，即可获得低黏度车前子多糖。
[0018]实施例3。
[0019]将车前子置于80%的乙醇中浸泡24 h，过滤收集车前子，置于干燥箱中调节温度50°C，烘干、除杂。称取100 g上述车前子多糖，采用沸水法提取车前子多糖，提取温度为100C,料液质量体积比(g/mL)为1:10，提取2次，每次提取时间3 h。将提取液以转速4800r/min、时间10 min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4°C下冷藏过夜，然后以转速4800 r/min、时间10 min条件离心收集沉淀。沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，然后将配制的多糖溶液放入-80°C冰箱中冷冻，8 h后取出冷冻的多糖再置于50°C水浴条件下溶解，溶解完全后用离心机转速8000 r/min、温度10°C、时间35 min条件下离心，上清溶液重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次。将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72 ho透析结束后，将透析液浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。称取90 mg上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为5:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1，酶的作用时间为6 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应，每半小时搅拌一次，反应结束后转移至95°C水浴条件下作用20 min。将上述所得溶液进行透析，透析液经过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。
[0020]实施例4。
[0021]将车前子置于80%的乙醇中浸泡24 h，过滤收集车前子，置于干燥箱中调节温度50°C，烘干、除杂。称取100 g上述车前子多糖，采用沸水法提取车前子多糖，提取温度为100C,料液质量体积比(g/mL)为1:10，提取2次，每次提取时间3 h。将提取液以转速4800r/min、时间10 min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4°C下冷藏过夜，然后以转速4800 r/min、时间10 min条件离心收集沉淀。沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，然后将配制的多糖溶液放入-80°C冰箱中冷冻，8 h后取出冷冻的多糖再置于50°C水浴条件下溶解，溶解完全后用离心机转速8000 r/min、温度10°C、时间35 min条件下离心，上清溶液重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次。将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72 ho透析结束后，将透析液浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。称取90 mg上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为3:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1，酶的作用时间为2 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应，每半小时搅拌一次，反应结束后转移至95°C水浴条件下作用20 min。将上述所得溶液进行透析，透析液经过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。
[0022]实施例5。
[0023]将车前子置于80%的乙醇中浸泡24 h，过滤收集车前子，置于干燥箱中调节温度50°C，烘干、除杂。称取100 g上述车前子多糖，采用沸水法提取车前子多糖，提取温度为100C,料液质量体积比(g/mL)为1:10，提取2次，每次提取时间3 h。将提取液以转速4800r/min、时间10 min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4°C下冷藏过夜，然后以转速4800 r/min、时间10 min条件离心收集沉淀。沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，然后将配制的多糖溶液放入-80°C冰箱中冷冻，8 h后取出冷冻的多糖再置于50°C水浴条件下溶解，溶解完全后用离心机转速8000 r/min、温度10°C、时间35 min条件下离心，上清溶液重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次。将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72 ho透析结束后，将透析液浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。称取90 mg上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为3:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1，酶的作用时间为24 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应，每半小时搅拌一次，反应结束后转移至95°C水浴条件下作用20 min。将上述所得溶液进行透析，透析液经过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。
【主权项】
1.一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法，其特征是按以下步骤: (1)将车前子干燥、除杂； (2)采用沸水法提取车前子多糖； (3)车前子多糖纯化； (4)称取一定量的上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1-0.5，酶的作用时间为2~24 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应；将反应后所得溶液进行透析，透析结束后再通过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。2.根据权利要求1所述的酶法制备低黏度车前子多糖的方法，其特征是步骤(4)所述的阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1-0.3，多糖与水溶液质量体积比(mg/mL)为2:1~4:1，酶的作用时间为4~12 ho
【专利摘要】一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法，按以下步骤：（1）将车前子干燥、除杂；（2）采用沸水法提取车前子多糖；（3）车前子多糖纯化；（4）称取一定量的上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比（mg/mL）为1:1~5:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比（U/mg）为0.1~0.5，酶的作用时间为2~24h；再将上述多糖、酶混合体系置于40℃水浴中反应；将反应后所得溶液进行透析，透析结束后再通过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。本发明的优点是：采用温和的条件制备低黏性车前子多糖；酶法处理前后的多糖基本结构特征无明显变化。
【IPC分类】C08B37/00
【公开号】CN105037571
【申请号】CN201510384577
【发明人】聂少平, 殷军艺, 蔡思佳, 施晓丹
【申请人】南昌大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月30日