复合有机化合物的卤化的制作方法

文档序号:25541936发布日期:2021-06-18 20:38

技术特征:

1.一种黄素依赖性卤化酶(fdh)变体,其与seqidno:2或seqidno:4中所示的氨基酸序列相比包括一个或两个氨基酸取代,其中所述fdh变体能够催化复合有机化合物的卤化。

2.根据权利要求1所述的fdh变体,其中所述复合有机化合物是芳香族杂环有机化合物。

3.根据权利要求2所述的fdh变体,其中所述芳香族杂环有机化合物包括双环[2.2.2]二氮杂辛烷环。

4.根据权利要求2所述的fdh变体,其中所述芳香族杂环有机化合物包括吲哚。

5.根据权利要求4所述的fdh变体,其中所述化合物是吲哚生物碱。

6.根据权利要求5所述的fdh变体,其中所述吲哚生物碱是异戊烯基化吲哚生物碱。

7.根据权利要求1所述的fdh变体,其中所述fdh变体源自真菌fdh。

8.根据权利要求1所述的fdh变体,其中所述fdh变体源自细菌fdh。

9.根据权利要求1所述的fdh变体,其中所述fdh变体不源自真菌fdh或细菌fdh。

10.根据权利要求1所述的fdh变体,其中所述fdh变体是mala卤化酶变体。

11.根据权利要求10所述的fdh变体,其中所述fdh变体包括seqidno:2中所示的序列的氨基酸取代变体,其中取代为s129z、h253z、s129z/h253z、d109z、f489z、s409z、w265z、w263z、s82z、s129z/g131z、g131z、s129z/i493z、i493z、s129z/p85z或p85z,其中z是在指示位置处不存在氨基酸或存在除了野生型氨基酸之外的任何常规氨基酸。

12.根据权利要求10所述的fdh变体,其中所述fdh变体包括seqidno:2中所示的序列的氨基酸取代变体,其中取代为s129a、h253f、s129a/h253f、h253a、d109a、f489h、s409a、w265a、w263a、s82a、s129a/g131s、g131s、s129a/i493s、i493s、s129a/p85s或p85s。

13.根据权利要求10所述的fdh变体,其中所述mala卤化酶包括seqidno:6、8、12或16中所示的序列。

14.根据权利要求1所述的fdh变体,其中所述fdh变体是mala'卤化酶变体。

15.根据权利要求13所述的fdh变体,其中所述fdh变体包括seqidno:4中所示的序列的氨基酸取代变体,其中取代是e494z或h253z,其中z是在指示位置处不存在氨基酸或存在除了野生型氨基酸之外的任何常规氨基酸。

16.根据权利要求13所述的fdh变体,其中所述fdh变体包括seqidno:4中所示的序列的氨基酸取代变体,其中取代为e494d、h253f、s129a、s129a/i493s、i493s、s129a/p85s、p85s、s129a/g131s或g131s。

17.根据权利要求14所述的fdh变体,其中所述mala'卤化酶包括seqidno:10、14或18中所示的序列。

18.一种多核苷酸,其对根据权利要求1所述的fdh变体进行编码。

19.根据权利要求18所述的多核苷酸,其中经过编码的fdh变体是mala卤化酶变体或mala'卤化酶变体。

20.根据权利要求19所述的多核苷酸,其中所述经过编码的fdh变体包括seqidno:6、8、10、12、14、16或18中所示的序列。

21.一种载体,其包括根据权利要求18所述的多核苷酸。

22.一种宿主细胞,其包括根据权利要求18所述的多核苷酸或根据权利要求21所述的载体。

23.一种畸枝霉酰胺(malbrancheamide)d化合物,其包括式i:

24.一种异畸枝霉酰胺(isomalbrancheamide)d化合物,其包括式ii:

25.一种畸枝霉酰胺e化合物,其包括式iii:

26.一种使复合有机化合物卤化的方法,所述方法包括在适于对复合有机化合物进行酶催化卤化的条件下使所述复合有机化合物与根据权利要求1所述的fdh卤化酶变体以及卤素接触。

27.根据权利要求26所述的方法,其中所述复合有机化合物是芳香族杂环有机化合物。

28.根据权利要求27所述的方法,其中所述芳香族杂环有机化合物包括双环[2.2.2]二氮杂辛烷环。

29.根据权利要求27所述的方法,其中所述芳香族杂环有机化合物包括吲哚。

30.根据权利要求29所述的方法,其中所述化合物是吲哚生物碱。

31.根据权利要求30所述的方法,其中所述吲哚生物碱是异戊烯基化吲哚生物碱。

32.根据权利要求31所述的方法,其中所述异戊烯基化吲哚生物碱源自畸枝霉(malbranchea)属。

33.根据权利要求32所述的方法,其中所述畸枝霉属是金色畸枝霉(malbrancheaaurantiaca)或禾本畸枝霉(malbrancheagraminicola)。

34.根据权利要求31所述的方法,其中所述异戊烯基化吲哚生物碱是前畸枝霉酰胺(premalbrancheamide)、畸枝霉酰胺b、异畸枝霉酰胺b、畸枝霉酰胺c或异畸枝霉酰胺c。

35.根据权利要求26所述的方法,其中所述卤化步骤是氯化步骤。

36.根据权利要求26所述的方法,其中所述卤化步骤是溴化步骤。

37.一种调节哺乳动物的细胞中的ca2+信号传导途径的方法,所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的卤化复合有机化合物。

38.根据权利要求37所述的方法,其中所述ca2+信号传导途径是ca2+钙调蛋白依赖性途径。

39.根据权利要求37所述的方法,其中调节所述ca2+信号传导途径抑制平滑肌收缩。

40.根据权利要求37所述的方法,其中所述卤化复合有机化合物是畸枝霉酰胺、畸枝霉酰胺b、异畸枝霉酰胺b、畸枝霉酰胺c、异畸枝霉酰胺c、畸枝霉酰胺d、异畸枝霉酰胺d或畸枝霉酰胺。

41.一种在体外调节细胞中或在体外调节一种或多种分离酶中的ca2+信号传导途径的方法,所述方法包括在体外向所述细胞或在体外向所述一种或多种分离酶施用有效量的卤化复合有机化合物。

42.根据权利要求41所述的方法,其中所述ca2+信号传导途径是ca2+钙调蛋白依赖性途径。

43.根据权利要求41所述的方法,其中在体外调节的所述ca2+信号传导途径参与体内平滑肌收缩。

44.根据权利要求41所述的方法,其中所述卤化复合有机化合物是畸枝霉酰胺、畸枝霉酰胺b、异畸枝霉酰胺b、畸枝霉酰胺c、异畸枝霉酰胺c、畸枝霉酰胺d、异畸枝霉酰胺d或畸枝霉酰胺e。


技术总结
本公开提供了以特定且可预测的方式使复合化合物卤化的生物催化剂。还公开了卤化复合有机化合物。本公开进一步提供了用于使复合化合物卤化的方法和抑制哺乳动物中的平滑肌收缩的方法。

技术研发人员:D·H·舍尔曼;A·E·弗拉利;A·特里帕蒂
受保护的技术使用者:密歇根大学董事会
技术研发日:2019.07.18
技术公布日:2021.06.18
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