假结核耶尔森氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒与流程

文档序号:20615679发布日期:2020-05-06 20:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种针对假结核耶尔森氏菌的快速恒温检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括能扩增假结核耶尔森氏菌基因组特异性碱基序列的引物组;

其中,能扩增假结核耶尔森氏菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物组a或引物组a’;

引物组a:

上游外引物f3_a:5’-gttgttgtatgaattgctgg-3’(seqidno:1);

下游外引物b3_a:5’-gcggataactcctgttct-3’(seqidno:2);

上游内引物fip_a:5’-gtaacgctgaaataccgaactgtaaatggttgatgaaggtgg-3’(seqidno:3);

下游内引物bip_a:5’-cacctttatctctgataatttccgcctttccagctcatgttgat-3’(seqidno:4);

引物组a’:

上游外引物f3_a:5’-gttgttgtatgaattgctgg-3’;

下游外引物b3_a:5’-gcggataactcctgttct-3’;

上游内引物fip_a:5’-gtaacgctgaaataccgaactgtaaatggttgatgaaggtgg-3’;

下游内引物bip_a:5’-cacctttatctctgataatttccgcctttccagctcatgttgat-3’;

上游环引物lf_a:5’-tatgctcatccaggcgtttc-3’(seqidno:9);

和/或,下游环引物lb_a:5’-tgatggcgatggggaaaatt-3’(seqidno:10)。

2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,其还包括bstdna聚合酶反应缓冲液、bstdna聚合酶、dntp溶液、mg2+、甜菜碱中的一种或多种。

3.一种针对假结核耶尔森氏菌的快速恒温检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的酶反应体系包括:1×bstdna聚合酶反应缓冲液,2-9mmol/lmg2+,1.0-1.6mmol/ldntp,0.8-2.0μmol/l的fip_a和bip_a引物,0.15-0.3μmol/l的f3_a和b3_a引物,包括或不包括0.4-1.0μmol/l的lf_a和/或lb_a引物,0.16-0.64u/μlbstdna聚合酶,和0-1.5mol/l的甜菜碱。

4.一种载体,其特征在于,所述载体包含能扩增假结核耶尔森氏菌基因组特异性碱基序列的引物组;

其中,所述能扩增假结核耶尔森氏菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物组a或引物组a’;

引物组a:

上游外引物f3_a:5’-gttgttgtatgaattgctgg-3’(seqidno:1);

下游外引物b3_a:5’-gcggataactcctgttct-3’(seqidno:2);

上游内引物fip_a:5’-gtaacgctgaaataccgaactgtaaatggttgatgaaggtgg-3’(seqidno:3);

下游内引物bip_a:5’-cacctttatctctgataatttccgcctttccagctcatgttgat-3’(seqidno:4);

引物组a’:

上游外引物f3_a:5’-gttgttgtatgaattgctgg-3’;

下游外引物b3_a:5’-gcggataactcctgttct-3’;

上游内引物fip_a:5’-gtaacgctgaaataccgaactgtaaatggttgatgaaggtgg-3’;

下游内引物bip_a:5’-cacctttatctctgataatttccgcctttccagctcatgttgat-3’;

上游环引物lf_a:5’-tatgctcatccaggcgtttc-3’(seqidno:9);

和/或,下游环引物lb_a:5’-tgatggcgatggggaaaatt-3’(seqidno:10)。

5.如权利要求1~3之任一项所述的试剂盒或如权利要求4所述的载体在恒温检测假结核耶尔森氏菌中的应用。


技术总结
本发明公开了一种针对假结核耶尔森氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒。所述方法为:从待测样品中提取基因组DNA;以所述基因组DNA为模板,以能扩增假结核耶尔森氏菌特异性序列的引物组为引物,在酶反应体系下进行恒温扩增反应;通过判断反应结果是否为阳性,确定待测样品中是否存在假结核耶尔森氏菌。本发明检测方法具有高灵敏度和高特异性,检测时间短,结果判定简单,操作便捷,成本低,具广泛应用前景。

技术研发人员:李园园;李雪玲;刘伟;韦朝春;贾犇;陆长德;李亦学;曹永梅
受保护的技术使用者:上海产业技术研究院;上海旺旺食品集团有限公司
技术研发日:2016.08.30
技术公布日:2020.05.05
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