一种硅噻菌胺残留量的gc-ms/ms测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种娃嚷菌胺残留量的GC-MS/MS测定方法，更具体地说是采用气相色 谱串联质谱(GC-MS/MS)定性定量测定粮谷、猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物肌肉及制品等复 杂基质的动植物源性食品中残留的娃嚷菌胺含量的方法，属于农药残留量的测定技术领 域。
【背景技术】
[0002] 娃嚷菌胺(通用名：Silthiof am,试验代号:Mon65500，商品名称:Latitude，其他名 称：Silthio地am),是由孟山都公司开发的酷胺类杀菌剂。主要用作种子处理，防治谷物上 的全蚀病。化学名称:N-締丙基-4,5-二甲基-2-(立甲基娃基)嚷吩-3-甲酯胺，英文名称:N-al lyl-4,5-dimethy 1-2-( trimethylsiIyl )thiophene-3-carboxamide ,CAS登录号： 175217-20-6，化学结构式为：
外观为白色晶状粉末;烙点：86.1~88.3°C ;沸点>280°C ;蒸汽压8.1 X 10ImPa(20°C) 分配系数：Kowlo评=3.72 (20 °C ); Henry常数5.4 X 10-1 化 m3mol-l;溶解度：水39.9mg/L (20°C)，正己烧15.5g/L(20°C)，对二甲苯、1，2-二氯乙烧、甲醇、丙酬、乙酸乙醋均>250g/L (20°C);稳定性 iDl'SOeicKp册），448d(pH7)，314d(pH9)(25°C)。
[0003] 娃嚷菌胺是由孟山都公司1993-94年发现、并于1998年在英国布赖顿植保会议上 介绍的新颖杀菌剂，可能是ATP抑制剂，抑制能量(ATP)从线粒体向细胞溶质的传递。具有良 好的保护活性，残效期长。持效期长，用作种子处理剂。1994年，娃嚷菌胺在欧盟进入田间试 验阶段，1999年在爱尔兰首先获准登记，继而在欧盟其他国家、中国、南非等取得进一步的 登记。2004年1月1日，娃嚷菌胺列入欧盟农药登记指令(91/414)附录1，其登记资料因此获 得了运一天起算的10年期的保护权。娃嚷菌胺的主要适用作物有:大麦、黑小麦和小麦等。 其主要市场包括:比利时、智利、中国、捷克共和国、丹麦、法国、德国、爱尔兰、波兰、南非、瑞 典和英国等，具有很广阔的应用前景。
[0004] 随着娃嚷菌胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的欧盟等国家制定了 其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量(M化），M化允许值很严 格，M化范围为:0.01~0.05mg/kg，欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登 记，没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性 食品中残留限量均实行0.0 lmg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对娃嚷菌胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜和 水果中娃嚷菌胺残留检测方法，运些检测方法均采用液相色谱串联质谱化C-MS/MS)测定蔬 菜和水果中娃嚷菌胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS巧憶食品农产品中农药残留具有快 速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未配置该 仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动相或色 谱柱，运样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，运一定程度 上制约了 LC-MS/MS的应用。使用气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)分析食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高、选择性强等优点，可实现几百种农药的多残留分析，但迄今为止 未见食品农产品中娃嚷菌胺残留量的GC-MS/MS检测方法的报道，由于粮谷、动物源性食品 等食品农产品基质比较复杂，须建立净化效果良好的样品前处理方法和仪器分析条件才能 满足检测要求，因此，建立气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)定性和定量分析粮谷和动物源性 食品中娃嚷菌胺残留量的检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种娃嚷菌胺残留量的GC-MS/MS测定方法，主要用于测定粮 谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中娃嚷菌胺残留量。
[0007] 为实现W上目的，本发明所采用的技术方案是：一种娃嚷菌胺残留量的GC-MS/MS 测定方法，包括如下步骤：
[000引（1)提取 称取混匀样品于具塞离屯、管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腊或含1%乙酸的乙腊 溶液均质或振荡超声提取，然后加入氯化钢或乙酸钢中的一种和无水硫酸儀，剧烈满旋 Imin后离屯、。
[0009] (2)净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至ImL左右，经Cis/PSA固相萃取柱净化，乙腊洗脱，收 集洗脱液，取部分洗脱液浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂溶解定容，过 膜后，待气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含娃嚷菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净化 残渣，加入适量溶剂和标准溶液，满旋混匀，配制成至少3个浓度的娃嚷菌胺系列标准工作 液。
[0011] (4)气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，W标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化后的 样品液注入GC-MS/MS进行测定，测得样品液中娃嚷菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线， 得到样品液中娃嚷菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中娃嚷菌胺 残留量。若上机溶液中娃嚷菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上机溶液浓度 稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤(1)中样品若为含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。
[0013] 步骤(1)中采用乙腊提取时加入氯化钢盐析，采用含1%乙酸的乙腊溶液提取时加 入乙酸钢盐析。
[0014] 步骤(2)中进行Cis/PSA固相萃取净化，乙腊洗脱时，洗脱体积为6~8血。
[0015] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25皿;进样口溫度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后W每分钟2 °C的速度升至220°C，再W每分钟20°C的速度升至280°C，保持IOmin;传输线溫度:290°C。
[0016] 步骤(4)中质谱条件为：电离模式：电子轰击电离化I，70eV);离子源溫度280°C;碰 撞气:氣气;多反应监测扫描方式MRM，监测参数为：
[0017] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在运种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0018] 本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-MS/MS应用于粮谷、动物源性食品中娃嚷菌胺 定性确证和定量检测，平均回收率为87.4%~91.9%，平均相对标准偏差(RSD)为4.8%~ 6.9%，检出限低于0.06化g/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。能 满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及 对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0020] 图1为添加在空白猪肉基质中的娃嚷菌胺标液的GC-MS/MS选择离子色谱图。
[0021] 图2为不含娃嚷菌胺的猪肉空白样品的GC-MS/MS选择离子色谱图。
[0022] 图3为W不含娃嚷菌胺的猪肉空白样品为基质配制的娃嚷菌胺标准工作曲线。
【具体实施方式】
[0023] 现W W下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0024] 实施例中使用的仪器与试剂
[0025] TlSBasic均质器（IKA，Germany) ;CR21G虹离屯、机（日立Japan) ;MS3基本型旋满混 合器（IKA，Germany);TurboVapLV型样品自动浓缩仪（Caliper，USA);7890N气相色谱-5977C质谱仪(Agilent,USA) ;Cis/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)购于天津博纳艾杰尔 科技有限公司。
[0026] 试剂
[0027]乙腊、丙酬、正己烧（HPLC级，Merke，Germany);乙酸（HPLC级，CNW，Germany);无水 硫酸儀、氯化钢和乙酸钢为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[00巧]标准物质：纯度99.5%，购自德国化.E虹enstorfer公司。
[0029] 实施例1:小麦中娃嚷菌胺残留量的检测
[0030] (1)样品前处理
[0031] 提取 称取经充分混匀的5g小麦样品（研磨成面粉)于50mL离屯、管中，加入20mL水复苏30min 后，准确加入20mL含1 %乙酸的乙腊溶液，振荡提取20min，超声提取5min，加入3g无水硫酸 儀和2g乙酸钢，满旋Imin后，7000;r/min离屯、5min。离屯、后，取SmL乙腊提取液于40°C旋蒸或 氮气吹至近干，加入ImL乙腊满旋后，待净化。
[0032] 净化 用5mL乙腊预洗Cis/PSA固相萃取柱，当液面到达吸附剂的顶部时，将上述提取溶液转 入柱中，用2mL乙腊洗涂试管，并将洗涂液移入SPE柱中，待溶液达到吸附剂顶部时，加入4mL 乙腊至柱子上进行洗脱，洗脱液全部接收到定量试管中，用乙腊定容至lOmL，取ImL净化液 用氮气吹干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂定容至ImL,过0.22皿滤膜后，待GC-MS/MS测定。
[0033] (2)标准工作溶液的配制 准确称取25 ± 0.1 mg标准品于25mL容量瓶中，用乙腊溶解，定容得1000.0 j