一种猪血提取血浆蛋白粉的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物活性物质的分离提取技术领域，特别是涉及一种猪血提取血浆蛋白粉的方法。
【背景技术】
[0002]猪血是一种优质蛋白质，营养学家称其为液体肉。猪血中含有人体所需要的几乎全部的营养成分:蛋白质、氨基酸、维生素、糖和钠、钾、铁、钙等人体不可缺少的微量元素。其中蛋白质18.9%、非蛋白有机体1.2%、矿物质0.9%、水分79%，另外，其氨基酸组成平衡，含人体所需的8种必需氨基酸的总量高于人乳和全蛋，特别是赖氨酸的含量高达9%，符合联合国粮农组织、世界卫生组织(FA0/WH0)专家组推荐模式。
[0003]我国是猪血资源大国，但在猪血资源开发利用上却落后于不少发达国家，由于经简单加工的猪血蛋白不易被消化吸收且颜色较深、血腥味较重适口性差，所以很久以来，许多猪血作为废弃物倒进地沟，既造成巨大浪费，又污染环境。
[0004]国外对动物血的开发始于上世纪初，初期主要用于饲料工业。随着高新技术的发展，国内外许多研究部门尤其注重用生化技术加工猪血用于食品、制药等方面的研究。目前血液产品在保健品行业已经形成了一定的规模，产业化前景良好。近年来，我国猪血深度开发也取得了重要进展，猪血作为一个营养宝库，已经得到极其广泛的研究，所提出的加工生产工艺流程不下几十种。从直接食用猪血豆腐，到酶解猪血粉，复合氨基酸粉的生产，已经取得了长足的进展，但是仍然不能满足人类的需要。存在的问题是大多数工艺还不完善，如有的工艺能耗大耗时长、有的工艺只能生产单一产品、有的工艺得率低、有的工艺使用大量有机溶剂，存在环保缺陷等。而本发明方法克服了上述缺点，发明了零排放的利用猪血同时生产凝血酶和猪血水解蛋白的绿色方法。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种猪血提取血浆蛋白粉的方法，解决上述现有技术中的一个或者是多个。
[0006]本发明提供一种猪血提取血浆蛋白粉的方法，包括如下步骤:
[0007]I)制备抗凝猪血:取检疫合格的新鲜猪血放入第一容器中，该容器中已事先加入了 1.0%的柠檬酸钠、1.0%的乙二胺四乙酸二钠、1.0%乙二胺四乙酸二钾、0.6%六偏磷酸钠和0.8%焦磷酸钠组成的抗凝剂，充分搅拌均匀，在7?8°C下，罐藏42h ；
[0008]2)血浆、血球分离:在7?8°C下，罐藏42h后，抗凝猪血上层为无色透明液体为血浆，下层深红色粘稠液体为血球，用虹吸法将上层血浆吸到第二容器中；余下的血球经转速为2500r/min离心后，将上层血浆合并到第二容器中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至第三容器中过夜待用；
[0009]3)血浆沉淀收集凝血酶原:第二容器中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用0.9%生理盐水稀释，低温静置过夜，收集沉淀即得凝血酶原；
[0010]4)凝血粗酶液制备:将收集的凝血酶原沉淀溶解于pH值为7.0的磷酸缓冲液中，用1.0% CaCl2溶液激活凝血酶原，过滤收集滤液即得凝血酶粗酶液；
[0011]5)凝血酶精品制备:将凝血酶粗酶液用孔径为1.2nm的纳滤膜处理，浓缩后原体积的1/25-1/30收集截留液，进一步将截留液喷雾干燥，即得血浆蛋白粉；
[0012]6)血球破壁、溶血:向第三容器中加入血球体积的适量生理盐水，使液体中蛋白质含量为20%，升温至60°C，进行超声波处理12min ;
[0013]7)血球蛋白分段酶解:用4.0moI/L NaOH调节pH值至8.0，将温度升至40-45°C，加入适量沙雷肽酶，保温2小时后，再升温至50°C，保温3小时；调节pH值至9.0，加入适量复合蛋白酶，保温4小时使血球蛋白充分水解；
[0014]8)猪血水解蛋白制备:酶解结束后，冷却至常温，用0.20um的滤膜过滤除菌即可制成液体猪血水解蛋白，进一步将该液体喷雾干燥后制成血球蛋白粉。
[0015]本发明的有益效果是:该方法制得的猪血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白质的90%以上，易于吸收利用，且充分利用了原料，一次投料可以生产两种高附加值产品。整个生产过程避免使用毒性大的有机溶剂，克服了产品单一、溶剂残留等缺陷，降低了生产成本。
[0016]在一些实施方式中，在步骤6)中，超声波处理的条件为超声波功率250W。
[0017]在一些实施方式中，在步骤7)中，所述复合蛋白酶由胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶按一定比例混合而成。
【具体实施方式】
[0018]本发明提供一种猪血提取血浆蛋白粉的方法，下面结合实施例，对本发明作详细介绍:
[0019]实施例1
[0020]本实施例中，复合蛋白酶由胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶按一定比例混合而成。具体步骤为:
[0021]I)制备抗凝猪血:取检疫合格的新鲜猪血放入第一容器中，该容器中已事先加入了 1.0%的柠檬酸钠、1.0%的乙二胺四乙酸二钠、1.0%乙二胺四乙酸二钾、0.6%六偏磷酸钠和0.8%焦磷酸钠组成的抗凝剂，充分搅拌均匀，在7°C下，罐藏42h ;
[0022]2)血浆、血球分离:在7°C下，罐藏42h后，抗凝猪血上层为无色透明液体为血浆，下层深红色粘稠液体为血球，用虹吸法将上层血浆吸到第二容器中；余下的血球经转速为2500r/min离心后，将上层血浆合并到第二容器中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至第三容器中过夜待用；
[0023]3)血浆沉淀收集凝血酶原:第二容器中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用0.9%生理盐水稀释，低温静置过夜，收集沉淀即得凝血酶原；4)凝血粗酶液制备:将收集的凝血酶原沉淀溶解于PH值为7.0的磷酸缓冲液中，用1.0% CaCl2溶液激活凝血酶原，过滤收集滤液即得凝血酶粗酶液；
[0024]5)凝血酶精品制备:将凝血酶粗酶液用孔径为1.2nm的纳滤膜处理，浓缩后原体积的1/30收集截留液，进一步将截留液喷雾干燥，即得血浆蛋白粉；
[0025]6)血球破壁、溶血:向第三容器中加入血球体积的适量生理盐水，使液体中蛋白质含量为20%，升温至60 °C，进行功率为250W的超声波处理12min ；
[0026]7)血球蛋白分段酶解:用4.0mol/L NaOH调节pH值至8.0，将温度升至40°C，加入适量沙雷肽酶，保温2小时后，再升温至50°C，保温3小时；调节pH值至9.0，加入适量复合蛋白酶，保温4小时使血球蛋白充分水解；
[0027]8)猪血水解蛋白制备:酶解结束后，冷却至常温，用0.20um的滤膜过滤除菌即可制成液体猪血水解蛋白，进一步将该液体喷雾干燥后制成血球蛋白粉。
[0028]实施例2
[0029]本实施例中，复合蛋白酶由胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶按一定比例混合而成。具体步骤为:
[0030]I)制备抗凝猪血:取检疫合格的新鲜猪血放入第一容器中，该容器中已事先加入了 1.0%的柠檬酸钠、1.0%的乙二胺四乙酸二钠、1.0%乙二胺