本发明涉及分离提纯技术领域，特别涉及一种那西肽精品的提取方法。
背景技术：
那西肽(nosiheptide)含丰富的硫元素，属多肽类抗生素，主要由活跃链霉菌产生；那西肽对革兰氏阳性菌有良好的抑制作用，通过与23srna和核糖体蛋白l11组成的复合体紧密结合，从而抑制延长因子活性和gtp的水解，最终抑制了蛋白质的合成，使细菌的生长受到抑制。那西肽由于其在肠道中溶解度低，不容易被动物吸收，因而可以在肠道内保持较高的药物浓度，它具有用量低、抑菌范围广、动物体内不残留等特点，可明显促进鸡、猪、鱼等动物的生长，因此是一种理想的新型非吸收性动物饲料添加剂。
那西肽是通过生物发酵法得到的，具体利用豆油、豆饼粉、淀粉及硫酸铵、硫酸钠等粮食化工类原材料，通过生产菌的次级代谢作用合成而得，代谢完成后，由于那西肽不溶于水，其主要存在于生产菌的菌丝中，与菌丝体、残存培养基等混合在一起，无法直接得到纯的那西肽产品。
目前，行业内多数以发酵后的处理液作为那西肽产品直接使用，但此产品存在培养基残留、水及其他可能的杂质，使得那西肽纯度较低。且过多的杂质可能会产生毒性反应，使得用药的安全性大大降低。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明目的在于提供一种那西肽精品的制备方法。使用本发明的提取方法得到的那西肽精品的收率和纯度高，用药的安全性高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种那西肽精品的提取方法，包括以下步骤：
(1)将那西肽发酵液和助滤剂混合后过滤，得到那西肽滤饼；
(2)对所述那西肽滤饼依次进行水洗、造粒和烘干，得到那西肽干粒；
(3)使用二氯甲烷对所述那西肽干粒进行浸提，得到浸提液；
(4)对所述浸提液依次进行碳脱、浓缩和结晶，得到那西肽粗品；
(5)将所述那西肽粗品和乙醇混合后依次进行打浆、过滤和干燥，得到那西肽精品。
优选的，所述步骤(1)中那西肽发酵液的化学效价为2000～2500u/ml。
优选的，所述步骤(1)中的助滤剂为珍珠岩，所述助滤剂的用量为发酵液体积的3～5％。
优选的，所述步骤(2)中那西肽干粒的粒径≤1.2mm。
优选的，所述步骤(3)中二氯甲烷与那西肽干粒的体积比为5～10：1。
优选的，所述步骤(3)中浸提的时间为8～12h。
优选的，所述步骤(4)中碳脱用的碳脱剂为活性炭，所述碳脱剂的用量为所述浸提液体积的1～2％。
优选的，所述步骤(4)中浓缩的方法为：
将碳脱所得碳脱液在真空条件下浓缩至原体积的10～20％，得到那西肽浓缩液；
所述浓缩的温度为55～65℃，所述浓缩的真空度≥0.03mpa。
优选的，所述步骤(4)中结晶的方法为：
向那西肽浓缩液中加入水，进行结晶，得到那西肽结晶物；
所述结晶的温度为4℃，所述水与那西肽浓缩液的体积比为0.5～1:1。
优选的，所述步骤(5)中乙醇与那西肽粗品的体积比为5～6：1。
本发明提供了一种那西肽精品的提取方法，本发明先将那西肽发酵液和助滤剂混合后过滤，得到那西肽滤饼；然后进行水洗、造粒和烘干，并使用二氯甲烷对那西肽干粒进行浸提，将浸提液进行碳脱、浓缩和结晶得到那西肽粗品，再加入乙醇打浆，过滤干燥后得到那西肽精品。本发明提供的提取方法可以有效地将那西肽从发酵液中提取出来，并去除发酵液中剩余的培养基残留、水及其他杂质，提高产品的收率和纯度，减少产品使用过程中由于其他杂质存在可能产生的毒性反应，提高了用药的安全性。实施例结果表明，使用本发明提取方法得到的那西肽精品收率可达80.7％，含量可达897u/mg。
具体实施方式
本发明提供了一种那西肽精品的提取方法，包括以下步骤：
(1)将那西肽发酵液和助滤剂混合后过滤，得到那西肽滤饼；
(2)对所述那西肽滤饼依次进行水洗、造粒和烘干，得到那西肽干粒；
(3)使用二氯甲烷对所述那西肽干粒进行浸提，得到浸提液；
(4)对所述浸提液依次进行碳脱、浓缩和结晶，得到那西肽粗品；
(5)将所述那西肽粗品和乙醇混合后依次进行打浆、过滤和干燥，得到那西肽精品。
本发明将那西肽发酵液和助滤剂混合后过滤，得到那西肽滤饼。在本发明中，所述那西肽发酵液的化学效价优选为2000～2500u/ml，更优选为2200～2400u/ml；本发明对所述那西肽发酵液的来源没有特殊的要求，使用本领域常规市售或是自行制备的那西肽发酵液均可。在本发明中，所述助滤剂优选为珍珠岩，所述助滤剂的用量优选为发酵液体积的3～5％，更优选为4％。
本发明优选将那西肽发酵液和助滤剂混合后进行加热，然后再对那西肽发酵液和助滤剂的热混合液进行过滤。在本发明中，所述加热的温度优选为60～65℃，更优选为62～64℃；所述加热的时间优选≤3h，更优选为1～2h；本发明通过加热来降低那西肽发酵液的粘度，提高那西肽发酵液的过滤效果。在本发明中，所述过滤的方式优选为板框压滤，所述板框压滤的压力优选为0.4～0.5mpa，更优选为0.45mpa。本发明通过过滤除去那西肽发酵液中的水分。
得到那西肽滤饼后，本发明对所述那西肽滤饼依次进行水洗、造粒和烘干，得到那西肽干粒。在本发明中，所述水洗用水的体积优选为所述那西肽滤饼体积的5～10倍，更优选为6～8倍；所述水洗用水优选为去离子水。本发明对所述水洗的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的水洗方式即可，在本发明实施例中，优选将所述那西肽滤饼和水投入预处理罐中，在搅拌的条件下进行水洗，水洗完成后，使用板框压滤将水滤除即可；所述板框压滤的压力优选为0.4～0.5mpa，更优选为0.45mpa。本发明通过水洗，可以去除所述那西肽滤饼中的水溶性杂质。
水洗完成后，本发明对水洗后的滤饼依次进行造粒和烘干，得到那西肽干粒。本发明优选使用造粒机对所述那西肽滤饼进行造粒，所述造粒机的筛网直径优选为1.2mm。本发明优选使用沸腾流化床进行烘干，所述沸腾流化床的进风温度优选为100～120℃，更优选为105～115℃；所述沸腾流化床的出风温度优选为35～60℃，更优选为40～50℃。在本发明中，所述那西肽干粒的粒径优选≤1.2mm，更优选≤1.0mm。
得到那西肽干粒后，本发明使用二氯甲烷对所述那西肽干粒进行浸提，得到浸提液。在本发明中，所述二氯甲烷与那西肽干粒的体积比优选为5～10：1，更优选为5：1；所述浸提的时间优选为8～12h，更优选为10～11h。本发明通过浸提使那西肽转移至浸提液中。
得到浸提液后，本发明对所述浸提液依次进行碳脱、浓缩和结晶，得到那西肽粗品。在本发明中，所述碳脱用的碳脱剂优选为活性炭，所述碳脱剂的用量优选为所述浸提液体积的1～2％，更优选为1.4～1.8％。本发明通过碳脱剂的碳脱作用除去浸提液中的色素、残留发酵物油等杂质。
在本发明中，所述浓缩的方法优选为：将碳脱所得碳脱液在真空条件下浓缩至原体积的10～20％，得到那西肽浓缩液。
本发明更优选将碳脱液浓缩至原体积的15～18％；在本发明中，所述浓缩的温度优选为55～65℃，更优选为60～62℃；所述浓缩的真空度优选≥0.03mpa，更优选≥0.05mpa。
在本发明中，所述结晶的方法优选为：向那西肽浓缩液中加入水，进行结晶，得到那西肽结晶物。
在本发明中，所述结晶的温度优选为0～10℃，更优选为4℃，所述水与那西肽浓缩液的体积比优选为0.5～1:1，更优选为0.5:1；本发明优选在搅拌的条件下进行结晶。
结晶完成后，本发明优选对所得结晶产物依次进行离心和烘干，得到那西肽粗品；本发明对所述离心的方式没有特殊要求，使用本领域技术人员熟知的离心方式即可；本发明优选在真空条件下进行烘干，所述烘干的温度优选为60℃，时间优选为2～2.5h，更优选为2.2～2.4h。
得到那西肽粗品后，本发明将所述那西肽粗品和乙醇混合后依次进行打浆、过滤和干燥，得到那西肽精品。在本发明中，所述乙醇与那西肽粗品的体积比优选为5～6：1，更优选为5.5：1；本发明优选使用搅拌的方式进行打浆，所述搅拌的时间优选为6～8h，更优选为6.5～7.5h。本发明通过打浆，可以使粗品和乙醇充分混合，进而去除多余杂质。
在本发明中，所述过滤的方式优选为板框压滤，所述板框压滤的压力优选为0.4～0.5mpa，更优选为0.45mpa。本发明优选在真空条件下进行干燥，所述干燥的温度优选为60℃，时间优选为2～2.5h，更优选为2.2～2.4h。
在下面结合实施例对本发明提供的那西肽精品的提取方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种那西肽精品的提取方法，步骤如下：
(1)过滤：收集2000u/ml那西肽发酵液10吨，加入发酵液体积3％的珍珠岩300kg，升温至60℃，用板框压滤，将发酵液中的水分除去，得到含有那西肽的滤饼500kg；
(2)水洗：将步骤(1)得到的那西肽滤饼投入预处理罐中，加入滤饼体积5倍的水，搅拌均匀，再次板框压滤，得到那西肽纯化滤饼；
(3)造粒：使用步骤(2)得到纯化那西肽滤饼，用造粒机造粒，筛网直径1.2mm，得到那西肽颗粒；
(4)烘干：将步骤(3)得到的那西肽颗粒使用沸腾流化床烘干，控制进风温度100℃，出风温度40℃，得到那西肽干粒；
(5)浸提：先向浸提罐中那西肽干粒体积5倍的二氯甲烷2.5吨，再加入那西肽干粒，浸提12h，过滤，取浸提液；
(6)碳脱：在浸提液中加入等体积的活性炭25kg，搅拌1h，过滤得碳脱液；
(7)浓缩：将过滤得到的碳脱液，在60℃，真空度0.06mpa的条件下浓缩至原体积的10％，停止浓缩；
(8)结晶：在4℃搅拌条件下，按纯化水/浓缩液体积比为0.5：1的比例向浓缩液中加入纯化水125升，得到那西肽的结晶，离心将那西肽结晶从液体中分离出来，得到那西肽粗品21.25kg；
(9)烘干：在60℃真空条件下干燥2h，得到那西肽粗品17.6kg；
(10)打浆：加入那西肽粗品体积5倍的乙醇88升，搅拌6h；
(11)过滤：对打浆后的那西肽粗品进行板框压滤；
(12)干燥：在60℃真空条件下干燥2h，得到那西肽精品17kg。
经检测，所得那西肽精品的收率76.0％，含量为895u/mg。
实施例2
一种那西肽精品的提取方法，步骤如下：
(1)过滤：收集2500u/ml那西肽发酵液5吨，加入发酵液体积3％的珍珠岩150kg，升温至65℃，用板框过滤，将发酵液中的水分除去，得到含有那西肽的滤饼250kg；
(2)水洗：将步骤(1)得到的那西肽滤饼投入预处理罐中，加入滤饼体积8倍的水，搅拌均匀，再次板框过滤，得到那西肽纯化滤饼；
(3)造粒：使用步骤(2)得到那西肽纯化滤饼，用造粒机造粒，筛网直径1.2mm，得到那西肽颗粒；
(4)烘干：将步骤(3)得到的那西肽颗粒使用沸腾流化床烘干，控制进风温度110℃，出风温度55℃，得到那西肽干粒；
(5)浸提：先向浸提罐中那西肽干粒体积10倍的二氯甲烷1.25吨，再加入那西肽干粒，浸提10h，过滤，取浸提液；
(6)碳脱：加入浸提液1.5倍体积的活性炭12.5kg，搅拌1h，过滤得碳脱液；
(7)浓缩：将过滤得到的碳脱液在55℃，真空度0.05mpa条件下浓缩至原体积的15％，停止浓缩；
(8)结晶：在4℃搅拌状态下，按纯化水/浓缩液体积比0.8：1的比例向浓缩液中加入纯化水65l，得到那西肽的结晶，离心将那西肽结晶从液体中分离出来，得到那西肽粗品10kg；
(9)烘干：在60℃真空条件下干燥2h得到那西肽干燥粗品8.2kg；
(10)打浆：加入那西肽粗品体积5.5倍的乙醇60l，搅拌8h；
(11)过滤：对打浆后的那西肽粗品进行板框压滤；
(12)烘干：在60℃真空条件下干燥2h，得到那西肽精品8kg。
经检测，所得那西肽精品的收率为78.6％，含量为892u/mg。
实施例3
一种那西肽精品的提取方法，步骤如下：
(1)过滤：收集2100u/ml那西肽发酵液20吨，加入发酵液体积5％的珍珠岩，升温至65℃，用板框过滤，将发酵液中的水分除去，得到含有那西肽的滤饼1.0吨；
(2)水洗：将步骤(1)得到的那西肽滤饼投入预处理罐中，加入滤饼体积10倍的水，搅拌均匀，再次板框过滤，得到那西肽纯化滤饼；
(3)造粒：使用步骤(2)得到那西肽纯化滤饼，用造粒机造粒，筛网直径1.2mm，得到那西肽颗粒；
(4)烘干：将步骤(3)得到的那西肽颗粒使用沸腾流化床烘干，控制进风温度120℃，出风温度60℃，得到那西肽干粒；
(5)浸提：先向浸提罐中那西肽干粒体积8倍的二氯甲烷5吨，再加入那西肽干粒，浸提12h，过滤，取浸提液；
(6)碳脱：加入浸提液2倍体积的活性炭50kg，搅拌1h，过滤得碳脱液；
(7)浓缩：将过滤得到的碳脱液在65℃，真空度0.03mpa条件下浓缩至原体积的20％，停止浓缩；
(8)结晶：在4℃搅拌状态下，按纯化水/浓缩液体积比1：1的比例向浓缩液中加入纯化水250l，得到那西肽的结晶，离心将那西肽结晶从液体中分离出来，得到那西肽粗品45.5kg；
(9)烘干：在60℃真空条件下干燥2h，得到那西肽干燥粗品37.2kg；
(10)打浆：加入那西肽粗品体积6倍的乙醇186l，搅拌7h；
(11)过滤：对打浆后的那西肽粗品进行板框压滤；
(12)烘干：在60℃真空条件下干燥2h，得到那西肽精品36kg。
经检测，所得那西肽精品的收率为80.7％，含量为897u/mg。
根据以上实施例可知，使用本发明提供的提取方法可以有效地将那西肽从发酵液中提取出来，且所得那西肽精品的收率和纯度均较高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。