编码AAV生产蛋白的工程化核酸构建体的制作方法

文档序号:26003602发布日期:2021-07-23 21:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种aav表达构建体,其包含:第一vp编码区,其包含编码选自vp1、vp2和vp3的一个或多个aav衣壳蛋白的核苷酸序列;和第二vp编码区,其包含编码选自vp1、vp2和vp3的一个或多个aav衣壳蛋白的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区包含编码vp1、vp2和vp3aav衣壳蛋白的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区包含编码vp2和vp3aav衣壳蛋白的核苷酸序列。

4.根据权利要求1所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区包含编码仅vp2和vp3aav衣壳蛋白的核苷酸序列。

5.根据权利要求1所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区包含编码vp2和vp3aav衣壳蛋白但不编码vp1的核苷酸序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第二vp编码区包含编码vp1的核苷酸序列。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第二vp编码区包含编码仅vp1的核苷酸序列。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第二vp编码区包含编码vp1但不编码vp2或vp3的核苷酸序列。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区和所述第二vp编码区编码aav血清型的aav衣壳蛋白。

10.根据权利要求9所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区的aav血清型与所述第二vp编码区的aav血清型相同。

11.根据权利要求9所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区的aav血清型与所述第二vp编码区的aav血清型不同。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区和所述第二vp编码区的aav血清型独立地选自:aavphp.b(php.b)、aavphp.a(php.a)、aavg2b-26、aavg2b-13、aavth1.1-32、aavth1.1-35、aavphp.b2(php.b2)、aavphp.b3(php.b3)、aavphp.n/php.b-dgt、aavphp.b-est、aavphp.b-ggt、aavphp.b-atp、aavphp.b-att-t、aavphp.b-dgt-t、aavphp.b-ggt-t、aavphp.b-sgs、aavphp.b-aqp、aavphp.b-qqp、aavphp.b-snp(3)、aavphp.b-snp、aavphp.b-qgt、aavphp.b-nqt、aavphp.b-egs、aavphp.b-sgn、aavphp.b-egt、aavphp.b-dst、aavphp.b-dst、aavphp.b-stp、aavphp.b-pqp、aavphp.b-sqp、aavphp.b-qlp、aavphp.b-tmp、aavphp.b-ttp、aavphp.s/g2a12、aavg2a15/g2a3(g2a3)、aavg2b4(g2b4)、aavg2b5(g2b5)、php.s、aav1、aav2、aav2g9、aav3、aav3a、aav3b、aav3-3、aav4、aav4-4、aav5、aav6、aav6.1、aav6.2、aav6.1.2、aav7、aav7.2、aav8、aav9、aav9.11、aav9.13、aav9.16、aav9.24、aav9.45、aav9.47、aav9.61、aav9.68、aav9.84、aav9.9、aav10、aav11、aav12、aav16.3、aav24.1、aav27.3、aav42.12、aav42-1b、aav42-2、aav42-3a、aav42-3b、aav42-4、aav42-5a、aav42-5b、aav42-6b、aav42-8、aav42-10、aav42-11、aav42-12、aav42-13、aav42-15、aav42-aa、aav43-1、aav43-12、aav43-20、aav43-21、aav43-23、aav43-25、aav43-5、aav44.1、aav44.2、aav44.5、aav223.1、aav223.2、aav223.4、aav223.5、aav223.6、aav223.7、aav1-7/rh.48、aav1-8/rh.49、aav2-15/rh.62、aav2-3/rh.61、aav2-4/rh.50、aav2-5/rh.51、aav3.1/hu.6、aav3.1/hu.9、aav3-9/rh.52、aav3-11/rh.53、aav4-8/r11.64、aav4-9/rh.54、aav4-19/rh.55、aav5-3/rh.57、aav5-22/rh.58、aav7.3/hu.7、aav16.8/hu.10、aav16.12/hu.11、aav29.3/bb.1、aav29.5/bb.2、aav106.1/hu.37、aav114.3/hu.40、aav127.2/hu.41、aav127.5/hu.42、aav128.3/hu.44、aav130.4/hu.48、aav145.1/hu.53、aav145.5/hu.54、aav145.6/hu.55、aav161.10/hu.60、aav161.6/hu.61、aav33.12/hu.17、aav33.4/hu.15、aav33.8/hu.16、aav52/hu.19、aav52.1/hu.20、aav58.2/hu.25、aava3.3、aava3.4、aava3.5、aava3.7、aavc1、aavc2、aavc5、aav-dj、aav-dj8、aavf3、aavf5、aavh2、aavrh.72、aavhu.8、aavrh.68、aavrh.70、aavpi.1、aavpi.3、aavpi.2、aavrh.60、aavrh.44、aavrh.65、aavrh.55、aavrh.47、aavrh.69、aavrh.45、aavrh.59、aavhu.12、aavh6、aavlk03、aavh-1/hu.1、aavh-5/hu.3、aavlg-10/rh.40、aavlg-4/rh.38、aavlg-9/hu.39、aavn721-8/rh.43、aavch.5、aavch.5r1、aavcy.2、aavcy.3、aavcy.4、aavcy.5、aavcy.5r1、aavcy.5r2、aavcy.5r3、aavcy.5r4、aavcy.6、aavhu.1、aavhu.2、aavhu.3、aavhu.4、aavhu.5、aavhu.6、aavhu.7、aavhu.9、aavhu.10、aavhu.11、aavhu.13、aavhu.15、aavhu.16、aavhu.17、aavhu.18、aavhu.20、aavhu.21、aavhu.22、aavhu.23.2、aavhu.24、aavhu.25、aavhu.27、aavhu.28、aavhu.29、aavhu.29r、aavhu.31、aavhu.32、aavhu.34、aavhu.35、aavhu.37、aavhu.39、aavhu.40、aavhu.41、aavhu.42、aavhu.43、aavhu.44、aavhu.44r1、aavhu.44r2、aavhu.44r3、aavhu.45、aavhu.46、aavhu.47、aavhu.48、aavhu.48r1、aavhu.48r2、aavhu.48r3、aavhu.49、aavhu.51、aavhu.52、aavhu.54、aavhu.55、aavhu.56、aavhu.57、aavhu.58、aavhu.60、aavhu.61、aavhu.63、aavhu.64、aavhu.66、aavhu.67、aavhu.14/9、aavhu.t19、aavrh.2、aavrh.2r、aavrh.8、aavrh.8r、aavrh.10、aavrh.12、aavrh.13、aavrh.13r、aavrh.14、aavrh.17、aavrh.18、aavrh.19、aavrh.20、aavrh.21、aavrh.22、aavrh.23、aavrh.24、aavrh.25、aavrh.31、aavrh.32、aavrh.33、aavrh.34、aavrh.35、aavrh.36、aavrh.37、aavrh.37r2、aavrh.38、aavrh.39、aavrh.40、aavrh.46、aavrh.48、aavrh.48.1、aavrh.48.1.2、aavrh.48.2、aavrh.49、aavrh.51、aavrh.52、aavrh.53、aavrh.54、aavrh.56、aavrh.57、aavrh.58、aavrh.61、aavrh.64、aavrh.64r1、aavrh.64r2、aavrh.67、aavrh.73、aavrh.74、aavrh8r、aavrh8ra586r突变体、aavrh8rr533a突变体、aaav、baav、山羊aav、牛aav、aavhe1.1、aavher1.5、aavher1.14、aavher1.8、aavher1.16、aavher1.18、aavher1.35、aavher1.7、aavher1.36、aavher2.29、aavher2.4、aavher2.16、aavher2.30、aavher2.31、aavher2.36、aavher1.23、aavher3.1、aav2.5t、aav-paec、aav-lk01、aav-lk02、aav-lk03、aav-lk04、aav-lk05、aav-lk06、aav-lk07、aav-lk08、aav-lk09、aav-lk10、aav-lk11、aav-lk12、aav-lk13、aav-lk14、aav-lk15、aav-lk16、aav-lk17、aav-lk18、aav-lk19、aav-paec2、aav-paec4、aav-paec6、aav-paec7、aav-paec8、aav-paec11、aav-paec12、aav-2-pre-mirna-101、aav-8h、aav-8b、aav-h、aav-b、aavsm10-2、aav改组100-1、aav改组100-3、aav改组100-7、aav改组10-2、aav改组10-6、aav改组10-8、aav改组100-2、aavsm10-1、aavsm10-8、aavsm100-3、aavsm100-10、bnp61aav、bnp62aav、bnp63aav、aavrh.50、aavrh.43、aavrh.62、aavrh.48、aavhu.19、aavhu.11、aavhu.53、aav4-8/rh.64、aavlg-9/hu.39、aav54.5/hu.23、aav54.2/hu.22、aav54.7/hu.24、aav54.1/hu.21、aav54.4r/hu.27、aav46.2/hu.28、aav46.6/hu.29、aav128.1/hu.43、真型aav(ttaav)、upennaav10、日本aav10血清型、aavcbr-7.1、aavcbr-7.10、aavcbr-7.2、aavcbr-7.3、aavcbr-7.4、aavcbr-7.5、aavcbr-7.7、aavcbr-7.8、aavcbr-b7.3、aavcbr-b7.4、aavcbr-e1、aavcbr-e2、aavcbr-e3、aavcbr-e4、aavcbr-e5、aavcbr-e5、aavcbr-e6、aavcbr-e7、aavcbr-e8、aavcht-1、aavcht-2、aavcht-3、aavcht-6.1、aavcht-6.10、aavcht-6.5、aavcht-6.6、aavcht-6.7、aavcht-6.8、aavcht-p1、aavcht-p2、aavcht-p5、aavcht-p6、aavcht-p8、aavcht-p9、aavckd-1、aavckd-10、aavckd-2、aavckd-3、aavckd-4、aavckd-6、aavckd-7、aavckd-8、aavckd-b1、aavckd-b2、aavckd-b3、aavckd-b4、aavckd-b5、aavckd-b6、aavckd-b7、aavckd-b8、aavckd-h1、aavckd-h2、aavckd-h3、aavckd-h4、aavckd-h5、aavckd-h6、aavckd-n3、aavckd-n4、aavckd-n9、aavclg-f1、aavclg-f2、aavclg-f3、aavclg-f4、aavclg-f5、aavclg-f6、aavclg-f7、aavclg-f8、aavclv-1、aavclv1-1、aavclv1-10、aavclv1-2、aavclv-12、aavclv1-3、aavclv-13、aavclv1-4、aavclv1-7、aavclv1-8、aavclv1-9、aavclv-2、aavclv-3、aavclv-4、aavclv-6、aavclv-8、aavclv-d1、aavclv-d2、aavclv-d3、aavclv-d4、aavclv-d5、aavclv-d6、aavclv-d7、aavclv-d8、aavclv-e1、aavclv-k1、aavclv-k3、aavclv-k6、aavclv-l4、aavclv-l5、aavclv-l6、aavclv-m1、aavclv-m11、aavclv-m2、aavclv-m5、aavclv-m6、aavclv-m7、aavclv-m8、aavclv-m9、aavclv-r1、aavclv-r2、aavclv-r3、aavclv-r4、aavclv-r5、aavclv-r6、aavclv-r7、aavclv-r8、aavclv-r9、aavcsp-1、aavcsp-10、aavcsp-11、aavcsp-2、aavcsp-3、aavcsp-4、aavcsp-6、aavcsp-7、aavcsp-8、aavcsp-8.10、aavcsp-8.2、aavcsp-8.4、aavcsp-8.5、aavcsp-8.6、aavcsp-8.7、aavcsp-8.8、aavcsp-8.9、aavcsp-9、aav.hu.48r3、aav.vr-355、aav3b、aav4、aav5、aavf1/hsc1、aavf11/hsc11、aavf12/hsc12、aavf13/hsc13、aavf14/hsc14、aavf15/hsc15、aavf16/hsc16、aavf17/hsc17、aavf2/hsc2、aavf3/hsc3、aavf4/hsc4、aavf5/hsc5、aavf6/hsc6、aavf7/hsc7、aavf8/hsc8、aavf9/hsc9,及其变体和嵌合体。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一vp编码区是从参考核苷酸序列进行密码子优化的。

14.根据权利要求13所述的aav表达构建体,其中针对昆虫细胞对第一vp编码区进行密码子优化。

15.根据权利要求13所述的aav表达构建体,其中针对草地贪夜蛾细胞对第一vp编码区进行密码子优化。

16.根据权利要求13-15中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第一vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于100%。

17.根据权利要求13-15中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第一vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于95%。

18.根据权利要求13-15中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第一vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于90%。

19.根据权利要求13-15中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第一vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于85%。

20.根据权利要求13-15中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第一vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于80%。

21.根据权利要求9-20中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第二vp编码区是从参考核苷酸序列进行密码子优化的。

22.根据权利要求21所述的aav表达构建体,其中针对昆虫细胞对第二vp编码区进行密码子优化。

23.根据权利要求21所述的aav表达构建体,其中针对草地贪夜蛾细胞对第二vp编码区进行密码子优化。

24.根据权利要求21-23中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第二vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于100%。

25.根据权利要求21-23中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第二vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于95%。

26.根据权利要求21-23中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第二vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于90%。

27.根据权利要求21-23中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第二vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于85%。

28.根据权利要求21-23中任一项所述的aav表达构建体,其中对所述第二vp编码区进行密码子优化以与所述参考核苷酸序列的核苷酸同源性小于80%。

29.根据权利要求1-28中任一项所述的aav表达构建体,其中所述aav表达构建体包含含有所述第一vp编码区的第一核苷酸序列,和含有所述第二vp编码区的第二核苷酸序列。

30.根据权利要求29所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列由包含所述第一vp编码区的第一开放阅读框(orf)组成,并且所述第二核苷酸序列由包含所述第二vp编码区的第二开放阅读框(orf)组成,其中所述第一开放阅读框与所述第二开放阅读框不同。

31.根据权利要求30所述的aav表达构建体,其中所述第一开放阅读框编码vp1、vp2和vp3aav衣壳蛋白。

32.根据权利要求30所述的aav表达构建体,其中所述第一开放阅读框编码vp2和vp3aav衣壳蛋白,但不编码vp1aav衣壳蛋白。

33.根据权利要求30-32中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第二开放阅读框编码vp1aav衣壳蛋白,但不编码vp2或vp3aav衣壳蛋白。

34.根据权利要求1-33中任一项所述的aav表达构建体,其中所述aav表达构建体包含一个或多个含有起始密码子的起始密码子区,和一个或多个含有终止密码子的终止密码子区。

35.根据权利要求29-33中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含含有第一起始密码子的第一起始密码子区和含有第一终止密码子的第一终止密码子区;并且其中所述第二核苷酸序列包含含有第二起始密码子的第二起始密码子区和含有第二终止密码子的第二终止密码子区。

36.根据权利要求30-33中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一开放阅读框包含含有第一起始密码子的第一起始密码子区和含有第一终止密码子的第一终止密码子区;并且其中所述第二开放阅读框包含含有第二起始密码子的第二起始密码子区和含有第二终止密码子的第二终止密码子区。

37.根据权利要求1-36中任一项所述的aav表达构建体,其中所述aav表达构建体包含一个或多个表达控制区,所述一个或多个表达控制区包含一个或多个启动子序列。

38.根据权利要求29-36中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含第一表达控制区,所述第一表达控制区包含第一启动子序列;并且其中所述第二核苷酸序列包含第二表达控制区,所述第二表达控制区包含第二启动子序列。

39.根据权利要求30-33和36中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一开放阅读框包含第一表达控制区,所述第一表达控制区包含第一启动子序列;并且其中所述第二开放阅读框包含第二表达控制区,所述第二表达控制区包含第二启动子序列。

40.根据权利要求37-39中任一项所述的aav表达构建体,其中每个启动子序列独立地选自:杆状病毒主要晚期启动子、昆虫病毒启动子、非昆虫病毒启动子、脊椎动物病毒启动子、核基因启动子、来自一个或多个物种的包括病毒和非病毒元件的嵌合启动子、合成启动子,及其变体或衍生物。

41.根据权利要求37-39中任一项所述的aav表达构建体,其中每个启动子序列独立地选自:polh昆虫转录启动子、δie-1昆虫转录启动子、p10昆虫特异性启动子、δp10昆虫特异性启动子、cmv哺乳动物转录启动子,及其变体或衍生物。

42.根据权利要求37-39中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一启动子序列是p10昆虫特异性启动子。

43.根据权利要求37-39中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第二启动子序列是δp10昆虫特异性启动子。

44.根据权利要求37-39中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一启动子序列是p10昆虫特异性启动子;并且其中所述第二启动子序列是δp10昆虫特异性启动子。

45.根据权利要求37-44中任一项所述的aav表达构建体,其中优化一个或多个表达控制区以生产选自以下的vp1:vp2:vp3比例:大约或恰好1:1:10;大约或恰好2:2:10;大约或恰好3:3:10;大约或恰好4:4:10;大约或恰好5:5:10;大约或恰好1-2:1-2:10;大约或恰好1-3:1-3:10;大约或恰好1-4:1-4:10;大约或恰好1-5:1-5:10;大约或恰好2-3:2-3:10;大约或恰好2-4:2-4:10;大约或恰好2-5:2-5:10;大约或恰好3-4:3-4:10;大约或恰好3-5:3-5:10;和大约或恰好4-5:4-5:10。

46.根据权利要求29-33、35-36和38-45中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含含有第一启动子序列的第一表达控制区、含有第一起始密码子的第一起始密码子区、第一vp编码区和含有第一终止密码子的第一终止密码子区;并且其中所述第二核苷酸序列包含含有第二启动子序列的第二表达控制区、含有第二起始密码子的第二起始密码子区、第二vp编码区和含有第二终止密码子的第二终止密码子区。

47.根据权利要求30-33、36和39-45中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一开放阅读框包含含有第一启动子序列的第一表达控制区、含有第一起始密码子的第一起始密码子区、第一vp编码区和含有第一终止密码子的第一终止密码子区;并且其中所述第二开放阅读框包含含有第二启动子序列的第二表达控制区、含有第二起始密码子的第二起始密码子区、第二vp编码区和含有第二终止密码子的第二终止密码子区。

48.一种aav病毒生产系统,其包括aav表达构建体和包含aav有效载荷的aav有效载荷构建体。

49.根据权利要求48所述的aav病毒生产系统,其中所述aav表达构建体为根据权利要求1-47中任一项所述的aav表达构建体。

50.根据权利要求48-49中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产系统包含aav病毒生产细胞。

51.根据权利要求50所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞包含所述aav表达构建体和所述aav有效载荷构建体。

52.根据权利要求50-51中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

53.根据权利要求50-51中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

54.根据权利要求50-51中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

55.根据权利要求50-51中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21细胞。

56.一种生产aav病毒生产细胞的方法,该方法包括:提供包括aav表达构建体和aav有效载荷构建体的aav病毒生产系统;将aav病毒生产系统转染到aav病毒生产细胞中。

57.根据权利要求56所述的方法,其中所述aav表达构建体为根据权利要求1-47中任一项所述的aav表达构建体。

58.根据权利要求56所述的方法,其中所述aav病毒生产系统为根据权利要求48-49中任一项所述的aav病毒生产系统。

59.根据权利要求56-58中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

60.根据权利要求56-58中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

61.根据权利要求56-58中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

62.根据权利要求56-58中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21细胞。

63.一种在aav病毒生产细胞中表达vp1、vp2和vp3aav衣壳蛋白的方法,该方法包括:提供包含aav表达构建体的aav病毒生产系统,所述aav表达构建体包含一个或多个vp编码区;将aav病毒生产系统转染到aav病毒生产细胞中;并使aav病毒生产细胞暴露于允许aav病毒生产细胞将vp编码区加工成相应的vp1、vp2和vp3aav衣壳蛋白的条件。

64.根据权利要求63所述的方法,其中所述aav表达构建体为根据权利要求1-47中任一项所述的aav表达构建体。

65.根据权利要求63所述的方法,其中所述aav病毒生产系统为根据权利要求48-49中任一项所述的aav病毒生产系统。

66.根据权利要求63-65中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

67.根据权利要求63-65中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

68.根据权利要求63-65中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

69.根据权利要求63-65中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21细胞。

70.一种在aav病毒生产细胞中生产重组腺相关病毒(raav)载体的方法,所述方法包括:提供包含aav表达构建体和aav有效载荷构建体的aav病毒生产系统,其中aav表达构建体包含一个或多个vp编码区,所述vp编码区包含一个或多个编码vp1、vp2和vp3衣壳蛋白的核苷酸序列,并且其中aav有效载荷构建体包含含有aav有效载荷的有效载荷区;将aav病毒生产系统转染到aav病毒生产细胞中;使aav病毒生产细胞暴露于允许aav病毒生产细胞将aav表达构建体和aav有效载荷构建体加工成raav颗粒的条件;并从aav病毒生产细胞收集raav颗粒。

71.根据权利要求70所述的方法,其中所述aav表达构建体为根据权利要求1-47中任一项所述的aav表达构建体。

72.根据权利要求64所述的方法,其中所述aav病毒生产系统为根据权利要求48-49中任一项所述的aav病毒生产系统。

73.根据权利要求70-72中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

74.根据权利要求70-72中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

75.根据权利要求70-72中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

76.根据权利要求70-72中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21细胞。

77.一种aav表达构建体,其包含第一核苷酸序列,所述第一核苷酸序列包含:rep52编码区,其包含编码rep52蛋白的rep52序列;rep78编码区,其包含编码rep78蛋白的rep78序列,或其组合。

78.根据权利要求77所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含rep52编码区和rep78编码区。

79.根据权利要求78所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含2a序列区,其包含编码病毒2a肽的2a核苷酸序列。

80.根据权利要求79所述的aav表达构建体,其中所述2a核苷酸序列编码选择以下的病毒2a肽:来自口蹄疫病毒的f2a、来自明脉扁刺蛾β四体病毒的t2a、来自马鼻炎a病毒的e2a、来自猪捷申病毒-1的p2a、来自细胞质多角体病毒的bmcpv2a和来自b.moriflacherie病毒的bmifv2a,以及它们的组合。

81.根据权利要求79-80中任一项所述的aav表达构建体,其中所述2a序列区位于rep52编码区和rep78编码区之间的第一核苷酸序列中。

82.根据权利要求79-80中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包括以下区:rep52编码区、2a序列区和rep78编码区。

83.根据权利要求79-80中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包括以下区:rep78编码区、2a序列区和rep52编码区。

84.根据权利要求79-80中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包含以下区:包含起始密码子的起始密码子区、rep52编码区、2a序列区、rep78编码区和包含终止密码子的终止密码子区。

85.根据权利要求79-80中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包含以下区:包含起始密码子的起始密码子区、rep78编码区、2a序列区、rep52编码区和包含终止密码子的终止密码子区。

86.根据权利要求84-85中任一项所述的aav表达构建体,其中所述起始密码子是atg起始密码子。

87.根据权利要求78-86中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列基本上由单个开放阅读框组成。

88.根据权利要求78-86中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列由单个开放阅读框组成。

89.根据权利要求78所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含ires序列区,所述ires序列区包含编码内部核糖体进入位点(ires)的ires核苷酸序列。

90.根据权利要求89所述的aav表达构建体,其中所述ires核苷酸序列编码选自以下的内部核糖体进入位点(ires):来自口蹄疫病毒的fmdv-ires、来自脑心肌炎病毒的emcv-ires,及其组合。

91.根据权利要求89-90中任一项所述的aav表达构建体,其中所述ires序列区位于rep52编码区和rep78编码区之间的第一核苷酸序列中。

92.根据权利要求89-90中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包括以下区:rep52编码区、ires序列区和rep78编码区。

93.根据权利要求89-90中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包括以下区:rep78编码区、ires序列区和rep52编码区。

94.根据权利要求89-90中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包括以下区:包含第一起始密码子的第一起始密码子区、rep52编码区、包含第一终止密码子的第一终止密码子区、ires序列区、包含第二起始密码子的第二起始密码子区、rep78编码区和包含第二终止密码子的第二终止密码子区。

95.根据权利要求89-90中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列依次包括以下区:包含第一起始密码子的第一起始密码子区、rep78编码区、包含第一终止密码子的第一终止密码子区、ires序列区、包含第二起始密码子的第二起始密码子区、rep52编码区和包含第二终止密码子的第二终止密码子区。

96.根据权利要求94-95中任一项所述的aav表达构建体,其中所述起始密码子是atg起始密码子。

97.根据权利要求89-96中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列基本上由以下组成:包含rep52编码区的第一开放阅读框、ires序列区和包含rep78编码区的第二开放阅读框。

98.根据权利要求89-96中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列基本上由以下组成:包含rep78编码区的第一开放阅读框、ires序列区和包含rep52编码区的第二开放阅读框。

99.根据权利要求89-96中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列由以下组成:包含rep52编码区的第一开放阅读框、ires序列区和包含rep78编码区的第二开放阅读框。

100.根据权利要求89-96中任一项所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列由以下组成:包含rep78编码区的第一开放阅读框、ires序列区和包含rep52编码区的第二开放阅读框。

101.根据权利要求77所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含rep52编码区,并且其中aav表达构建体包含与第一核苷酸序列不同的第二核苷酸序列,并且其包含编码rep78蛋白的rep78序列。

102.根据权利要求101所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含rep52编码区和第一必需基因区,所述第一必需基因区包含编码aav表达构建体的必需蛋白的必需基因核苷酸序列;并且其中所述第二核苷酸序列包含rep78编码区和第二必需基因区,所述第二必需基因区包含编码aav表达构建体的必需蛋白的必需基因核苷酸序列。

103.根据权利要求102所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含rep52编码区、含有编码病毒2a肽的2a核苷酸序列的第一2a序列区和第一必需基因区;并且其中所述第二核苷酸序列包含rep78编码区、含有编码病毒2a肽的2a核苷酸序列的第二2a序列区和第二必需基因区,所述第二必需基因区包含编码aav表达构建体的必需蛋白的必需基因核苷酸序列。

104.根据权利要求103所述的aav表达构建体,其中所述aav表达构建体是杆状病毒构建体。

105.根据权利要求104所述的aav表达构建体,其中所述第一必需基因区和所述第二必需基因区中的必需基因核苷酸序列各自编码必需的杆状病毒蛋白。

106.根据权利要求104所述的aav表达构建体,其中所述第一必需基因区和所述第二必需基因区中的必需基因核苷酸序列各自独立地编码选自以下的必需杆状病毒蛋白:gp64杆状病毒包膜蛋白、vp39杆状病毒衣壳蛋白及其组合。

107.根据权利要求104所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含rep52编码区、第一2a序列区和第一必需基因区,其中所述第一必需基因区包含编码vp39杆状病毒衣壳蛋白的必需基因核苷酸序列;并且其中所述第二核苷酸序列包含rep78编码区、第二2a序列区和第二必需基因区,其中所述第二必需基因区包含编码gp64杆状病毒包膜蛋白的必需基因核苷酸序列。

108.根据权利要求104所述的aav表达构建体,其中所述第一核苷酸序列包含rep52编码区、第一2a序列区和第一必需基因区,其中所述第一必需基因区包含编码gp64杆状病毒包膜蛋白的必需基因核苷酸序列;并且其中第二核苷酸序列包含rep78编码区、第二2a序列区和第二必需基因区,其中所述第二必需基因区包含编码vp39杆状病毒衣壳蛋白的必需基因核苷酸序列。

109.一种aav病毒生产系统,其包含aav表达构建体和aav有效载荷构建体。

110.根据权利要求109所述的aav病毒生产系统,其中所述aav表达构建体为权利要求77-108中任一项所述的aav表达构建体。

111.根据权利要求109-110中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav表达构建体包含rep52编码区、rep78编码区或其组合,并且还包含一个或多个vp编码区,所述vp编码区包含一个或多个编码vp1、vp2和vp3衣壳蛋白的核苷酸序列;并且其中所述aav有效载荷构建体包含rep52编码区、rep78编码区或其组合,并且还包含含有aav有效载荷的有效载荷区。

112.根据权利要求109-110中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav表达构建体包含rep52编码区和一个或多个vp编码区,所述vp编码区包含一个或多个编码vp1、vp2和vp3衣壳蛋白的核苷酸序列;并且其中aav有效载荷构建体包含rep78编码区和含有aav有效载荷的有效载荷区。

113.根据权利要求109-110中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav表达构建体包含rep78编码区和一个或多个vp编码区,所述vp编码区包含一个或多个编码vp1、vp2和vp3衣壳蛋白的核苷酸序列;并且其中aav有效载荷构建体包含rep52编码区和含有aav有效载荷的有效载荷区。

114.根据权利要求111-113中任一项所述的aav病毒生产系统,其中rep52编码区包含选自以下的启动子:opei、dei、ph及其组合。

115.根据权利要求111-113中任一项所述的aav病毒生产系统,其中rep78编码区包含选自以下的启动子:opei、dei、ph及其组合。

116.根据权利要求111-115中任一项所述的aav病毒生产系统,其中一个或多个vp编码区包含一个或多个编码aav血清型的vp1、vp2和vp3衣壳蛋白的核苷酸序列,其中所述aav血清型选自:aavphp.b(php.b)、aavphp.a(php.a)、aavg2b-26、aavg2b-13、aavth1.1-32、aavth1.1-35、aavphp.b2(php.b2)、aavphp.b3(php.b3)、aavphp.n/php.b-dgt、aavphp.b-est、aavphp.b-ggt、aavphp.b-atp、aavphp.b-att-t、aavphp.b-dgt-t、aavphp.b-ggt-t、aavphp.b-sgs、aavphp.b-aqp、aavphp.b-qqp、aavphp.b-snp(3)、aavphp.b-snp、aavphp.b-qgt、aavphp.b-nqt、aavphp.b-egs、aavphp.b-sgn、aavphp.b-egt、aavphp.b-dst、aavphp.b-dst、aavphp.b-stp、aavphp.b-pqp、aavphp.b-sqp、aavphp.b-qlp、aavphp.b-tmp、aavphp.b-ttp、aavphp.s/g2a12、aavg2a15/g2a3(g2a3)、aavg2b4(g2b4)、aavg2b5(g2b5)、php.s、aav1、aav2、aav2g9、aav3、aav3a、aav3b、aav3-3、aav4、aav4-4、aav5、aav6、aav6.1、aav6.2、aav6.1.2、aav7、aav7.2、aav8、aav9、aav9.11、aav9.13、aav9.16、aav9.24、aav9.45、aav9.47、aav9.61、aav9.68、aav9.84、aav9.9、aav10、aav11、aav12、aav16.3、aav24.1、aav27.3、aav42.12、aav42-1b、aav42-2、aav42-3a、aav42-3b、aav42-4、aav42-5a、aav42-5b、aav42-6b、aav42-8、aav42-10、aav42-11、aav42-12、aav42-13、aav42-15、aav42-aa、aav43-1、aav43-12、aav43-20、aav43-21、aav43-23、aav43-25、aav43-5、aav44.1、aav44.2、aav44.5、aav223.1、aav223.2、aav223.4、aav223.5、aav223.6、aav223.7、aav1-7/rh.48、aav1-8/rh.49、aav2-15/rh.62、aav2-3/rh.61、aav2-4/rh.50、aav2-5/rh.51、aav3.1/hu.6、aav3.1/hu.9、aav3-9/rh.52、aav3-11/rh.53、aav4-8/r11.64、aav4-9/rh.54、aav4-19/rh.55、aav5-3/rh.57、aav5-22/rh.58、aav7.3/hu.7、aav16.8/hu.10、aav16.12/hu.11、aav29.3/bb.1、aav29.5/bb.2、aav106.1/hu.37、aav114.3/hu.40、aav127.2/hu.41、aav127.5/hu.42、aav128.3/hu.44、aav130.4/hu.48、aav145.1/hu.53、aav145.5/hu.54、aav145.6/hu.55、aav161.10/hu.60、aav161.6/hu.61、aav33.12/hu.17、aav33.4/hu.15、aav33.8/hu.16、aav52/hu.19、aav52.1/hu.20、aav58.2/hu.25、aava3.3、aava3.4、aava3.5、aava3.7、aavc1、aavc2、aavc5、aav-dj、aav-dj8、aavf3、aavf5、aavh2、aavrh.72、aavhu.8、aavrh.68、aavrh.70、aavpi.1、aavpi.3、aavpi.2、aavrh.60、aavrh.44、aavrh.65、aavrh.55、aavrh.47、aavrh.69、aavrh.45、aavrh.59、aavhu.12、aavh6、aavlk03、aavh-1/hu.1、aavh-5/hu.3、aavlg-10/rh.40、aavlg-4/rh.38、aavlg-9/hu.39、aavn721-8/rh.43、aavch.5、aavch.5r1、aavcy.2、aavcy.3、aavcy.4、aavcy.5、aavcy.5r1、aavcy.5r2、aavcy.5r3、aavcy.5r4、aavcy.6、aavhu.1、aavhu.2、aavhu.3、aavhu.4、aavhu.5、aavhu.6、aavhu.7、aavhu.9、aavhu.10、aavhu.11、aavhu.13、aavhu.15、aavhu.16、aavhu.17、aavhu.18、aavhu.20、aavhu.21、aavhu.22、aavhu.23.2、aavhu.24、aavhu.25、aavhu.27、aavhu.28、aavhu.29、aavhu.29r、aavhu.31、aavhu.32、aavhu.34、aavhu.35、aavhu.37、aavhu.39、aavhu.40、aavhu.41、aavhu.42、aavhu.43、aavhu.44、aavhu.44r1、aavhu.44r2、aavhu.44r3、aavhu.45、aavhu.46、aavhu.47、aavhu.48、aavhu.48r1、aavhu.48r2、aavhu.48r3、aavhu.49、aavhu.51、aavhu.52、aavhu.54、aavhu.55、aavhu.56、aavhu.57、aavhu.58、aavhu.60、aavhu.61、aavhu.63、aavhu.64、aavhu.66、aavhu.67、aavhu.14/9、aavhu.t19、aavrh.2、aavrh.2r、aavrh.8、aavrh.8r、aavrh.10、aavrh.12、aavrh.13、aavrh.13r、aavrh.14、aavrh.17、aavrh.18、aavrh.19、aavrh.20、aavrh.21、aavrh.22、aavrh.23、aavrh.24、aavrh.25、aavrh.31、aavrh.32、aavrh.33、aavrh.34、aavrh.35、aavrh.36、aavrh.37、aavrh.37r2、aavrh.38、aavrh.39、aavrh.40、aavrh.46、aavrh.48、aavrh.48.1、aavrh.48.1.2、aavrh.48.2、aavrh.49、aavrh.51、aavrh.52、aavrh.53、aavrh.54、aavrh.56、aavrh.57、aavrh.58、aavrh.61、aavrh.64、aavrh.64r1、aavrh.64r2、aavrh.67、aavrh.73、aavrh.74、aavrh8r、aavrh8ra586r突变体、aavrh8rr533a突变体、aaav、baav、山羊aav、牛aav、aavhe1.1、aavher1.5、aavher1.14、aavher1.8、aavher1.16、aavher1.18、aavher1.35、aavher1.7、aavher1.36、aavher2.29、aavher2.4、aavher2.16、aavher2.30、aavher2.31、aavher2.36、aavher1.23、aavher3.1、aav2.5t、aav-paec、aav-lk01、aav-lk02、aav-lk03、aav-lk04、aav-lk05、aav-lk06、aav-lk07、aav-lk08、aav-lk09、aav-lk10、aav-lk11、aav-lk12、aav-lk13、aav-lk14、aav-lk15、aav-lk16、aav-lk17、aav-lk18、aav-lk19、aav-paec2、aav-paec4、aav-paec6、aav-paec7、aav-paec8、aav-paec11、aav-paec12、aav-2-pre-mirna-101、aav-8h、aav-8b、aav-h、aav-b、aavsm10-2、aav改组100-1、aav改组100-3、aav改组100-7、aav改组10-2、aav改组10-6、aav改组10-8、aav改组100-2、aavsm10-1、aavsm10-8、aavsm100-3、aavsm100-10、bnp61aav、bnp62aav、bnp63aav、aavrh.50、aavrh.43、aavrh.62、aavrh.48、aavhu.19、aavhu.11、aavhu.53、aav4-8/rh.64、aavlg-9/hu.39、aav54.5/hu.23、aav54.2/hu.22、aav54.7/hu.24、aav54.1/hu.21、aav54.4r/hu.27、aav46.2/hu.28、aav46.6/hu.29、aav128.1/hu.43、真型aav(ttaav)、upennaav10、日本aav10血清型、aavcbr-7.1、aavcbr-7.10、aavcbr-7.2、aavcbr-7.3、aavcbr-7.4、aavcbr-7.5、aavcbr-7.7、aavcbr-7.8、aavcbr-b7.3、aavcbr-b7.4、aavcbr-e1、aavcbr-e2、aavcbr-e3、aavcbr-e4、aavcbr-e5、aavcbr-e5、aavcbr-e6、aavcbr-e7、aavcbr-e8、aavcht-1、aavcht-2、aavcht-3、aavcht-6.1、aavcht-6.10、aavcht-6.5、aavcht-6.6、aavcht-6.7、aavcht-6.8、aavcht-p1、aavcht-p2、aavcht-p5、aavcht-p6、aavcht-p8、aavcht-p9、aavckd-1、aavckd-10、aavckd-2、aavckd-3、aavckd-4、aavckd-6、aavckd-7、aavckd-8、aavckd-b1、aavckd-b2、aavckd-b3、aavckd-b4、aavckd-b5、aavckd-b6、aavckd-b7、aavckd-b8、aavckd-h1、aavckd-h2、aavckd-h3、aavckd-h4、aavckd-h5、aavckd-h6、aavckd-n3、aavckd-n4、aavckd-n9、aavclg-f1、aavclg-f2、aavclg-f3、aavclg-f4、aavclg-f5、aavclg-f6、aavclg-f7、aavclg-f8、aavclv-1、aavclv1-1、aavclv1-10、aavclv1-2、aavclv-12、aavclv1-3、aavclv-13、aavclv1-4、aavclv1-7、aavclv1-8、aavclv1-9、aavclv-2、aavclv-3、aavclv-4、aavclv-6、aavclv-8、aavclv-d1、aavclv-d2、aavclv-d3、aavclv-d4、aavclv-d5、aavclv-d6、aavclv-d7、aavclv-d8、aavclv-e1、aavclv-k1、aavclv-k3、aavclv-k6、aavclv-l4、aavclv-l5、aavclv-l6、aavclv-m1、aavclv-m11、aavclv-m2、aavclv-m5、aavclv-m6、aavclv-m7、aavclv-m8、aavclv-m9、aavclv-r1、aavclv-r2、aavclv-r3、aavclv-r4、aavclv-r5、aavclv-r6、aavclv-r7、aavclv-r8、aavclv-r9、aavcsp-1、aavcsp-10、aavcsp-11、aavcsp-2、aavcsp-3、aavcsp-4、aavcsp-6、aavcsp-7、aavcsp-8、aavcsp-8.10、aavcsp-8.2、aavcsp-8.4、aavcsp-8.5、aavcsp-8.6、aavcsp-8.7、aavcsp-8.8、aavcsp-8.9、aavcsp-9、aav.hu.48r3、aav.vr-355、aav3b、aav4、aav5、aavf1/hsc1、aavf11/hsc11、aavf12/hsc12、aavf13/hsc13、aavf14/hsc14、aavf15/hsc15、aavf16/hsc16、aavf17/hsc17、aavf2/hsc2、aavf3/hsc3、aavf4/hsc4、aavf5/hsc5、aavf6/hsc6、aavf7/hsc7、aavf8/hsc8、aavf9/hsc9,及其变体或嵌合体。

117.根据权利要求109-116中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产系统包括aav病毒生产细胞。

118.根据权利要求117所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞包含所述aav表达构建体和所述aav有效载荷构建体。

119.根据权利要求117-118中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

120.根据权利要求117-118中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

121.根据权利要求117-118中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

122.根据权利要求117-118中任一项所述的aav病毒生产系统,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf2l细胞。

123.一种生产aav病毒生产细胞的方法,该方法包括:提供包含aav表达构建体和aav有效载荷构建体的aav病毒生产系统;并将aav病毒生产系统转染到aav病毒生产细胞中。

124.根据权利要求123所述的方法,其中所述aav表达构建体为根据权利要求77-108中任一项所述的aav表达构建体。

125.根据权利要求123所述的方法,其中所述aav病毒生产系统为根据权利要求109-116中任一项所述的aav病毒生产系统。

126.根据权利要求123-125中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

127.根据权利要求123-125中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

128.根据权利要求123-125中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

129.根据权利要求123-125中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21.l细胞。

130.一种在aav病毒生产细胞中表达rep78蛋白和rep52蛋白的方法,所述方法包括:提供aav病毒生产系统,所述aav病毒生产系统包含至少一个含有rep52编码区的核酸构建体和至少一个含有rep78编码区的核酸构建体;将所述aav病毒生产系统转染到aav病毒生产细胞中;并使aav病毒生产细胞暴露于允许aav病毒生产细胞将rep52编码区加工成相应的rep52蛋白并将rep78编码区加工成相应的rep78蛋白的条件。

131.根据权利要求130所述的方法,其中所述至少一个含有rep52编码区的核酸构建体是根据权利要求77-108中任一项所述的aav表达构建体。

132.根据权利要求130所述的方法,其中所述至少一个含有rep78编码区的核酸构建体是根据权利要求77-108中任一项所述的aav表达构建体。

133.根据权利要求130所述的方法,其中所述aav病毒生产系统包含至少一个含有rep52编码区和rep78编码区的核酸构建体。

134.根据权利要求133所述的方法,其中所述至少一个含有rep52编码区和rep78编码区的核酸构建体是根据权利要求77-108中任一项所述的aav表达构建体。

135.根据权利要求130所述的方法,其中aav病毒生产系统为根据权利要求109-116中任一项所述的aav病毒生产系统。

136.根据权利要求130-135中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

137.根据权利要求130-135中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

138.根据权利要求130-135中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

139.根据权利要求130-135中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21细胞。

140.一种在aav病毒生产细胞中生产重组腺相关病毒(raav)载体的方法,所述方法包括:提供包含aav表达构建体和aav有效载荷构建体的aav病毒生产系统,其中所述aav表达构建体包含一个或多个vp编码区,所述一个或多个vp编码区包含一个或多个编码vp1、vp2和vp3衣壳蛋白的核苷酸序列,并且其中aav有效载荷构建体包含有效载荷区,所述有效载荷区包含aav有效载荷;将aav病毒生产系统转染到aav病毒生产细胞中;使aav病毒生产细胞暴露于允许aav病毒生产细胞将aav表达构建体和aav有效载荷构建体加工成raav颗粒的条件;并从aav病毒生产细胞中收集raav颗粒。

141.根据权利要求140所述的方法,其中所述aav表达构建体为根据权利要求77-108中任一项所述的aav表达构建体。

142.根据权利要求140所述的方法,其中所述aav病毒生产系统为根据权利要求109-116中任一项所述的aav病毒生产系统。

143.根据权利要求140-142中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是哺乳动物细胞。

144.根据权利要求140-142中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是hek293细胞。

145.根据权利要求140-142中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是昆虫细胞。

146.根据权利要求140-142中任一项所述的方法,其中所述aav病毒生产细胞是sf9细胞或sf21细胞。


技术总结
本公开描述了用于生产包括重组腺相关病毒(rAAV)颗粒在内的腺相关病毒(AAV)颗粒的方法和系统。在某些实施方案中,生产方法和系统使用草地贪夜蛾昆虫细胞(例如Sf9或Sf21)作为病毒生产细胞。在某些实施方案中,生产方法和系统在AAV颗粒的生产中使用杆状病毒表达载体(BEV)。在某些实施方案中,生产方法和系统使用工程化核酸构建体,其编码AAV衣壳蛋白,例如VP1、VP2和VP3。在某些实施方案中,生产方法和系统使用工程化核酸构建体,其编码AAV复制蛋白,例如Rep78和Rep52。

技术研发人员:J·M·斯莱克;L·马兰加;S·切基尼
受保护的技术使用者:沃雅戈治疗公司
技术研发日:2019.10.04
技术公布日:2021.07.23
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