一种复合土壤修复组剂及其在温室大棚土壤修复中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及农业微生物应用技术领域，具体地说，本发明设及自行选育筛选的菌 种制备复合的上壤修复组剂及在溫室大棚上壤修复中应用的技术领域。
【背景技术】
[0002] 随着设施农业的不断发展，化学肥料、农药W及其他的化学物质在农田积累越来 越多，导致±壤板结、病害繁多直接影响农产品的产量和质量问题，运个问题已经成为种植 业急需攻克的难题。目前，国内一些处理污染上壤的公司，多采用物理方法和化学方法进行 治理，其中，物理方法多采用焚烧法，填埋法处理污染物，容易破坏±壤结构，且处理过程繁 琐，成本较高；化学方法多采用萃取法等，由于使用化学试剂的缘故，该方法容易造成环境 的二次污染。
[0003] 中国环保产业在±壤修复领域的投入一直处在增加的趋势，我国耕地资源相对紧 缺，截止2006年全国的耕地面积18. 31亿亩，占国±面积的12. 71%。^一五"规划指出 "我国±地、淡水、能源、矿产资源和环境状况对经济发展已经构成严重制约"。根据国家环 境保护部2006年所发布的资料，全国受污染的耕地约有1. 5亿亩，污染灌概污染耕地3250 万亩，固体废弃物堆存占地和毁田200万亩，合计占耕地面积的1/10W上，每年由于±壤污 染造成粮食减产25亿公斤，直接经济损失超过200亿元。
[0004] 在受污染的±地中，有一类溫室大棚的±壤污染尤其引起我们的关注。滥用化肥、 农药造成溫室大棚±壤板结，生产出的农作物产品附有农药残留，对人民的身屯、健康带来 极大威胁。采用微生物学的方法对污染±壤进行修复，具有降解能力的微生物会将±壤中 的污染物利用自身代谢转化成为水和二氧化碳，具有操作简单，处理成本低，无二次污染等 优点，是一种健康、环境友好型的生物清洁技术。尽管有许多关于在大田中研究有机物料对 ±壤性质及作物产量的影响的报道，但是有关从溫室大棚±壤中分离筛选能够改良溫室大 棚±壤的菌种，W及利用自行选育筛选驯化获得的枯草芽抱杆菌、白地霉和细黄链霉菌与 其他菌种根据菌种的相融性、适用性和安全性基本要求和菌种特性制备上壤修复剂用于改 良溫室大棚±壤的研究还未见报道。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术中未见有关从溫室大棚±壤中筛选枯草芽抱杆菌、白地霉和细黄链 霉菌作为优良菌种并与其他菌种相配伍相融合制备溫室大棚±壤修复剂的技术现状，本发 明旨在提供一种复合±壤修复组剂及其在溫室大棚±壤修复中的应用。本发明通过在溫室 大棚±壤中分离出一批微生物菌株，从中分离筛选出编号为XHS0035KC的枯草芽抱杆菌、 编号为X服0030B的白地霉和X服0032化的细黄链霉菌，并通过利用编号为X服0035KC的 枯草芽抱杆菌、编号为X服0030B的白地霉和X服0032化的细黄链霉菌与沼泽红假单胞菌相 配伍相融合制备复合±壤修复组剂，对于改良和活化±壤，降解±壤中的有害物质，解决± 壤的盐溃化问题，解决实际设施大棚中±壤养分失衡、盐溃化、沙化或者板结严重的现状， 改善大棚中农作物的生长环境，改善作物品质等方面都具有重要的作用，综合利用制备的 复合±壤修复组剂对于蔬菜生产的不利影响降低到最低限度，有利于提高蔬菜的产量和品 质，获得良好的技术效果，在农作物抗重巷、预防大棚作物烂根、枯萎病、减少农药残留等方 面具有重要作用，同时在溫室大棚±壤修复中具有广泛而现实的价值。
[0006] 本发明采用主要的技术方案：
[0007] 通过微生物菌种的分离筛选，在溫室大棚±壤中分离出一批微生物菌株，经过进 一步分离、筛选、选育、驯化，获得编号为X服0035KC的枯草芽抱杆菌、编号为X服0030B的 白地霉和编号为X服0032化的细黄链霉菌。通过对所获菌株进行形态特征、生理生化特性 及16srDNA区段序列、rDNAITS区段DNA序列和16srDNA区段序列测定及系统发育分 析，初步确定了其分类地位。同时，将编号为X服0035KC的枯草芽抱杆菌、编号为X服0030B 的白地霉和编号为X服0032化的细黄链霉菌与沼泽红假单胞菌相配伍相融合制备溫室大 棚±壤修复剂，按照重量比核计，W编号为XHS0035KC的枯草芽抱杆菌20% -25%、编号为 X服0030B的白地霉15% -20%、编号为X服0032化的细黄链霉菌30% -35%和沼泽红假单 胞菌20% -25%进行混合，菌种混合液充分吸附于载体中，并与辅料相混合，通过利用发酵 技术制备复合±壤修复组剂。利用制备的复合±壤修复组剂可W改良溫室大棚±壤的品 质，改良和活化±壤，降解±壤中的有害物质，解决±壤的盐溃化问题，解决实际设施大棚 中±壤养分失衡、盐溃化、沙化或者板结严重的现状，改善大棚中农作物的生长环境，改善 作物品质，综合将对于蔬菜生产的不利影响降低到最低限度，有利于提高蔬菜的产量和品 质，获得良好的技术效果，在农作物抗重巷、预防大棚作物烂根、枯萎病、减少农药残留等方 面具有重要作用，同时在溫室大棚±壤修复中具有广泛而现实的应用价值。
[0008] 本发明具体提供编号为X服0035KC的枯草芽抱杆菌、编号为X服0030B的白地霉和 编号为X服0032化的细黄链霉菌，通过在溫室大棚±壤中分离、筛选、驯化和培养，获得一 批细菌类微生物菌株，从中筛选出编号为XHS0035KC的枯草芽抱杆菌，经微生物学分类与 鉴定，属于枯草芽抱杆菌度acillusSubtilis);编号为XHS0030B的白地霉，经微生物学分 类与鉴定，属于白地霉（GeotrichumCandidum);编号为X服0032化的细黄链霉菌，经微生 物学分类与鉴定，属于属于细黄链霉菌（StreptomycesmicrofIavus)。
[0009] 所述的，本发明提供菌株编号为XHS0035KC的枯草芽抱杆菌度aci1Ius Subtilis)。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2014年7月10日，保藏号 是CGMCCNo. 9434。经微生物学鉴定为BacillusSubtilis。该菌株最适生长条件为： 溫度28°C，抑7. 2,时间4她；该菌株菌落中等且平滑，呈透明、白色、表面湿润、边缘整齐， 生长较快；杆状，革兰氏阳性，严格好氧，化能异养，接触酶阳性，M.R和V-P试验阳性， 淀粉水解阳性，明胶水解阳性，硝酸盐还原阳性，巧樣酸盐利用阳性；经微生物学鉴定为 BacillusSubtilis菌。依照第九版《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》(《Bergey,SManualof SystematicBacterio-logy》）和《常用细菌系统鉴定手册》对XHS0035KC菌株进行形态学 测定，生理生化检测确定XHS0035KC菌株为枯草芽抱杆菌度acillusSubtilis)中的成员。 通过BLAST同源比对，菌株XHS0035KC的16SrRNA序列在NCBI数据库中进行BLAST分析 后，构建系统进化树，菌株XHS0035KC与 30334-3175她acillusSubtilisKCTC1028 是其 近似种，因而根据16SrDNA序列分析结果，结合形态及生理生化特性，将菌株X服0035KC鉴 定为枯草芽抱杆菌度acillusSubtilis)。
[0010] 该菌株XHS0035KC在膜蛋白腺大豆琼脂灯SA)培养基生长良好，经鉴定板试验证 明XHS0035KC培养时的主要氮源包括但不限于蛋白腺、酵母粉；使用的主要碳源包括但不 限于薦糖、甘油、甘露醇、麦芽糖；使用的无机组分包括包括但不限于氯化钟、氯化钢、憐酸 二氨钢、氨二钟、憐酸=巧、二水氯化巧、屯水合硫酸儀、屯水和硫酸亚铁。
[0011] 所述的，本发明提供菌株编号为XHS0030B的白地霉（GeotrichumCandidum)。该 菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中屯、（CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微 生物研究所，邮编：1〇〇1〇1。保藏日期是2014年7月10日，保藏号是CGMCCNo. 9435。该 菌株最适生长条件为：溫度25°C，培养基采用马铃馨葡萄糖琼脂（PDA)培养基，培养条件： 抑5-7,时间2地-4她。该菌株产生白色的、呈毛绒状或粉状的膜，具有真菌丝，有的分枝，横 隔或多或少，繁殖方式为裂殖，形成的节抱子单个或连接成链，抱子呈楠圆或圆形，菌落呈 平面扩散，生长快，扁平，正面乳白色，背面±黄色，直径40-70mm，短绒状或近于粉状，有同 屯、圈可放射线，有的呈中屯、突起。能水解蛋白，其中多数能液化明胶、腺化牛奶，少数只能腺 化牛奶，不能液化明胶，经微生物学鉴定为白地霉（GeotrichumCandidum)。参照《真菌鉴 定手册》对编号XHS0030B菌株进行系统生理生化鉴定，经生理生化检测确定编号XHS0030B 菌株为地霉属（Geotrichum)中的成员。通过BLAST同源比对，菌株X服0030B的口SrDNA 序列序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后，构建系统进化树，该编号为菌株XHS0030B与 Geotrichumcandidumi