肌醇六磷酸酶制剂的制作方法_3

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何 要求本申请优先权的申请中任何权利要求的范围内,应当根据有效数字的数目和普通四舍 五入方法解释每个数值参数。另外,本申请公开的数值范围是包含性的并且公开了范围内 的所有数字。例如从4. 5至5. 5的pH范围包括4. 5、4. 6、4. 7、4. 8、4. 9、5. 0、5. 1、5. 2、5. 3、 5. 4和5. 5的pH。
[0060] 以上描述公开了本发明的几种方法和材料。本发明易于就方法和材料进行修改, 并且易于就制造方法和设备进行改变。从对本公开内容的思考或本文公开的发明的实践, 这些改变对于本领域技术人员而言将变得明显。因此,不意欲将本发明限于本文公开的具 体的实施方式,而是其覆盖本发明的真实范围和精神内的所有修改和改变。
[0061] 本文所引用的所有参考文献,包括但不限于出版的和未出版的申请、专利和文献 资料参考,通过引用以其整体并入本文并且因此构成本说明书的一部分。关于通过引用并 入的出版物和专利或专利申请与本说明书包含的公开内容相矛盾的情况,本说明书意欲取 代和/或优先于任何这种相矛盾的材料。 实施例
[0062] 实施例1 (非颗粒状的肌醇六磷酸酶的比较实施例)
[0063] 制剂1 一一通过冻干法干燥含有10 %氯化钠和10 %山梨醇的液体浓缩物肌醇六 磷酸酶制剂。然后通过与碳酸钙和和稻壳混合稀释干燥的酶粉末以形成稻壳酶产品。
[0064] 制剂2-一在稻壳上浸渍含有10 %氯化钠和10%山梨醇的液体浓缩物肌醇六磷 酸酶制剂。通过冻干法干燥所得的湿润掺合物。通过与碳酸钙混合稀释干燥的物质以形成 稻壳酶产品。
[0065] 制粒试验 将稻壳酶广品与25-100ppm浓度的家禽伺料衆惨合,并且在加利福 尼亚颗粒研磨机中在75°C至93°C范围内的多种控制温度下制粒。浆混合物首先在所述温 度下经受直接蒸汽15秒,并且然后通过压制机(pelletingpress)制粒。随后干燥颗粒。
[0066] 酶稳定性确定 在Tris缓冲液中提取起始衆和完成的颗粒(其被礙磨成衆)。 通过改进的AOAC方法测定提取物中肌醇六磷酸酶活性。改进的AOAC方法是包括蒸馏水加 上0.01%吐温20(GIZZI,J.的AOACInternational,Vol. 91,No. 2, 2008)的AOAC缓冲液 并且改进为包括:50mMTrispH8. 0、0? 01%吐温20、IOmMCaCl2的组合物。
[0067] 将颗粒化产品在每个温度下的酶活性的百分恢复率与起始浆的酶活性百分恢复 率进行比较。表4中显示了结果。
[0068] 表4 :在不同条件温度下制粒后家禽饲料中剩余的肌醇六磷酸酶活性(% )
[0069]
[0070] 结果显示,从颗粒化饲料中提取的肌醇六磷酸酶活性低于高温条件下制剂1和制 剂2二者的肌醇六磷酸酶活性。
[0071] 实施例2
[0072] 制剂3--将250g稻壳装填到GEAAeromatic-FielderStrea-I流化床造粒机 中;通过顶喷式双流体喷嘴将50ml含有10%山梨醇和10%氯化钠的液体浓缩物肌醇六磷 酸酶制剂喷雾在稻壳上。使用以下流化床设定:55°C入口空气温度、5ml/min喷雾速率、1巴 雾化压力、0.8mm喷嘴。在酶喷雾之后干燥稻壳酶产品。
[0073] 制剂4--将200g稻壳装填到GEAAeromatic-FielderStrea-I流化床造粒机 中;通过顶喷式双流体喷嘴将100mL含有20%蔗糖的液体浓缩物肌醇六磷酸酶制剂喷雾在 稻壳上。流化床设定与制剂3相同并且其被使用以形成稻壳酶产品。
[0074] 制剂5--将200g小麦面粉装填到GEAAeromatic-FielderStrea-I流化床造粒 机中;通过顶喷式双流体喷嘴将100mL含有20%蔗糖和7%预凝胶化的淀粉的液体浓缩物 肌醇六磷酸酶制剂喷雾在小麦面粉上。使用以下流化床设定:50°C入口空气温度、10_15ml/ min喷雾速率、1. 5-2巴雾化压力、0. 8mm喷嘴。在酶喷雾之后干燥小麦面粉和酶产品以形成 肌醇六磷酸酶颗粒。
[0075] 制粒试验和酶稳定性测定与实施例1中相同。表5中显示了结果。
[0076] 表5 :在不同条件温度下制粒后家禽饲料中剩余的肌醇六磷酸酶活性(% )
[0077]
[0078] 稻壳用作制剂3&4中的载体。稻壳没有被精细碾磨并且不是非常吸水的;另外,在 这些制剂中没有使用粘合剂。结果,在稻壳酶产品中没有见到有效的造粒。当与制剂5相 比时,在高条件温度下二制剂的热稳定性相对较低。将稳定剂从氯化钠和山梨醇转换为蔗 糖以提高肌醇六磷酸酶的热稳定性。然而,当将载体从稻壳转换为精细碾磨的小麦面粉并 结合预凝胶化的淀粉如制剂5中作为粘合剂使用时,小麦面粉酶产品是颗粒状的,并且从 动物饲料颗粒提取的肌醇六磷酸酶的热稳定性在所有温度下改进,尤其在90°C下。
[0079] 实施例3
[0080] 制剂6--将3kg小麦面粉装填到VectorVFC-Lab3流化床造粒机中;通过顶喷 式双流体喷嘴将I. 6kg含有20%蔗糖和0.5%瓜耳胶的液体浓缩物肌醇六磷酸酶制剂喷 雾在小麦面粉上。流化床设定是I. 2mm喷嘴直径、20psi雾化压力、50-55°C入口空气温度、 23-27°C产品温度、在喷雾期间25-50g/min喷雾速率、在干燥期间70-80°C入口空气温度, 干燥至45°C终产品温度以形成肌醇六磷酸酶颗粒。
[0081] 制剂7--将3kg小麦面粉装填在VectorVFC-Lab3流化床造粒机中;通过顶喷 式双流体喷嘴将I. 6kg含有20%蔗糖、10%麦芽糖糊精和0. 5%瓜耳胶的液体浓缩物肌醇 六磷酸酶制剂喷雾在小麦面粉上。流化床设定是I. 2mm喷嘴直径、20psi雾化压力、50°C入 口空气温度、23-29°C产品温度、在喷雾期间25-50g/min喷雾速率、在干燥期间70-80°C入 口空气温度,干燥至45°C终产品温度以形成肌醇六磷酸酶颗粒。
[0082] 制粒试验和酶稳定性确定与实施例1中相同。结果在表6中显示。所有剩余活性 归一化为相同样品的75°C稳定性。
[0083] 表6 :在不同条件温度下制粒后家禽饲料中剩余肌醇六磷酸酶活性(% )
[0084]
[0085] 制剂3是与实施例2相同的样品,并且它在该实验中用作对照。在此制剂3的热 稳定性比实施例2的值更低,或许由于该试验中较粗糙的制粒条件。当从颗粒化的动物饲 料提取时,制剂6和7二者产生了改进肌醇六磷酸酶热稳定性的肌醇六磷酸酶颗粒。
[0086] 附加的制粒试验一一为了确认热稳定性中的改进,使用不同的加利福尼亚颗粒研 磨机使从两种样品(制剂6和7)生产的肌醇六磷酸酶颗粒经受附加的制粒试验。蒸汽条 件的持续时间是40秒,其比之前的制粒试验显著地更长。表7中显示了结果。所有剩余的 肌醇六磷酸酶活性归一化为相同样品的75°C稳定性。
[0087] 表7 :在不同条件温度下制粒后家禽饲料中剩余肌醇六磷酸酶活性(% )
[0088]
[0089] 结果确认,甚至在延长的蒸汽条件下,来自制剂6和7的两种肌醇六磷酸酶颗粒对 于从在高制粒温度下产生的动物饲料颗粒中提取的肌醇六磷酸酶提供高肌醇六磷酸酶活 性。
[0090] 实施例4
[0091] 制剂8--将3kg小麦面粉装填到VectorVFC-Lab3流化床造粒机中;通过顶喷 式双流体喷嘴将I. 6kg含有20 %蔗糖、10 %高岭土和0. 5%瓜耳胶的液体浓缩物肌醇六磷 酸酶制剂喷雾在小麦面粉上。流化床设定是I. 2mm喷嘴直径、20psi雾化压力、50°C入口空 气温度、22-30°C产品温度、在喷雾期间25-50g/min喷雾速率、在干燥期间70-80°C入口气 体温度,干燥至45 °C终产品温度以形成肌醇六磷酸酶颗粒。
[0092] 制剂9--将3kg小麦面粉装填到VectorVFC-Lab3流化床造粒机中;通过顶喷 式双流体喷嘴将I. 6kg含有20 %蔗糖、10 %麦芽糖糊精、5%高岭土和0. 5 %瓜耳胶的液体 浓缩物肌醇六磷酸酶制剂喷雾在小麦面粉上。流化床设定与制剂8中相同以形成肌醇六磷 酸酶颗粒。
[0093] 制剂10--将2kg小麦面粉装填到VectorVFC-Lab3流化床造粒机中;通过
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