本发明涉及核苷化合物合成领域。更具体地涉及一种新型核苷修饰物2’-eoe-异鸟嘌呤核苷及其制备方法和用途。
背景技术：
：近年，随着基因组创药的发展，反义寡核苷酸药物被急速开发，究其原因在于其较传统药物来讲具有以下几点优势：1)特异性较强。一个15聚体的反义寡核苷酸含有30-45氢键，而低分子的传统药物(200-600u)与靶点一般只形成1-4个键；2)信息量较大。遗传信息从dna-rna-蛋白质，用互补寡核苷酸阻断某种蛋白的合成是很准确的；3)反义药物以核酸为靶点，与蛋白质作为靶点比较，更易合理设计新药物。由于作用于遗传信息传递的上游，所需药量较低，副作用可能较少。2’-eoe-异鸟嘌呤核苷是合成新型反义寡核苷酸的最基础原料。2’-eoe-异鸟嘌呤核苷除可作为药物开发工具外，还可用于科学研究，特别是功能基因组学研究。另一方面，在医药品的用途中，为了极力抑制由含有的杂质生成的副生成物，有必要使用非常高纯度的寡核苷。本发明提出了一种制备高纯度的2’-eoe-异鸟嘌呤核苷的方法。因此，本领域迫切需要提供一种有效且无需特别设备，适合大规模工业化生产，可得到高纯度2’-eoe-异鸟嘌呤核苷的制备方法。技术实现要素：本发明旨在提供一种新的核苷修饰物2’-eoe-异鸟嘌呤核苷及其制备方法和用途。在本发明的第一方面，提供一种如式a所示的化合物在本发明的第二方面，提供一种如式a所示化合物的制备方法，所述方法包括步骤：将结构如式b所示的化合物与亚硝酸钠在甲酸为溶剂的反应体系中混合、反应得到结构如式a所示的化合物；在另一优选例中，所述亚硝酸钠为1n的亚硝酸钠水溶液。在另一优选例中，所述亚硝酸钠与结构如式b所示的化合物的体积重量比(l/kg)为2-10﹕1；更优选4-8﹕1。在另一优选例中，所述反应温度为0-15℃；更优选5-10℃。在另一优选例中，所述结构如式b所示的化合物通过下述步骤制备得到：使结构如式c所示的化合物与金属氢化物混合后与2-卤代乙基乙基醚反应，得到结构如式b所示的化合物；在另一优选例中，所述结构如式c所示的化合物与金属氢化物在溶剂中混合；所述溶剂选自二甲基甲酰胺(dmf)、二甲亚砜(dmso)、二甲醚(dme)、或其组合；更优选二甲基甲酰胺(dmf)。在另一优选例中，所述溶剂与结构如式c所示的化合物的体积重量比(l/kg)为5-15﹕1；更优选8-10﹕1。在另一优选例中，所述金属氢化物为氢化钠。在另一优选例中，所述金属氢化物与结构如式c所示的化合物的摩尔用量比为2-3﹕1；更优选2.4-2.8﹕1。在另一优选例中，所述2-卤代乙基乙基醚选自2-氯代乙基乙基醚、2-溴代乙基乙基醚或2-碘代乙基乙基醚。在另一优选例中，所述2-卤代乙基乙基醚与结构如式c所示的化合物的摩尔用量比为0.5-3﹕1；更优选1.0-1.5﹕1。在另一优选例中，所述反应温度为零下2-2℃。在另一优选例中，所述方法还包括步骤：使用溶剂使结构如式b所示的化合物结晶；所述溶剂选自甲醇或乙醇。本发明还提供一种如式a所示化合物的制备方法，所述方法包括步骤：(1)使结构如式c所示的化合物与金属氢化物混合后与2-卤代乙基乙基醚反应，得到结构如式b所示的化合物；(2)将结构如式b所示的化合物与亚硝酸钠在甲酸为溶剂的反应体系中混合、反应得到结构如式a所示的化合物；在另一优选例中，所述方法还包括步骤：使用水使结构如式a所示的化合物结晶。在本发明的第三方面，提供了一种如式a所示化合物用作制备反义寡核苷酸的原料；或在制备反义寡核苷酸中的应用。据此，本发明简便、经济地大量合成2’-eoe-异鸟嘌呤核苷，获得非常高纯度的目标化合物。本发明的方法无需特别设备，适合于大规模工业化生产。具体实施方式发明人经过广泛的研究和试验，发现以2,6-二-氨基-嘌呤核苷(化合物c)为起始原料，通过生成醇钠型活性中间体，与2-溴代乙基乙基醚反应获得目标基团修饰的2’-eoe-2,6-二-氨基-嘌呤核苷中间体(化合物b)，然后将化合物b特定位点的氨基转化为羰基，高选择性地生成特定目标基团修饰的目标产物2’-eoe-异鸟嘌呤核苷(化合物a)。在此基础上，完成了本发明。本发明涉及的化合物列表如下：如本发明所用，“结构如式a所示的化合物”、“式a化合物”或“化合物a”可以互换使用，都是指上表中以a为编号的化合物。如本发明所用，“结构如式b所示的化合物”、“式b化合物”或“化合物b”可以互换使用，都是指上表中以b为编号的化合物。如本发明所用，“结构如式c所示的化合物”、“式c化合物”或“化合物c”可以互换使用，都是指上表中以c为编号的化合物。本发明提供一种结构如式a所示的化合物；该化合物可通过将化合物b特定位点的氨基转化为羰基的方法制备得到。具体地，可以将化合物b与甲酸混合后，加入1n亚硝酸钠水溶液进行反应，再经结晶纯化，从而高收率，高选择性地生成特定目标基团修饰的目标产物2’-eoe-异鸟嘌呤核苷(化合物a)。在本发明的一种实施方式中，甲酸与化合物b重量比为10-20∶1；较佳地为10-15∶1；更佳地为10∶1。在本发明的一种实施方式中，1nnano2水溶液与化合物b体积重量比(l/kg)为2-10∶1；较佳地为4-8∶1；更佳地为5∶1。在本发明的一种实施方式中，上述通过化合物b获得化合物a的反应温度为0-15℃；较佳地为5-10℃；更佳地为5℃。在本发明的一种实施方式中，上述结晶纯化是将反应结束后的反应液浓缩后与去离子水混合，在冰浴中结晶得到化合物a；其中化合物a与去离子水的重量体积比(kg/l)为1∶20-40；较佳地为1∶25-35；更佳地为1∶30。本发明用于获得化合物a的化合物b可以通过将化合物c溶解于有机溶剂中，在零下2-2℃与金属氢化物混合得到醇钠型活性中间体后，使该中间体与2-卤代乙基乙基醚反应得到化合物b。在本发明的一种实施方式中，所述有机溶剂是可溶解化合物c，同时又不与金属氢化物起反应的试剂；在本发明的一些实施例中，选自dmf，dmso或dme。在本发明的一种实施方式中，所述有机溶剂的用量为化合物c的5-15重量体积比(kg/l)；较佳地为5-10；更佳地为8-10。在本发明的一种实施方式中，所述金属氢化物为氢化钠；化合物c和氢化钠的摩尔比为1∶2.0-3.0；较佳地为1∶2.4-2.8；更佳地为1∶2.5。在本发明的一种实施方式中，所述2-卤代乙基乙基醚选自2-氯代乙基乙基醚、2-溴代乙基乙基醚或2-碘代乙基乙基醚；所述2-卤代乙基乙基醚用量为化合物c的0.5-3摩尔当量；较佳地为1-2；更佳地为1-1.5。在本发明的一种实施方式中，上述通过化合物c制得化合物b的反应在惰性气体(更佳地为氩气或氮气)氛围下进行。在本发明的一种实施方式中，使用溶剂进行结晶纯化工艺处理，从而获得高纯度的式b所示的中间体化合物；其中，所述结晶溶剂选自甲醇或乙醇。在本发明的一种较佳实施方式中，化合物a通过下述步骤制备得到：第一步，将化合物c溶于dmf中，降温至-2～2℃；然后加入氢化钠，搅拌反应，制得醇钠活性中间体；第二步，向上述体系中加入2-溴乙基乙基醚，进行反应，制得化合物b粗品；第三步，将制得化合物b粗品用乙醇结晶，得到高纯度的式b中间体；第四步，将化合物b溶于甲酸中，加入1nnano2水溶液，进行反应，制得2’-eoe-异鸟嘌呤核苷粗品(即式a化合物粗品)；第五步，将式a粗品通过重结晶纯化工艺，结晶试剂为去离子水，得到高纯度的目标化合物a。本发明提供的化合物a可用于合成反义寡核苷酸，例如但不限于通过下述工艺实现：本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。本发明的主要优点在于：1、本发明采用特定的化合物c为起始原料，与金属氢化物优势合成2’-eoe-2,6-二-氨基嘌呤核苷即化合物b，极大低降低了异构体的生成，较大地提高了转化率以及降低了中间体化合物b的纯化难度，便于规模化生产；然后通过条件筛选优势合成2’-eoe-异鸟嘌呤核苷即化合物a，极大低降低了异构体的生成，较大地提高了转化率以及降低了终产物化合物a的纯化难度，便于规模化生产。2、本发明制备过程中无需特殊或非常危险性试剂，对设备，人员素质等无高等级要求。3、本发明过程简单，便捷，无需特殊设备，成本低廉。4、本发明提供的纯化方法效果显著，目标化合物a的含量可以达到99％以上。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。本发明下述实施例中的hplc(高效液相色谱)条件：柱：ymc-aqc185μm4.6*250mm流速：0.8ml/min波长：260nm流动相：a液：teaa缓冲液(0.1摩尔/升的乙酸水溶液用三乙胺调至ph＝7.0)。b液：色谱级甲醇。分析过程中a液，b液在线脱气，氦气流速50ml/min。梯度：时间(min)a％b％010004100088020168020201000301000实施例12’-eoe-2,6-二氨基嘌呤核苷的制备称取2,6-二氨基嘌呤核苷(cas号：2096-10-8，化合物c)135.58kg溶解于1350ldmf中，反应液降温至0±2℃，氩气保护下加入nah29.10kg,加入过程温度0℃-5℃，加毕0℃搅拌1h。自然恢复至室温后，向体系中滴加2-溴乙基乙基醚73.64kg，滴毕室温搅拌反应。反应至产物不再增加。0±2℃下向体系缓慢加入水淬灭反应。向体系中缓慢加入2mhcl溶液，调节ph至中性。65℃真空浓缩至不滴，残余固体在乙醇中结晶得到72.91kg淡黄色固体。纯度98.3％，收率42.8％。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.95(s,1h),6.80(brs,2h),5.83(d,j＝6.5hz,1h),5.75(brs,2h),5.46(brs,1h),5.01(d,j＝4.5hz,1h),4.49-4.47(m,1h),4.30-4.25(m,1h),3.96-3.91(m,1h),3.68-3.60(m,2h),3.59-3.51(m,2h),3.44-3.40(m,2h),3.37-3.29(m,2h),1.01(t,j＝7.0hz,3h).实施例22’-eoe-异鸟嘌呤核苷的制备称取2’-氧-乙氧乙基-2-氨基腺苷(化合物b)52.91kg，加入530kg甲酸，于25℃-40℃下搅拌溶解完全，然后降温至5度左右。向反应液中滴加入1nnano2水溶液265l。滴完后，于5度左右搅拌反应2小时。反应结束后，反应液于油泵水浴45±2℃浓缩至有大量白色晶体析出，再将体系冰浴0℃保持1小时，过滤，滤饼用冰水洗涤，滤饼用水重结晶一次，离心干燥后得产品39.54kg。纯度99.5％，收率：83.0％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.97(s,1h),5.78(d,j＝6.6hz,1h),5.06(t,j＝5.4hz,1h),5.04(d,j＝4.8hz,1h),4.38-4.36(m,1h),4.26-4.23(m,1h),3.91-3.89(m,1h),3.68-3.64(m,1h),3.61-3.50(m,3h),3.44-3.42(m,2h),3.36-3.33(m,2h),1.02(t,j＝7.2hz,3h).实施例3“2’-eoe-异鸟嘌呤核苷”合成下游产品的工艺利用“2’-eoe-异鸟嘌呤核苷”合成下游产品的主要工艺流程如下。根据以上工艺流程，获得有用的下游产物，应用于反义寡核苷酸药物领域。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。当前第1页12