1.本发明涉及一种鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合物的制备方法。
背景技术：
2.铜是动物体所必需的微量元素之一，在动物体内参与血红蛋白的合成和某些氧化酶的合成与激活。铜的缺乏会影响动物对铁的利用，从而产生贫血。铜是饲养动物必需的微量元素，有重要的营养生理功能，同时对动物的免疫系统及抗氧化应激也有强烈影响。但不同铜源的生物利用效率不同。铜元素的总利用率较低，但其促进幼小动物生长作用明显，故饲料中铜元素超量添加的情况比较普遍，从而造成动物粪便中铜排泄量高，污染环境以及资源浪费等问题。因此，寻找一种新型的铜源，促进动物的生长，减少资源的浪费，是人们当前关注的重点。
3.传统观点认为，蛋白质是一类种族特异性很强的大分子，蛋白质实质上就是氨基酸，蛋白质被消化成游离氨基酸后才能被吸收利用。但早在1921年就提出了小肽转运的可能性，由于人们受传统蛋白质消化吸收理论的影响，对小肽完整吸收的观点难以接受。newey等在肠道静脉中检测到gly
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gly的存在，首先提出肽可以被完全转运的确切证据。还有发现蛋白质在消化道中的消化终产物大部分是小肽，且小肽能完整地通过肠粘膜细胞而进入体循环，随后小肽的i型和ⅱ型载体分别被克隆。随着研究的不断深入，小肽能被完整吸收的观点逐渐被人们认识和利用。
4.目前，在新型的铜源研究上主要采用氨基酸螯合铜离子。如张小燕和李亚萍以蛋白粉为复合氨基酸源对复合氨基酸铜螯合物的合成工艺条件进行了初步的探讨；王永秋等以天门冬氨酸为原料，合成了天门冬氨酸螯合铜，运用正交设计试验对影响天门冬氨酸螯合铜反应的条件进行研究；梁柏林等以鸡羽毛为原料，用微波法合成了复合氨基酸铜，在微波功率400w配位比3:1条件下反应30min，得到的复合氨基酸螯合率为93.8％；林娜妹等以甘氨酸为原料，与乙酸铜进行室温固相反应得到水合甘氨酸螯合物，所得产物螯合率为98.27％。但较少见肽螯合铜离子的报道。小肽能以完整形式被机体吸收进入循环系统，从而被组织利用合成蛋白质或直接成为生理活性物质。小肽不仅能被小肠粘膜吸收利用，且其合成分子蛋白的速度远远高于氨基酸。从天然蛋白源制得的肽铜离子螯合物可以作为食品添加剂、化妆品添加剂、动物饲料和有机肥料等产品应用到工业化生产中，与一些金属离子补充剂比较，无毒副作用，具有更优良的生物学效价，有很大的商业价值。
5.目前，影响铜离子与肽进行螯合反应的因素有物料的质量比、ph、温度和反应时间等，不同的螯合工艺所得螯合产物的螯合率和理化性质有所差异。鳕鱼是大型冷水性重要经济鱼，贵食用鱼。近年来随着我国贸易的发展，大量鳕鱼被加工成冷冻鱼片、鱼段、块冻鱼排出口，加工过程中产生的下脚料鳕鱼皮占加工量的7％～8％，而鳕鱼皮干物质中有胶原蛋白50％以上，目前在处理方面还处于初级阶段。为提高鳕鱼皮的利用率，试验采用正交试验法探讨鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合铜的制备工艺，分析胶原蛋白肽与硫酸铜的质量比、ph值、温度等因素对铜螯合物产率影响的变化规律，为鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合工艺条件研究提
供参考，进一步提高鳕鱼皮的高附加值利用，减少环境污染，获得良好的经济效益与社会效益，促进海洋水产品深加工产业的发展。
技术实现要素：
6.本发明提出一种鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合物的制备方法。
7.一种鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合物的制备方法，包括以下步骤：
8.(1)称取一定量的鳕鱼皮胶原蛋白肽和硫酸铜，置于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，充分混合溶解，进行水浴加热；
9.(2)充分反应后，加适量无水乙醇，抽滤，滤渣于100℃水蒸气下烘干，用研钵研磨产物，过60目筛，称重；
10.(3)称取edta3.7224g，用热水溶解，稀释定容至500ml，放置24～48h后备用；
11.(4)将0.2gpan溶于乙醇，用乙醇稀释定容至100m；
12.(5)称取8g鳕鱼皮胶原蛋白肽粉末与2g的硫酸铜粉末，固定反应温度50℃，反应30min，控制ph712，设定每一个ph为一个反应控制单元，每个单元反应结束后，于最大吸收波长下测吸光度；
13.(6)称取8g鳕鱼皮胶原蛋白肽粉末与2g的硫酸铜粉末，充分混合，固定反应时间10
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50min和ph7，控制温度分别为20℃
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80℃，反应结束后，在85℃后即得。
14.优选地，所述步骤(5)ph为8。
15.优选地，所述步骤(6)反应时间为30min。
16.本发明所述方法制备的鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合物，工艺方法简单，环境污染少，可获得良好的经济效益与社会效益，促进海洋水产品深加工产业的发展。
具体实施方式
17.实施例1。
18.一种鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合物的制备方法，包括以下步骤：
19.(1)称取一定量的鳕鱼皮胶原蛋白肽和硫酸铜，置于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，充分混合溶解，进行水浴加热；
20.(2)充分反应后，加适量无水乙醇，抽滤，滤渣于100℃水蒸气下烘干，用研钵研磨产物，过60目筛，称重；
21.(3)称取edta3.7224g，用热水溶解，稀释定容至500ml，放置24～48h后备用；
22.(4)将0.2gpan溶于乙醇，用乙醇稀释定容至100m；
23.(5)称取8g鳕鱼皮胶原蛋白肽粉末与2g的硫酸铜粉末，固定反应温度50℃，反应30min，控制ph712，设定每一个ph为一个反应控制单元，每个单元反应结束后，于最大吸收波长下测吸光度；
24.(6)称取8g鳕鱼皮胶原蛋白肽粉末与2g的硫酸铜粉末，充分混合，固定反应时间10
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50min和ph7，控制温度分别为20℃
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80℃，反应结束后，在85℃后即得；
25.(7)所述步骤(5)ph为8。
26.实施例2。
27.一种鳕鱼皮胶原蛋白肽铜螯合物的制备方法，包括以下步骤：
28.(1)称取一定量的鳕鱼皮胶原蛋白肽和硫酸铜，置于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，充分混合溶解，进行水浴加热；
29.(2)充分反应后，加适量无水乙醇，抽滤，滤渣于100℃水蒸气下烘干，用研钵研磨产物，过60目筛，称重；
30.(3)称取edta3.7224g，用热水溶解，稀释定容至500ml，放置24～48h后备用；
31.(4)将0.2gpan溶于乙醇，用乙醇稀释定容至100m；
32.(5)称取8g鳕鱼皮胶原蛋白肽粉末与2g的硫酸铜粉末，固定反应温度50℃，反应30min，控制ph712，设定每一个ph为一个反应控制单元，每个单元反应结束后，于最大吸收波长下测吸光度；
33.(6)称取8g鳕鱼皮胶原蛋白肽粉末与2g的硫酸铜粉末，充分混合，固定反应时间10
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50min和ph7，控制温度分别为20℃
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80℃，反应结束后，在85℃后即得；
34.(7)所述步骤(5)ph为8；
35.(8)所述步骤(6)反应时间为30min。