技术特征：
1.一种hek293细胞瞬时表达转染用试剂，其特征在于，所述试剂包括穿膜肽dlr8与脂质体混合物，试剂中穿膜肽dlr8：脂质体的质量比为4～8.8:1。2.如权利要求1所述hek293细胞瞬时表达转染用试剂，其特征在于，所述穿膜肽dlr8的氨基酸序列如seq id no.1所示，其中第1、3、5位氨基酸为d-精氨酸。3.权利要求1所述hek293细胞瞬时表达转染用试剂的转染方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将穿膜肽dlr8、包含目的基因的质粒、脂质体分别与孵育buffer混合，孵育3～7min；然后，将穿膜肽dlr8孵育物与脂质体孵育物混合，再孵育8～12min获得转染试剂孵育物；将所述转染试剂孵育物与包含目的基因的质粒孵育物，混合，孵育8～12min，得转染复合物；(2)将所述转染复合物滴加到hek293细胞中，静置培养6～8h后更换培养基，再继续培养24～48h，完成细胞转染；(3)细胞转染处理24～72h后，将细胞接种于293细胞无血清培养基，进行悬浮培养。4.如权利要求3所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(1)中采用的孵育buffer为高糖dmem溶液。5.如权利要求4所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(1)转染复合物中包含目的基因的质粒的浓度为1.2～2.0μg/ml，脂质体的浓度为3～5μl/ml。6.如权利要求5所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(1)转染复合物中，穿膜肽dlr8与包含目的基因的质粒的质量比为1:2～4。7.如权利要求3所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(2)中滴加的转染复合物用量与细胞密度的比例为1.25～5ml：1～4
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105。8.如权利要求7所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(2)中更换所用培养基为含10％血清的高糖dmem完全培养基。9.如权利要求8所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(2)中静置培养的温度为37℃，co2的体积分数为3～7％。10.如权利要求3所述hek293细胞瞬时表达的转染方法，其特征在于，步骤(3)进行悬浮培养过程中，加入1～3mm的丁酸钠。
技术总结
本发明提供了一种HEK293细胞瞬时表达转染用试剂和瞬时表达系统转染方法，涉及基因工程技术领域，所述试剂包括穿膜肽DLR8与脂质体混合物，试剂中穿膜肽DLR8：脂质体的质量比为4～8.8:1。所述HEK293细胞瞬时表达转染用试剂和瞬时表达系统转染方法中，选择穿膜肽DLR8与脂质体混合物作为HEK293细胞瞬时表达的转染试剂，高糖DMEM培养基作为转染孵育Buffer，并在细胞转染处理后48h进行细胞悬浮，添加小分子添加剂丁酸钠，提高了HEK293细胞外源蛋白的表达水平，使得目的基因可高效表达。使得目的基因可高效表达。使得目的基因可高效表达。
技术研发人员：王天云 马凯 米春柳 张俊河 耿少军 耿少雷
受保护的技术使用者：北京同立海源生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.30
技术公布日：2022/8/30