利用rapd分子标记技术鉴定石榴芽变品种的方法
【专利说明】利用RAPD分子标记技术鉴定石摺芽变品种的方法
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技术领域： 本发明涉及分子生物技术领域，具体来说是利用RATO分子标记技术鉴定石恼芽变品 种的方法。
[000引【背景技术】： 品种鉴定是农业生产、作物育种和种子检验上的重要方法，也是保护作物品种、防止假 冒伪劣品种进入市场的重要手段。传统的果树品种检验方法有形态学鉴定与同工酶鉴定 等，但是，形态学鉴定所需周期长，耗费大量人力、物力和财力。石恼品种的纯正是石恼生产 的重要环节。在石恼生产中，各种品种混杂现象严重，同名异物、同物异名现象严重，常规鉴 定耗时较长，田间形态学鉴定难度较大，随着分子生物学技术的飞速发展，分子标记技术不 断成熟，给果树从品种基因组水平上的鉴定开辟了途径。
[000引
【发明内容】
： 为实现上述石恼品种鉴定中出现的问题，本发明的目的在于，利用RATO分子标记技术 鉴定石恼芽变品种的方法，该方法利用分子标记技术，在营养生长期实现石恼品鉴定，具有 周期短，成本低，结果可靠，节约人力、物力及±地资源，大大提高了品种鉴定的准确性。
[0004] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是：利用随机引物组，该RATO随机引 物组的序列如下： 表1S系列随机引物
【主权项】
1.利用RAro分子标记技术鉴定石榴芽变品种的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)提取各样品石槽种质DNA ; ⑵利用设计100条随机引物，扩增石榴的基因组DNA ; (3) 电泳检测每个样品的扩增条带； (4) 记录每个样品每条引物的DNA扩增带型； (5) 根据DNA扩增带型区分鉴定石榴品种； 所述的100条对随机RAH)引物序列如下：
其特征是，所述步骤（2)中PCR热循环参数为：94 °C预变性4 min ;94 °C变性I min， 37 °C退火I min，72 °C延伸2 min，循环40次；最后在72 °C延伸6 min。
2. 所述利用RAPD随机引物鉴定石榴品种的方法，其特征是，所述步骤（2)中PCR扩增 体系采用 25yL 反应体系：dNTP(10 mmol/L) 0.5yL，引物（10μπιο1/υ? yL，10XBuffer 2.5 yL，MgC12 (25 mmol/L) 2.5yL，TaqDNA 聚合酶（5.0 u/yL)l yL，模板 DNA (约 25 ng/ μ L) I μ L，剩余体积用ddH20来补齐。
3. 根据权利要求1所述利用RAH)随机引物鉴定石榴品种的方法，其特征是所述步骤 (5)结果判定时，如果两个品种在两个或两个以上RAH)标记位点具有不同条带，则判定为 不同品种。
【专利摘要】本发明涉及分子生物技术领域，具体来说是利用RAPD分子标记技术鉴定石榴芽变品种的方法；该RAPD随机引物组由100条引物组成；鉴定步骤包括（1）石榴叶片DNA提取；（2）PCR扩增；（3）电泳检测；（4）数据记录；（5）结果判定。本发明可以在实验室进行，根据RAPD位点的多态性，利用PCR扩增和电泳技术鉴定石榴品种，在时间上充分提高了试验效率，具有快速、准确、操作方便等优势，并且鉴定结果不易受环境影响。本发明可以用于对供试石榴品种与已知石榴品种进行品种鉴定，或构建石榴品种数据库。该方法为准确鉴定石榴种质资源，尤其是同物异名和同名异物现象奠定了基础，也为新品种保护奠定了基础。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104630340
【申请号】CN201410611611
【发明人】潘海发, 徐义流, 张金云, 高正辉, 束冰
【申请人】安徽省农业科学院园艺研究所
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2014年11月4日