一种开环西松烷二萜类化合物及其分离制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及天然药物化学领域，具体地说是一种开环西松烷二萜类化合物及其分 离制备方法和在抗肿瘤方面的应用。
【背景技术】
[0002] 西松烧二砲（Cembranoidditerpenes)是由4个异戊二稀首尾相连形成的大环 二萜，是一类母体骨架具有十四元环和3个对称分布的甲基与1个异丙基的天然产物 [1]。 西松烷二萜类物质是烟草中一类重要的二萜类物质，是烟叶香气和香味成分的重要前体 物，对烟叶香气风格和品质具有决定性影响，是开展烟叶品质研究的关键化学物质之一。自 1962年以来，已从烟草中发现了百余种该类化合物 [2]。此外，西松烷二萜类成分具有较强 的抗肿瘤、抑菌、抗炎和调节植物生长等生物活性[3 4]，因此引起合成化学家和药物化学家 的极大兴趣和高度重视[5 6]。
[0003]肺癌（Lungcancer，又称支气管肺癌Bronchopulmonarycarcinoma)是世界发病 率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。在我国，肺癌的发病率和死亡率分列男性肿瘤首位，女性 肿瘤第二位。肺癌的治疗长期以来一直是公众和医学界关注的热点议题。肺癌中约有85% 是非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC)m，且部分就诊时已属晚期M。目 前肺癌的治疗方法仍以手术、化疗和放疗为主，但其疗效已达到一个平台，毒性及不良反应 也限制了其临床应用。近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，分子靶向治疗成为目前肿 瘤治疗的热点，但在长期治疗中易出现耐药现象，且不能满足临床需要。在药物发现中，从 植物中寻找并开发具有抗肿瘤活性成分具有广阔的研究前景。
[0004] 近年来，西松烷二萜类成分的研究主要集中在海洋生物中，烟草相关西松烷二萜 类成分的研究却鲜有报道。因此针对烟草西松烷二萜类成分开展系统研究，丰富烟草西 松烷二萜类成分的组成，促进烟草西松烷二萜类成分相关研究进程具有重要意义。烟叶 (yVicotiaflateAacwa?L.)富含西松烧二砲类成分，在前期研究中发现烟叶西松烧二砲类成 分具有显著的抗肿瘤活性。
[0005]
【发明内容】
[0006] 本发明的目的正是基于上述现有技术状况而提供了一种从烟草中分离纯化西松 烷二萜的方法，得到了的一个新的开环西松烷二萜类化合物。并通过深入研究，还发现该化 合物且具有显著的抗肿瘤活性。
[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的： 一种开环西松烷二萜类化合物，是由烟草中分离纯化而得到，该开环西松烷二萜化合 物具有如下结构：
该开环西松烷二萜化合物的分离制备方法包括如下步骤： (1) 新鲜烟叶样品真空冷冻干燥，粉碎； (2) 乙醇回流提取粉碎后的烟叶样品，浓缩提取液，得到浸膏； 6?)将步骤（2)中所得浸膏浮于水中，依次用石油醚、二氯甲烷萃取，具体是先应用低等 极性溶剂石油醚萃取三次，合并萃取液得到烟叶提取物低等极性成分及色素；而后，应用中 等极性溶剂二氯甲烷萃取，得到烟叶提取物的中等极性成分。
[0008] (4)将步骤（3)中所得的二氯甲烷萃取物浓缩并上样至硅胶柱色谱，以石油醚：丙 酮的体积比为10 :〇-〇:1〇的混合溶剂进行梯度洗脱，按照所使用的不同梯度的洗脱液收集 流份； (5) 将步骤（4)中由石油醚：丙酮体积比为8:1的混合溶剂洗脱下来的流份上样硅胶柱 色谱，用二氯甲烷：甲醇为100:1-40:1的混合溶剂梯度洗脱； (6) 将步骤（5)中由二氯甲烷：甲醇体积比为60:1的混合溶剂洗脱下来的流份应用制 备型高效液相色谱仪，以甲醇：水为89:11的流动相洗脱，得到目标化合物。
[0009] 在本发明中，其中步骤（4)中所使用的混合溶剂中石油醚：丙酮的体积比例依次 为10:0，10:1，8:1，6:1，5:1，3:1，2:1和0:10。步骤（5)中所使用的混合溶剂中二氯 甲烧：甲醇的体积比例依次为：1〇〇:1，80:1，60:1和40:1。步骤（6冲所使用的制备型高 效液相流动相流速为2mL/min，检测波长为210nm。
[0010] 根据本发明的具体实施方案，其中步骤（4)中所述的硅胶柱色谱为粒径100-200 目的硅胶色谱柱，步骤（5)中所述的硅胶柱色谱为粒径300-400目的硅胶色谱柱。
[0011] 其中步骤（6)中与制备型高效液相色谱仪配套使用的色谱柱为C18高效液相半制 备色谱柱，规格为250XIOmm，粒径为5ym。根据本发明的具体实施方案，步骤（6)中还包 括使用薄层色谱和/或分析型高效液相色谱仪检测所得的化合物。
[0012] 本发明分离制备的开环西松烷二萜类化合物经研究可应用于抗肿瘤方面，体外 抗肿瘤实验表明，该化合物对胃癌细胞株（AGS)、人肝癌细胞株（HepG2)、人乳腺癌细胞株 (MCF-7)、人口腔表皮样癌细胞株（KB)和人肺腺癌细胞株（A549)均具有一定的抑制作用。
[0013] 本发明的化合物是从烟叶中分离的开环西松烷二萜类化合物，经多种现代色谱光 谱分析，特别是应用二维核磁共振谱对化合物的结构进行综合解析，确定了该化合物的化 学结构及立体构型。经文献检索，该化合物为一新的西松烷二萜类化合物，且11位和12 位之间断裂成开环。体外抗肿瘤实验表明，该化合物对胃癌细胞株（AGS)、人肝癌细胞株 (HepG2 )、人乳腺癌细胞株（MCF-7 )、人口腔表皮样癌细胞株（KB)和人肺腺癌细胞株（A549 ) 均具有一定的抑制作用。本发明为研制新的抗肿瘤药物提供新的思路，对合理利用烟叶中 西松烷二萜类成分具有重要价值。
[0014] 本发明的有益效果和意义在于：充分利用烟草资源优势，深入研究开发，寻找具有 独特化学结构的西松烷二萜类化合物，丰富烟草西松烷二萜类成分的组成，为开展西松烷 二萜类成分相关研究及应用奠定坚实基础。
[0015]
【附图说明】
[0016]图1为本发明所述西松烷二萜类化合物的质谱图； 图2为本发明所述西松烷二萜类化合物的核磁共振氢谱； 图3为本发明所述西松烷二萜类化合物的核磁共振碳谱。
【具体实施方式】
[0017] 本发明所述的西松烧二砲类化合物，命名为nicotiaditerpene A,化学名为（15； 2E,AR, &R, 1E)-4, 8-dimethyl-4, 6, 1 l-trihydroxy-2, 7-pentadecadien_14-〇ne ; 分子式为：C2〇H3604;化学结构式为：
本发明化合物nicotiaditerpeneA为白色针状结晶，[ff]20D+38.0(c=0.06,MeOH)〇HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z: 363. 25107[M+Na]+ (计算值C2QH3604Na，363. 25113)，结 合核磁共振波谱数据，确定其分子式为C2(]H3604，不饱和度为3。4和13C核磁共振数据见表 1 表 1NicotiaditerpeneA的1H和13C核磁共振1H谱（CDC13, 600Mz)和13C谱（CDC13, 150Mz)数据
NicotiaditerpeneA分离制备： 新鲜烟叶采自许昌烟草种植