技术特征：
1.一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：包括以下步骤：（1）构建沉默表达载体
①ꢀ
获取粉虱基因靶标片段btggps1的pcr纯化产物；
②ꢀ
所述基因靶标片段btggps1的pcr纯化产物、2mdna1载体分别进行双酶切，获得含有bamhi和xbai两个粘性末端的靶标基因ggps1片段、2mdna1载体片段；
③
所述含有bamhi和xbai两个粘性末端的靶标基因ggps1片段与2mdna1载体片段连接，获得2mdna1-ggps1连接产物；
④ꢀ
所述2mdna1-ggps1连接产物热击转化克隆菌株大肠杆菌dh5α；热击处理后进行2mdna1特异性检测，获得2mdna1-ggps1重组沉默表达载体，浓度调整为30-40 ng/μl；
⑤ꢀ
所述2mdna1-ggps1重组沉默表达载体电击转化eha105农杆菌感受态细胞；获得含2mdna1-ggps1沉默表达载体的农杆菌；（2）所述含2mdna1-ggps1沉默表达载体的农杆菌按照农杆菌侵染法接种健康植株后，通过2mdna1特异性检测，获得携带2mdna1沉默载体的vigs植株；（3）在携带2mdna1沉默载体的vigs植株上饲养粉虱；获得具有2mdna1-ggps1沉默表达载体的粉虱，所述2mdna1-ggps1沉默表达载体的粉虱的类胡萝卜素合成基因ggps1表达被抑制、类胡萝卜素含量降低。2.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述类胡萝卜素合成基因沉默方法用于降低粉虱趋黄性，影响粉虱视觉。3.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述粉虱类胡萝卜素基因沉默体系适用于烟粉虱、温室白粉虱。4.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述粉虱基因靶标片段btggps1具有seq id no：1所示的核苷酸序列；所述粉虱基因靶标片段btggps1获取的方法为：以粉虱cdna为模板，用引入了bamhi和xbai两个内切酶酶切位点靶标基因片段引物，扩增目的基因有效片段；所述bamhi和xbai两个内切酶酶切位点靶标基因片段引物为p-ggps1-f和p-ggps1-r，所述p-ggps1-f具有seq id no：2所示的核苷酸序列，所述p-ggps1-r具有seq id no：3所示的核苷酸序列；所述靶标基因片段长度为100-1000 bp，测序验证后用promega公司的纯化试剂盒纯化，获得靶标片段ggps1的pcr纯化产物。5.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述靶标片段ggps1的pcr纯化产物、2mdna1载体双酶切均采用takara 公司的quickcut限制性内切酶试剂盒；反应条件均为：30℃，1hour；37℃，1hour；70℃，10min使酶失活。6.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述含有bamhi和xbai粘性末端的ggps1靶标基因片段和2mdna1载体片段连接采用t4 dna ligase试剂盒，把靶标基因ggps1片段：2mdna1载体片段体积比为2.5 μl：0.5 μl，混匀后4℃过夜连接，获得2mdna1-ggps1连接产物。7.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述2mdna1特异性检测的引物为dna1f和dna1r ，所述dna1f具有seq id no：4所示的核苷酸序列，所述dna1r具有seq id no：5所示的核苷酸序列。
8.根据权利要求1所述的一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，其特征是：所述步骤（3），所述粉虱为烟粉虱，所述vigs植株为vigs番茄植株；所述在携带2mdna1沉默载体的vigs植株上饲养粉虱的方法为：取羽化1d的烟粉虱，在vigs番茄植株上饲喂13 d，获得2mdna1
‑ꢀ
ggps1沉默表达载体的烟粉虱。
技术总结
本发明涉及一种粉虱类胡萝卜素合成基因沉默方法，包括以下步骤：（1）构建沉默表达载体，获得含2mDNA1-GGPS1沉默表达载体的农杆菌；（2）所述含2mDNA1-GGPS1沉默表达载体的农杆菌按照农杆菌侵染法接种健康植株后，通过2mDNA1特异性检测，获得携带2mDNA1沉默载体的VIGS植株；（3）在携带2mDNA1沉默载体的VIGS植株上饲养粉虱；获得具有2mDNA1-GGPS1沉默表达载体的粉虱，所述2mDNA1-GGPS1沉默表达载体的粉虱的类胡萝卜素合成基因GGPS1表达被抑制、类胡萝卜素含量降低；本方法用于干扰粉虱的视觉能力，达到粉虱防治的目的。达到粉虱防治的目的。达到粉虱防治的目的。
技术研发人员：黄艳贞 栾军波 卢月 王天玉
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：2021.11.09
技术公布日：2022/3/4