一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体T171A及其应用的制作方法

文档序号:21452789发布日期:2020-07-10 17:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体,其特征在于,将氨基酸序列如seqidno.2所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第171位的苏氨酸突变为丙氨酸,命名为t171a。

2.表达权利要求1所述突变体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)根据确定的突变位点,设计定点突变的突变引物,以携带环糊精葡萄糖基转移酶基因的载体为模板进行定点突变;构建含编码突变体的基因的质粒载体;

(2)将突变体质粒转化进宿主细胞;

(3)挑选阳性克隆进行发酵培养,离心上清即为环糊精葡萄糖基转移酶突变体的粗酶液。

3.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述质粒载体为puc系列,pet系列,或pgex中的任意一种。

4.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述质粒为cgt/pet20b(+)。

5.根据权利要求2所述方法,其特征在于,所述宿主细胞为细菌或真菌细胞。

6.编码权利要求1所述突变体的基因。

7.携带权利要求6所述基因的质粒或细胞。

8.权利要求1所述突变体在食品、医药、化工领域的应用。


技术总结
本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体T171A及其应用,属于基因工程和酶工程领域。本发明通过对环糊精葡萄糖基转移酶进行突变,得到了环糊精葡萄糖基转移酶歧化活力更高的突变体。突变体T171A的摇瓶发酵酶歧化活力分别为野生酶的1.22倍。本发明对环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义,并提高了该酶的在食品、医药、化工行业中的应用潜力。

技术研发人员:吴敬;宿玲恰;杜立
受保护的技术使用者:江南大学
技术研发日:2018.12.07
技术公布日:2020.07.10
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