56天分别增加了1.62％、2.79％、4.62％。而效果实施例2中的酸的精华液对照样品，对疤痕红色素、黑色素均毫无改善作用，疤痕处皮肤弹性也无改变。在配方制剂方面，效果实施例2、效果实施例3和效果实施例4中举例的精华液测试品均无分层现象，可见盐使配方制剂更加稳定。当前第1页12