浓度为2500mg/l;然后从^号试管取4毫升A2碘伏液加到A3号试管，其有效碘的浓 度为1250mg/l;-次操作至A1(l号试管，依此类推八4号试管有效碘的浓度为625mg/l45号 试管有效碘的浓度为312. 5mg/l;八6号试管有效碘的浓度为156. 25mg/l;A7号试管有效碘 的浓度为78. 13mg/l;A8号试管有效碘的浓度约为39. 06mg/l;A9号试管有效碘的浓度约为 19. 53mg/l;A1(I号试管有效碘的浓度为9. 77mg/l;An号试管不加消毒液，只是4毫升蒸馏水 作为阳性对照；
[0046] 各浓度溶葡萄球菌酶的制备：取9个无菌试管分别编号ai~a9，用注射器把编号 a2~a9的试管各加入4毫升蒸馏水，取4毫升溶葡萄球菌酶原液加入a:号试管中，所述葡 萄球菌酶原液中溶葡萄球菌酶的浓度为1000U/L;再取4毫升所述溶葡萄球菌酶原液加入 a2号试管混匀得到a2溶葡萄球菌酶溶液，其浓度为500U/L;然后取4毫升所述a2溶葡萄球 菌酶溶液加到a3号试管中得到a3溶葡萄球菌酶溶液，其溶葡萄球菌酶的浓度为250U/L;依 次操作至a8号试管，依此类推a4号试管溶葡萄球菌酶的浓度为125U/L;a5号试管溶葡萄球 菌酶的浓度为62. 50U/L仿6号试管溶葡萄球菌酶的浓度为31. 25U/L;a7号试管溶葡萄球菌 酶浓度为15. 63U/L;a8号试管溶葡萄球菌酶的浓度，为7. 80U/L;a9号试管只加入4毫升 蒸馏水不含消毒液作为阳性对照；
[0047] 各浓度含氯消毒液的制备：取11个无菌试管并编号&~Bn，首先制备有效氯 为5000.Omg/1作为原液，用注射器把B2~Bn的试管各加入4毫升蒸馏水，取4毫升浓度 为5000.Omg/1有效氯原液加入81号试管中，有效氯的浓度为5000mg/l;再取4毫升加入 B2号试管混匀得到B2含氯消毒液，其有效氯的浓度为2500mg/l;然后取4毫升所述B2含 氯消毒液加到所述B3号试管混匀的到B3含氯消毒液，其有效氯的浓度为1250mg/l;依次 操作至B1(l号试管，依此类推B4号试管中有效氯的浓度为625mg/l;B5号试管中有效氯的 浓度为312. 5mg/l;B6号试管中有效氯的浓度为156. 25mg/l;B7号试管中有效氯的浓度为 78. 13mg/l;B8号试管中有效氯的浓度为39. 06mg/l;B9号试管中有效氯的浓度为19. 53mg/ 1 ;B1(I号试管中有效氯的浓度为9.77mg/l;11号试管只加入4毫升蒸馏水，不含消毒液作为 阳性对照；
[0048] 以所述制备好的含干扰剂的金黄色葡萄球菌的菌悬液为原代，取样接种所需培养 基斜面，然后分别同所述配置好的各浓度碘伏、含氯消毒剂及溶葡萄球菌复合酶作用，所述 碘伏的作用时间为〇. 5min，所述含氯消毒剂的作用时间为5min，所述溶葡萄球菌复合酶的 作用时间为6min;然后立刻转入含有相应的中和剂的肉汤管中中和10分钟，中和后转种计 数平皿，再从各自的计数平皿上取亚致死量的金黄色葡萄球菌，重复上述步骤至20代，比 较所述20代亚致死量金黄色葡萄球菌的抗药性得到所述亚致死量金黄色葡萄球菌对消毒 剂的抗药性变化。
[0049] 在测定所述亚致死量金黄色葡萄球菌对消毒剂的抗药性变化的同时，采用K-B纸 片试验法，分别连续观察记录所述三种消毒液的亚致死量1-20代的金黄色葡萄细菌对抗 生素药敏的变化，所述抗生素为以下几种之一：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素、利福 平、左氧氟沙星、头孢西丁、SMZ-CO;
[0050] 分别用无菌棉签蘸取所述1-20代亚致死量的金黄色葡萄球菌的菌悬液，在试管 内壁液面上方旋转紧压，将多余的菌液挤去，然后在每个M-H培养基平板琼脂表面上均匀 涂抹接种3次，每次旋转平板60°C，以确保接种菌的均匀分布，最后沿着平板内缘涂抹一 周，干燥5分钟；然后在平板上贴放选取的直径5_抗菌药物纸片，使其紧贴平板表面，每个 平皿贴4张，盖好平皿，置于35-37°C培养18-20h，用游标卡尺量取抑菌圈，记录每次药敏结 果，结果判定根据临床微生物标准化操作；连续做20代试验；
[0051] (3)敏感性恢复实验：选取经消毒剂亚致死量筛选的第20代金黄色葡萄球菌作 为原代菌，用接种环蘸取典型的菌落，接种到血液增菌肉汤管中培养24h为一代；用所述接 种环蘸取培养好的血液增菌肉汤菌悬液，接种到分离平皿中，置于35°C-37°C培养18-24h; 用所述接种环蘸取所述分离平皿中的典型菌落接种到营养琼脂斜面上，35°C-37°C培养 18-24h得到菌苔；质量分数为3%的磷酸盐缓冲液洗下菌苔，振荡均匀并经无菌脱脂棉过 滤制备成所述血液增菌肉汤菌悬液；按照所述步骤（3)进行药物敏感试验，记录每次药敏 结果，连续重复传代从第20代到第40代；
[0052] 所述增菌肉汤管中含有血液增菌肉汤，其组分为：蛋白胨10.Og/L;牛肉浸出粉 3.Og/L;氯化钠5.Og/L;葡萄糖1.Og/L;枸橡酸钠3.Og/L;磷酸氢二钾2gg/L;对氨基 苯甲酸0.05g/L;硫酸镁2.4g/L;酚红0.024g/L;其余为蒸馏水；血液增菌肉汤pH值为 7. 4±0. 1 ;经121°C灭菌15min和35°C24h无菌试验备用。
[0053] (4)根据所述步骤（2)、（3)和（4)的测定结果，找出所述亚致死量金黄色葡萄球 菌对所述消毒剂的抗药性及其对所述抗生素的耐药性的变化规律及联系。
[0054] 本实施例测得的结果如下：
[0055] 消毒剂对不同传代细菌杀灭效果变化：
[0056] 经对原代至20代金黄色葡萄球菌杀灭效果观察显示，有效碘浓度在39. 06mg/L~ 9. 77mg/L范围内，均作用0? 5min;有效氯在19. 53mg/L~9. 77mg/L范围内，均作用5min; 对不同传代数的金黄色葡萄球菌杀灭率虽有波动，但没有降低趋势，具体结果见表1。
[0057] 表1两种化学消毒剂对不同传代数金黄色葡萄球菌杀灭效果
[0058]
[0059]
【主权项】
1. 一种同时测定亚致死量金黄色葡萄球菌抗药性和耐药性的方法，其特征在于，包括 如下步骤： (1) 制备含干扰剂的金黄色葡萄球菌的菌悬液； (2) 配制不同种类不同浓度的消毒剂对所述含干扰剂的金黄色葡萄球菌的菌悬液进行 杀菌试验并测定每一代亚致死量金黄色葡萄球菌的抗药性；同时测定所述每一代亚致死量 金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性；连续做20代； (3) 敏感性恢复实验：选取经消毒剂亚致死量筛选的第20代金黄色葡萄球菌作为原代 菌，接种到血液增菌肉汤管中培养并制备成血液增菌肉汤菌悬液，将所述血液增菌肉汤菌 悬液进行药物敏感试验；重复上述步骤至第40代。 (4) 根据所述步骤（2)、（3)和（4)的测定结果，找出所述亚致死量金黄色葡萄球菌对 所述消毒剂的抗药性及其对所述抗生素的耐药性的变化规律及联系。
2. 根据权利要求1所述同时测定亚致死量金黄色葡萄球菌抗药性和耐药性的方法，其 特征在于，所述步骤（1)具体包括如下步骤： 将所述金黄色葡萄球菌经过增菌培养和分离培养，经分离培养后将所述金黄色葡萄球 菌分成单个细菌，并使其独立分裂繁殖形成单独菌落；用接种针挑取所述分离培养得到的 典型菌落接种到营养琼脂斜面，在35-37?条件下培养24h形成菌苔；用质量分数为3%磷 酸盐缓冲液洗下所述菌苔，经振荡均匀并经无菌脱脂棉过滤后得到滤液，用无菌水稀释所 述滤液制备成浓度为〇. 5麦氏标准的菌悬液；将所述菌悬液与干扰剂溶液做对倍稀释配成 IOml的浓度为7. 5 X 107cfu/ml含有干扰剂的菌悬液备用，所述干扰剂溶液时由