一种从补骨脂中分离纯化补骨脂素和异补骨脂素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化工与制药领域，具体是涉及一种从补骨脂提取物中分离纯化异补骨 脂素和补骨脂素的方法。
【背景技术】
[0002] 补骨脂为豆科植物corjii/bJia ("L.)的干燥成熟果实。其主要活性成 分是补骨脂素和异补骨脂素呋喃香豆素类成分，具有镇静、解痉、止血等作用，是治疗白癜 风、斑秃、牛皮癣以及瘤样皮肤病的有效药物。临床试验研究表明，补骨脂素对肿瘤的生长 有明显抑制作用，异补骨脂素可调节机体的内分泌失调，缓解更年期综合症。
[0003] 目前，对补骨脂中香豆素类成分的分离纯化主要采用有机试剂提取，大孔树脂纯 化法或高速逆流色谱法。大孔树脂纯化法虽然工艺成熟，但操作繁琐，高速逆流色谱法中溶 剂体系的选择较困难，且缺乏理论指导。另外，两种方法均需要消耗大量的有机溶剂，难以 实现回收再利用，而且产品中有机试剂残留严重。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、分离量大、综合成本 低、绿色环保的快速纯化制备异补骨脂素和补骨脂素的方法，通过一步分离纯化即可从补 骨脂提取物中得到高纯度异补骨脂素和补骨脂素单体化合物。
[0005] 本发明的方案如下： 一种从补骨脂中分离纯化异补骨脂素和补骨脂素的方法，步骤为： 步骤1 :补骨脂药材粉碎，加入无水甲醇加热回流提取，将提取液过滤、减压浓缩得浸 膏，将浸膏分散于水中，用石油醚萃取。合并石油醚层，减压蒸馏得补骨脂浸膏。
[0006] 步骤2 :将补骨脂浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱 为二醇基色谱柱，流动相为超临界流体，改性剂为甲醇。分离过程由紫外检测器检测，根据 检测信号收集目标组分馏分。
[0007] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中无水甲醇加热回流提取甲醇与药材的 比例是5 :1~20 :1，最优为10 :1 ;提取的次数为3次，回流时间为0. 5-2小时。
[0008] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中将浸膏分散于水中，水与浸膏的比例为 100 :1 ~10 :1，最优为 50 :1。
[0009] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中用石油醚萃取，石油醚与水相的比例为 0. 5 :1~10 :1，最优为1 :1，萃取次数为3次。
[0010] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中过滤所用滤膜为0.45 μ m滤膜。
[0011] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳，超临界 二氧化碳的压力为9~14 MPa，最优为lOMPa ;超临界二氧化碳的流速为1-8倍柱体积/分 钟，最优为3倍柱体积/分钟。
[0012] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中色谱柱温度为35~50°C，最优为40°C。
[0013] 前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中改性剂甲醇的比例为19^5%，最优为2%。
[0014] 本发明一种从补骨脂提取物中分离纯化异补骨脂素和补骨脂素的方法，具有如下 优势： (1)所得到的补骨脂提取物中有效成分含量高(从图1可以看出）。
[0015] (2)不需要像已有技术一样对样品进行多次分离纯化，只需要一个分离步骤即可 得到两种高纯度化合物，经过一步分离纯化就可以得到异补骨脂素和补骨脂素。
[0016] (3)纯化过程中使用超临界二氧化碳，不使用对环境有危害的有机溶剂，生产过程 绿色环保，所得产品无有害物质残留。
[0017] ( 4 )二氧化碳回收利用容易，能耗低，生产成本低。
[0018] (5)方法操作简单，易于自动化控制，效率高，工艺周期短。
【附图说明】
[0019] 图1是实施例1超临界流体色谱图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实 施例中所用设备或原材料皆可从市场获得。所用试剂均为分析纯，购自天津试剂四厂，所用 二氧化碳为高纯二氧化碳。
[0021] 实施例1 称取补骨脂100克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入lOOOrnl无水甲醇加热回流提 取2小时，提取3次，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于200ml水中，用200ml 石油醚萃取3次。合并石油醚萃取液，减压蒸馏回收石油醚得补骨脂浸膏。
[0022] 将补骨脂浸膏用甲醇溶解，经过滤(所用滤膜为0. 45 μm滤膜)后，进行超临界流体 色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，色谱柱温度为40°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为 3倍柱体积/分钟，压力为lOMPa。改进剂为甲醇，其比例为2%。分离过程由紫外检测器检 测，检测波长为254nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到异补骨脂素和补骨脂素。
[0023] 图1是实施例1超临界流体色谱图。由此可知所得产物纯度很高。
[0024] 实施例2 称取补骨脂100克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入500ml无水甲醇加热回流提 取2小时，提取3次，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于100ml水中，用100ml 石油醚萃取3次。合并石油醚萃取液，减压蒸馏回收石油醚得补骨脂浸膏。
[0025] 将补骨脂浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基 色谱柱，色谱柱温度为45°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为5倍柱体积/分钟，压力为 12MPa。改进剂为甲醇，其比例为5%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为254nm，根据 检测信号收集目标组分馏分，分别得到异补骨脂素和补骨脂素。
[0026] 实施例3 称取补骨脂100克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入1500ml无水甲醇加热回流提 取1. 5小时，提取3次，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于300ml水中，用300ml 石油醚萃取3次。合并石油醚萃取液，减压蒸馏回收石油醚得补骨脂浸膏。
[0027] 将补骨脂浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基 色谱柱，色谱柱温度为40°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为4倍柱体积/分钟，压力为 13MPa。改进剂为甲醇，其比例为1%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为254nm，根据 检测信号收集目标组分馏分，分别得到异补骨脂素和补骨脂素。
[0028] 经HPLC面积归一化法分析测试，实施例1-3所得到的各个组分的纯度很高，均在 98%以上。
[0029] 经NMR、MS鉴定，图1中A为异补骨脂素，B为补骨脂素，其化学结构如下：
【主权项】
1. 一种从补骨脂中分离纯化异补骨脂素和补骨脂素的方法，其特征是，步骤为： 步骤1 :补骨脂药材粉碎，加入无水甲醇加热回流提取，将提取液过滤、减压浓缩得浸 膏，将浸膏分散于水中，用石油醚萃取，合并石油醚层，减压蒸馏得补骨脂浸膏； 步骤2 :将补骨脂浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二 醇基色谱柱，流动相为超临界流体，改性剂为甲醇，分离过程由紫外检测器检测，根据检测 信号收集目标组分馏分。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1中无水甲醇加热回流提取甲醇与药材 的比例是5 :1~20 :1，最优为10 :1。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，提取的次数为3次，回流时间为0. 5-2小时。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1中将浸膏分散于水中，水与浸膏的比 例为100 :1~10 :1，最优为50 :1。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1中用石油醚萃取，石油醚与水相的比 例为0. 5 :1~10 :1，最优为1 :1，萃取次数为3次。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中过滤所用滤膜为0. 45μm滤膜。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳，超 临界二氧化碳的压力为9~14MPa，最优为lOMPa。8. 根据权利要求7所述的方法，其特征是，超临界二氧化碳的流速为1-8倍柱体积/分 钟，最优为3倍柱体积/分钟。9. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中色谱柱温度为35~50°C，最优为 4(TC〇10. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2中改性剂甲醇的比例为1%~5%，最优 为2%。
【专利摘要】本发明属于化工与制药领域，涉及一种从补骨脂提取物中分离纯化异补骨脂素和补骨脂素的方法。补骨脂药材粉碎，加入无水甲醇加热回流提取，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于水中,用石油醚萃取。合并石油醚层，减压蒸馏得补骨脂浸膏。将补骨脂浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，流动相为超临界流体，改性剂为甲醇。本发明纯化过程中使用超临界二氧化碳，不使用对环境有危害的有机溶剂，生产过程绿色环保，所得产品无有害物质残留。
【IPC分类】C07D493/04
【公开号】CN105315295
【申请号】CN201510179427
【发明人】霍秀菊
【申请人】霍秀菊
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2015年4月16日