一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明属天然产物制备领域。
【背景技术】
[0002]车前子为车前科植物车前Plantago asiatica L.或平车前Plantago derpressaWilld.的干燥成熟种子，夏、秋二季种子成熟时采收果穗，搓出种子、除去杂质获得，现被我国食品药品监督管理局列为可用于保健食品的物品。车前子种皮中富含黏性多糖，具有通便、阻止有害物质扩散、有益肠道健康等功能，因此在国内外广泛使用。
[0003]车前子多糖是一种黏度很高的多糖，富含阿拉伯木聚糖，一定条件下可以形成弱凝胶。但是由于车前子多糖的高黏性特征，使得其在提取、纯化及后续生产过程中遇到诸多不方便，降低其黏度将大大方便其基础研究和产品开发应用。研究表明车前子多糖中存在一定量的阿魏酸，且阿魏酸对于车前子多糖的高黏性可能有很大作用。因此试图通过加入阿魏酸酯酶作用于车前子多糖，获得较低黏度的车前子多糖。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的。
[0006]本发明按以下步骤。
[0007](I)干燥、除杂:将车前子置于80%的乙醇中浸泡24 h以上，过滤收集车前子，将其置于干燥箱中调节温度40~55°C，烘干、除杂。
[0008](2)采用沸水法提取车前子多糖:提取温度为100°C，料液质量体积比(g/mL)为1:10，提取2次，每次提取时间为3 h ;将提取液以转速4800 r/min、时间10 min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4°C下冷藏过夜；转速4800 r/min、时间10 min离心收集沉淀；沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。
[0009](3)多糖纯化:将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，将配制的多糖溶液放入-80°C冰箱中冷冻，8 h后取出冷冻的多糖再置于50°C水浴下溶解，溶解完全后用离心机转速8000 r/min、温度10°C、时间35 min条件下离心，上清溶液再重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次；将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72 ho透析结束后，将透析液取出再经浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。
[0010](4)低粘度车前子多糖制备:称取一定量的上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为1:1~5:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1-0.5，酶的作用时间为2~24 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应。将反应后所得溶液进行透析，透析结束后再通过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。
[0011]本发明步骤(4)所述的阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)优选为0.1-0.3，多糖与水溶液质量体积比(mg/mL)优选为2:1~4:1，酶的作用时间优选为4~12 h。
[0012]本发明的优点是:1、采用温和的条件制备低黏性车前子多糖；2、酶法处理前后的多糖基本结构特征无明显变化。
【具体实施方式】
[0013]下面通过实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0014]实施例1。
[0015]将车前子置于80%的乙醇中浸泡24 h，过滤收集车前子，置于干燥箱中调节温度50°C，烘干、除杂。称取100 g上述车前子多糖，采用沸水法提取车前子多糖，提取温度为100C,料液质量体积比(g/mL)为1:10，提取2次，每次提取时间3 h。将提取液以转速4800r/min、时间10 min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4°C下冷藏过夜，然后以转速4800 r/min、时间10 min条件离心收集沉淀。沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，然后将配制的多糖溶液放入-80°C冰箱中冷冻，8 h后取出冷冻的多糖再置于50°C水浴条件下溶解，溶解完全后用离心机转速8000 r/min、温度10°C、时间35 min条件下离心，上清溶液重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次。将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72 ho透析结束后，将透析液浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。称取90 mg上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为3:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.5，酶的作用时间为6 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应，每半小时搅拌一次，反应结束后转移至95°C水浴条件下作用20 min。将上述所得溶液进行透析，透析液经过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。
[0016]实施例2。
[0017]将车前子置于80%的乙醇中浸泡24 h，过滤收集车前子，置于干燥箱中调节温度50°C，烘干、除杂。称取100 g上述车前子多糖，采用沸水法提取车前子多糖，提取温度为100C,料液质量体积比(g/mL)为1:10，提取2次，每次提取时间3 h。将提取液以转速4800r/min、时间10 min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4°C下冷藏过夜，然后以转速4800 r/min、时间10 min条件离心收集沉淀。沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，然后将配制的多糖溶液放入-80°C冰箱中冷冻，8 h后取出冷冻的多糖再置于50°C水浴条件下溶解，溶解完全后用离心机转速8000 r/min、温度10°C、时间35 min条件下离心，上清溶液重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次。将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72 ho透析结束后，将透析液浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。称取90 mg上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比(mg/mL)为1:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比(U/mg)为0.1，酶的作用时间为6 h ;再将上述多糖、酶混合体系置于40°C水浴中反应，每半小时搅拌一次，反应结束后转移至95°C水浴条件下作用20 min。将上述所得溶液进行透析，透析液经过浓缩、冷冻干燥