体种子液以100mL/kg的比例接种至固态发酵培养基中，搅拌均匀， 浅盘遮盖（留有lcm的缝隙），50°C发酵5d。固态发酵培养基配方（W% )为小米99. 42%、 KN030. 1 %、K2HP040. 05 %、MgS04 ? 7H20 0.05%、NaCl0.05%、CaC030. 33 %，pH7. 2，小米按 I. 8mL/g的比例加水浸泡24h后121°C灭菌20min再与其它成分混合。
[0038] 3、灰略红链霉菌经摇瓶扩大培养、固态发酵5d后其有效活菌数达约0. 33亿/g， pH 6. 6,水分 14. 5%。
[0039] 4、收集灰略红链霉菌菌体及其发酵产物，用粉碎机粉碎成粉剂（不超过10s)，将 粉剂密封备用。
[0040] 实施例4腐熟菌剂的制备
[0041] 按照实施例1~3的制备方法中的步骤1的方法得到各菌体的营养种子液，将各 菌体的营养种子液按照一定比例接种到固态培养基中，按如下方法培养，分别得到粉剂A、 粉剂B、粉剂C。
[0042] 1、枯草芽孢杆菌，在固态培养基中30°C恒温发酵4d，收集其菌体及发酵产物，将 其粉碎制成粉剂A。
[0043] 2、长枝木霉，在固态培养基中30°C恒温发酵5d，收集其菌体及发酵产物，将其粉 碎制成粉剂B。
[0044] 3、灰略红链霉菌，在固态培养基中50°C恒温发酵3d，收集其菌体及发酵产物，将 其粉碎制成粉剂C。
[0045] 4、将上述粉剂A、B、C混合均匀，制备获得秸杆腐熟菌剂，在阴凉干燥处保存。该腐 熟菌剂由以下质量百分比组成：枯草芽孢杆菌粉剂5%，长枝木霉粉剂60%，灰略红链霉菌 粉剂35%。该腐熟菌剂有效活菌数达约30. 75亿/g，纤维素酶活为240U/g，pH 6. 48,水分 11%，细度 81%。
[0046] 实施例5本发明秸杆腐熟菌剂田间试验1
[0047] 1试验地点
[0048] 本实验的样品取自铜川耀州区董家河镇王家贬村当年收获的小麦秸杆，试验所 在农田为董家河镇王家贬村，农田指标状况为土壤容重1. 45g/cm3、全氮1. 12g/kg、有机质 II. 5g/kg、碱解氮 41mg/kg、有效磷 15.8mg/kg、速效钾 148mg/kg、pH 8. 1、水分 40%。
[0049] 2试验方法
[0050] 2. 1秸杆抗拉强度法
[0051] 设5组处理，包括未还田1组、还田未施用腐熟菌剂2组（20d、30d)、还田且施用腐 熟菌剂2组（20d、30d)，每组处理设5个重复。样品处理方法如下：选取粗细与长度接近的 小麦秸杆中下部，裁取节间秸杆10~15cm，用尼龙网袋分装，每袋50根，即为一个重复。
[0052] 2. 2秸杆失重率法
[0053] 试验设7组处理，包括未还田1组、还田未施用腐熟菌剂3组（10(1、20(1、30(1)、还田 且施用腐熟菌剂3组（10d、20d、30d)，每个处理设5个重复。样品处理方法如下：选取粗细 与长度接近的小麦秸杆，裁成3~5cm小段，用尼龙网袋分装，每袋10g，即为一个重复。
[0054] 将秸杆分散埋入距农田土表5~10cm的土层中，对于还田且施用腐熟菌剂组的秸 杆，利用含有〇. 5%腐熟菌剂和0. 5%尿素的水溶液进行喷洒；对于还田未使用腐熟菌剂组 的样品，利用含有0.5%尿素的水溶液进行喷洒，完成后用农田土进行覆盖，并做好标记。
[0055] 3取样检测
[0056] 对于秸杆抗拉强度法，在相应时间点，每组取出全部5个重复，从每个重复中随机 选取10根秸杆段，先用自来水轻柔冲洗秸杆段，直至滴下的水无色，即已将泥土等异物冲 洗干净，再用自来水浸泡4~5h，使其充分润湿。然后将秸杆段对折，用拉力计钩住并用力 向外拉使其断裂，记录每根秸杆断裂时拉力计上显示的拉力数值。秸杆断裂拉力下降率计 算方法如下：先计算未还田组平均拉力值队、还田未施用腐熟菌剂组N CK、还田且施用腐熟 菌剂组Nx，再计算还田未施用腐熟菌剂组秸杆断裂拉力下降率CCK= (N。一Nck)/NqX100%、 还田且施用腐熟菌剂组(^= (Nd-Nj/XXlOO%。对于还田样品，不同取样时间点的参数 分开计算，即NCK可分为N CK2°d、NCK3° d，Nx可分为N x2°d、Nx3° d〇
[0057] 对于秸杆失重率法，在相应时间点，每组取出全部5个重复，用自来水轻柔冲洗秸 杆段，直至滴下的水无色，即已将泥土等异物冲洗干净。然后将秸杆段置于烘箱中85°C烘干 6h，取出用天平称重。秸杆失重率计算方法如下：先计算未还田组平均干重值凡，还田未施 用腐熟菌剂组MCK、还田且施用腐熟菌剂组M x，再计算还田未施用腐熟菌剂组秸杆失重率WCK =(MQ-MCK)/MQX100%、还田且施用腐熟菌剂组％= (M。一Mx)/MQX100%。对于还田组， 进而可计算各组失重率平均值，包括W eK1(ld、W。/'以及未施用腐熟菌剂 组的平均失重率 WeKAVE= (W /3、施用腐熟菌剂组 WXAVE= (W x1(ld+Wx2°d+W x3°d) /3。
[0058] 4结果与分析
[0059] 4. 1施用稻杆腐熟菌剂对小麦稻杆抗拉强度的影响
[0060] 从表1可知，施用秸杆腐熟菌剂组20d后与未施用秸杆腐熟菌剂相比断裂拉力下 降率差值为19. 7 %，30d后下降率差值为23. 4 %，根据农业部微生物肥料和食用菌菌种质 量监督检验测试中心相关规定，对于还田样品，施用腐熟菌剂组与未施用腐熟菌剂组的秸 杆断裂拉力下降率差值大于10%，可判定所用腐熟菌剂具有腐熟效果。本发明的断裂拉力 下降率差值均大于农业部规定的数值，特别是秸杆腐熟后期，下降率差值更大，说明本发明 的秸杆腐熟菌剂能明显加速秸杆腐熟。
[0061] 表1小麦秸杆断裂拉力检测结果
[0062]
【主权项】
1. 一种秸杆腐熟菌剂，其特征在于由枯草芽孢杆菌粉剂、长枝木霉粉剂和灰略红链 霉菌粉剂复配组成，按质量百分比的组成为枯草芽孢杆菌粉剂5%~15%、长枝木霉粉剂 50 %~70 %、灰略红链霉菌粉剂25 %~45% ; 枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)三炬-07、长枝木霉（Trichoderma Iongibrachiatum)三炬-08 和灰略红链霉菌（Streptomyces griseorubens)三炬-09 均 已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号分别为 CGMCC No. 10248、CGMCC No. 10144、CGMCC No. 10247。
2. 如权利要求1所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于其具体步骤如下： 通过固态发酵法分别制备枯草芽孢杆菌、长枝木霉、灰略红链霉菌的发酵菌体及其产 物，干燥后粉碎成枯草芽孢杆菌粉剂、长枝木霉粉剂和灰略红链霉菌粉剂，混合后即得秸杆 腐熟菌剂。
3. 如权利要求2所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于通过固态发酵法制备 枯草芽孢杆菌的发酵菌体及其产物所采用的液体种子培养基的组成为：葡萄糖20.0 g/L、 蛋白胨16. 7g/L、NaCl 5. 3g/L、牛肉膏5. 3g/L，pH 7. 0 ;固态培养基按质量百分比的组成为 麸皮 93. 97 %、豆柏粉 4. 94%、MgSO4 · 7H20 0· 05 %、NH4SO40.0 5 %、CaCO3O. 99 %，加入培养 料总质量50%的水后混匀121°C灭菌lh。
4. 如权利要求2所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于通过固态发酵法制 备长枝木霉的发酵菌体及其产物所采用的液体种子培养基的组成为：马铃薯葡萄糖培养基 粉剂33. 3g/L，pH自然；固态培养基按质量百分比的组成为麸皮93. 97%、豆柏粉4. 94%、 MgSO4 ·7Η20 0· 05%、NH4S040 . 05%、CaC030 . 99%，加入培养料总质量 50%的水后混匀 121°C 灭菌lh〇
5. 如权利要求2所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于通过固态发酵法制 备灰略红链霉菌的发酵菌体及其产物所采用的液体种子培养基的组成为：小米20.0 g/ L、KNO3L 0g/L、K2HPO4O. 5g/L、MgSO4 · 7H20 0· 5g/L、NaCl 0· 5g/L，pH 7. 2 ;固态培养基按 质量百分比的组成为小米 99. 42%、KNO3O. 1%、K2HPO40.0 5%、MgSO4 · 7H20 (λ 05%、NaCl 0· 05%、CaCO3O. 33%，pH为L 2,小米按L 8mL/g的比例加水浸泡24h后121°C灭菌20min 再与其它成分混合。
6. 如权利要求2所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于所述固态发酵的条件 及其要求如下： 枯草芽孢杆菌液体种子以lOOmL/kg的比例接种至固态培养基中，于30°C恒温发酵4~ 8d，发酵结束时发酵物水分< 21 %，有效活菌数为多50亿/g。
7. 如权利要求2所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于所述固态发酵的条件 及其要求如下： 长枝木霉液体种子以lOOmL/kg的比例接种至固态培养基中，于30°C恒温发酵4~9d， 发酵结束时发酵物水分< 20 %，有效活菌数为多1. 5亿/g。
8. 如权利要求2所述一种秸杆腐熟菌剂的制备方法，其特征在于所述固态发酵的条件 及其要求如下： 灰略红链霉菌液体种子以lOOmL/kg的比例接种至固态培养基中，于50°C发酵2~5d， 发酵结束时发酵物水分< 15 %，有效活菌数为多0. 2亿/g。
9.如权利要求1所述秸杆腐熟菌剂在制备秸杆腐熟降解剂中应用。
【专利摘要】一种秸秆腐熟菌剂及其制备方法和应用，涉及腐熟菌剂。所述秸秆腐熟菌剂由枯草芽孢杆菌粉剂、长枝木霉粉剂和灰略红链霉菌粉剂复配组成，枯草芽孢杆菌粉剂5％～15％、长枝木霉粉剂50％～70％、灰略红链霉菌粉剂25％～45％。通过固态发酵法分别制备枯草芽孢杆菌、长枝木霉、灰略红链霉菌的发酵菌体及其产物，干燥后粉碎成枯草芽孢杆菌粉剂、长枝木霉粉剂和灰略红链霉菌粉剂，混合后即得秸秆腐熟菌剂。所述秸秆腐熟菌剂可在制备秸秆腐熟降解剂中应用。CGMCC No.1024820141229 CGMCC No.1014420141229 CGMCC No.1024720141229
【IPC分类】C05F11-08, C12N1-14, C12N1-20, C12R1-125, C12R1-885, C12R1-465
【公开号】CN104651277
【申请号】CN201510067182
【发明人】余劲聪, 林克明
【申请人】福建三炬生物科技股份有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月9日