技术特征：
1.一种检测肠道病毒71型的引物和探针组合，其特征在于，所述检测肠道病毒71型的引物和探针组合包括：ev71上游引物，所述ev71型上游引物的核苷酸序列如seq id no：1所示；ev71下游引物，所述ev71型下游引物的核苷酸序列如seq id no：2所示；及，ev71探针，所述探针的核苷酸序列如seq id no：3所示。2.如权利要求1所述的检测肠道病毒71型的引物和探针组合，其特征在于，所述ev71探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有荧光淬灭基团。3.如权利要求2所述的检测肠道病毒71型的引物和探针组合，其特征在于，所述荧光基团选自fam、vic、rox或cy5中的任意一种；和/或，所述荧光淬灭基团选自bhq1或bhq2中的一种。4.如权利要求1所述的检测肠道病毒71型的引物和探针组合，其特征在于，所述检测肠道病毒71型的引物和探针组合还包括：内标上游引物，所述内标上游引物的核苷酸序列如seq id no：4所示；内标下游引物，所述内标下游引物的核苷酸序列如seq id no：5所示；及，内标探针，所述内标探针的核苷酸序列如seq id no：6所示。5.一种检测肠道病毒71型的试剂盒，其特征在于，所述检测肠道病毒71型的试剂盒包括ev71反应液、dna聚合酶及逆转录酶，其中，所述ev71反应液包括pcr反应缓冲液、dntps及如权利要求1～4所述的检测肠道病毒71型的引物和探针组合。6.如权利要求5所述的检测肠道病毒71型的试剂盒，其特征在于，所述检测肠道病毒71型的试剂盒还包括阴性对照品和阳性对照品。7.如权利要求5或6所述检测肠道病毒71型的试剂盒，其特征在于，所述ev71反应液中，所述pcr反应缓冲液的含量为2.5～5μl；和/或，所述ev71反应液中，所述dntps的浓度为0.1～0.5μm；和/或，所述ev71反应液中，所述ev71上游引物的浓度为0.1～1μm；和/或，所述ev71反应液中，所述ev71上游引物的浓度为0.1～1μm；和/或，所述ev71反应液中，所述ev71探针的浓度为0.1～1μm；和/或，所述dna聚合酶为taq酶；和/或，所述dna聚合酶的活性为0.5～2u；和/或，所述逆转录酶的活性为1～10u。8.如权利要求5所述的检测肠道病毒71型的试剂盒，其特征在于，所述检测肠道病毒71型的引物和探针组合还包括核苷酸序列如seq id no：4所示的内标上游引物，核苷酸序列如seq id no：5所示的内标下游引物及核苷酸序列如seq id no：6所示的内标探针；和/或，所述dntps包括datp、dutp、dgtp及dctp；和/或，所述检测肠道病毒71型的试剂盒还包括内标质粒。9.如权利要求8所述的检测肠道病毒71型的试剂盒，其特征在于，所述内标质粒包括果蝇靶序列；和/或，所述内标上游引物的浓度为0.1～1μm；和/或，所述内标下游引物的浓度为0.1～1μm；和/或，所述内标探针的浓度为0.1～1μm。
10.一种检测肠道病毒71型的方法，其特征在于，所述检测肠道病毒71型的方法包括以下步骤：获取待检测样品；将所述检测样品、阴性对照品及阳性对照品采用如权利要求6～9任一项所述的试剂盒进行pcr反应；根据pcr反应的扩增结果判定所述待检测样品的是否存在肠道病毒71型。
技术总结
本发明提供一种检测肠道病毒71型的引物和探针组合及其试剂盒，所述检测肠道病毒71型的引物和探针组合包括根据筛选出的高度保守序列设计的EV71上游引物，EV71下游引物，及EV71探针，所述探针的核苷酸序列如SEQID NO：3所示。本发明中，通过基于肠道病毒71型高度保守序列筛选出的引物与探针组合，和可能存在同源性序列、其他肠道病毒、其他病原体等无交叉反应，具有很好的特异性；同时，通过包含其的引物和探针组合的试剂盒检测肠道病毒71型，检测操作快速、方法简便、检测灵敏度高、检测范围宽，可以在较短的时间内对粪便等未知样本中的EV71RNA进行快速准确的检测，为诊断肠道病毒71型感染提供可靠的实验依据。71型感染提供可靠的实验依据。71型感染提供可靠的实验依据。
技术研发人员：薛丽丽 郑筱雯 陈明峰
受保护的技术使用者：深圳市国赛生物技术有限公司
技术研发日：2022.04.02
技术公布日：2022/6/28