[0031] (2)将含有待检测药物的培养基，加入步骤（1)中感染后的肺切片样本，得到药物 作用的肺切片样本；
[0032] (3)将步骤⑵中药物作用的肺切片样本培养48小时后，检测培养基上清中神经 氨酸酶活性和IP-?ο水平，以确定药物的体外抗病毒或抗炎效果；
[0033] (4)将步骤（3)检测得到的体外抗病毒或抗炎效果与药物的体内已知效果相比 较，结果显示两者之间的一致性，故证实该筛选模型可行。
[0034] 按照本发明的另一方面，还提供了一种抗流感病毒或抗炎药物的筛选模型，其具 体步骤包括：
[0035] (1)用流感病毒感染肺切片样本，1小时~4小时后弃去病毒液并用磷酸缓冲液冲 洗2次~4次，得到感染后的肺切片样本；
[0036] (2)将含有待检测药物的培养基，加入步骤（1)中感染后的肺切片样本，得到药物 作用的肺切片样本；
[0037] (3)将步骤⑵中加入培养基的肺切片培养12小时~120小时后，通过检测培养 基上清中病毒滴度以及相关炎症因子的变化水平，以确定药物的抗病毒或抗炎效果。
[0038] 优选地，步骤（3)中所述炎症因子包括：MIP-3a、RANTES或ΙΡ-10。
[0039] 总体而言，本发明与现有技术相比，具有以下优点：
[0040] 1、选择了肺切片样本作为筛选模型，比细胞模型更接近机体的真实的生理和病理 状况的特点，而同时比动物模型更加节省动物和药物的使用量；
[0041] 2、通过对肺块部分的选择和切片厚度的筛选，在保证实验效果的前提下节省了实 验材料；
[0042] 3、通过与体内病毒炎症因子的相关性，选择了适当的炎症因子作为评价指标，提 供了一种抗炎症药物评价的有效途径。
【附图说明】
[0043] 图1为流感病毒感染不同厚度肺切片样本后，肺切片上清中的病毒滴度值对比。
[0044] 图2为流感病毒感染肺切片12小时~120小时后，肺切片上清中的病毒滴度变 化。
[0045] 图3为实施例3中2' -(4-甲基伞形酮）-a -D-乙酰神经氨酸作用于病毒上清液 后，通过荧光特征的变化表现出神经氨酸酶的活性变化。
[0046] 图4为实施例4中HlNl病毒（PR8)感染活体小鼠后，肺洗液中不同炎症因子变化 水平。
[0047] 图5为实施例4中HlNl病毒（PR8)感染肺切片后24小时和48小时，切片上清中 的炎症因子含量的变化水平。
[0048] 图6为实施例4中不同炎症因子在肺切片上以及在体内的相关性分析。
【具体实施方式】
[0049] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对 本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并 不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要 彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0050] 实验材料
[0051] 试剂
[0052] 15-去氧-Λ - (12, 14)前列腺素 J2和利巴韦林购自Sigma-Aldrich ;表没食子 儿茶素没食子酸酯，吉吗酮购自四川省维克奇生物科技有限公司；Ρ38抑制剂SB203580、 ERK抑制剂U0126购自上海碧云天生物科技有限公司；奥司他韦（GS 4071)购自Toronto Research Chemicals, Canada ;盐酸双环胺（dicyclomine hydrochloride)购自 Sigma 试 剂公司；非诺贝特（fenofibrate)，克霉挫（clotrimazole)、盐酸节达明（benzydamine hydrochloride)购自上海金穗生物科技有限公司；普罗地芬（proadifen)、草酸萘呋胺 (nafronyl oxalate)购自北京百灵威科技有限公司。所有药品都溶解在二甲基亚砜（DMS0， Sigma-Aldrich)中。IP-10 检测用 Duoset ELISA 试剂盒（R&D) ;DMEM/F12 培养基购自 GIBCO 公司；抗核壳蛋白（NP)抗体购自santa cruz公司；TRITC焚光标记的兔抗小鼠 IgG购自武 汉飞羿科技有限公司；低熔点琼脂糖购自Bio-Rad ;2' - (4-甲基伞形酮）_ a -D-乙酰神经 氨酸（MUNANA)购自 Sigma。
[0053] 动物和病毒
[0054] 20g左右体重的BALB/c小鼠购自湖南省长沙市长沙实验动物中心；HlNl流感毒株 A/PuertoRico/8/34(PR8)和 H3N2 流感毒株 A/Human/Hubei/3/2005(Hubei)冻存于-80°C 冰箱。
[0055] 仪器设备
[0056] 眼科剪，眼科镊，18号注射器针头，2. 5mL注射器，缝合线，脱脂棉。
[0057] 震荡切片机（莱卡公司VT 1200S) ;Perkin Elmer Wallac Envision多标记读板 机读板；双光子共聚焦显微镜（尼康公司AlMP+)。
[0058] 实施例1肺切片的制备
[0059] (1)小鼠经腹腔注射戊巴比妥（75mg/kg)麻醉后，腹腔主动脉放血处死。腹部皮肤 用酒精棉球擦拭消毒。暴露气管后，用眼科镊分离气管，并用眼科剪在气管处（离心端）做 "V"型切口。在"V"型切口处插入18号打磨过的注射器针头，并用缝合线固定。然后在肺 部充盈I. 3ml的提前预热至37°C的低熔点凝胶。
[0060] (2)整只小鼠放置在冰上10分钟，以使胶初步凝固。胶凝固后剪断气管，小心取出 心脏和整个肺脏，放入预冷的DMEM/F12培养基中，4°C放置15分钟，使胶完全凝固。分离肺 脏，选用左肺叶。用眼科剪在肺脏的支气管尾部一端做一个横切面，然后在距该切面0. 8cm 处肺脏的另一端做另一个横切面，取得厚度为0. 8cm的肺块备用。
[0061] (3)将步骤⑵制备所得的肺块固定在莱卡切片机的标本盘上，放入预冷的DMEM/ F12培养基，设定切片厚度为125 μ m制作肺切片。将肺切片于48孔板中进行培养，每孔一 片肺切片。每小时更换DMEM/F12培养基一次，至少三次，去除切片过程导致的细胞碎片。即 得到厚度为125 μ m的肺切片，标记为样本1。
[0062] (4)以不同的厚度计重复步骤（3)分别制备得厚度为250 μπι、500 μπι以及 1000 μ m的肺切片，分别标记为样本2、样本3和样本4。
[0063] 实施例2肺切片的厚度优选
[0064] (1)用IO5PFUAiI的HlNl病毒感染实施例1制备所得的肺切片样本1、样本2、样 本3和样本4。感染2小时后，弃病毒液，磷酸缓冲液洗两次后，添加新鲜培养液。
[0065] (2)48小时后采集上清。采用组织半数感染量（TCID5tl)检测切片上清中的病毒 滴度，病毒滴度的计算米用 Reed - Muench 方法（Reed, L. J.，Muench, H.，1938. American Journal of Epidemiology 27,493-497·)。结果如图1所示，可以看出，样本1-4中的 log1(lTCID50值分别为2. 375、3. 25、3. 5和3,其中样本2上清的病毒粒子比样本1的肺切片 上清中的病毒粒子多了 7. 5倍，但与样本3和样本4差别并不明显。而样本2-样本4中， 样本2的厚度最小，可以从每只鼠上获得更多切片，更加节省实验材料。
[0066] 实施例3神经氨酸酶（NA)活性与病毒活性相关性评价
[0067] (1)用105PFU/ml的HlNl病毒或者H3N2病毒感染实施例1制备所得的肺切片样 本2。感染2小时后，弃病毒液，磷酸缓冲液洗两次后，添加新鲜培养液。
[0068] (2)在12小时、24小时、48小时、72小时、96小时以及120小时后分别采集肺切片 样本上清液。
[0069] (3)采用组织半数感染量（TCID50)检测步骤（2)采集所得上清中的病毒滴度，病 毒滴度的计算采用Reed - Muench方法。结果如图2a、2