一种家兔cetp基因检测肉质育种的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及家兔育种技术领域，尤其是一种利用基因检测进行家兔肉质早期育种 的方法。
【背景技术】
[0002] 据联合国粮农组织调查，兔肉在欧洲许多国家，如意大利、捷克、西班牙、比利时、 卢森堡、葡萄牙、法国，还有一些北非国家，如埃及、阿尔及利亚，受到消费者的青睐，兔肉生 产在国民经济中发挥着的重要作用。兔肉能提供丰富的营养物质，首先蛋白含量很高，尤其 是限制性氨基酸水平较高。在家兔背最长肌和后腿的蛋白含量高达22%。同时矿物质、维生 素、抗氧化因子含量高，而兔肉胆固醇和脂肪含量低，被认为是消费者首选的功能食品。
[0003] 我国现有家兔育种方法主要有两种，一是对育种家兔进行人工选择，即选择性状 好的公、母家兔作种用，淘汰性状较差的家兔;二是进行杂交育种，选择不同品种的家兔进 行杂交，在后代中选择具有双亲优良性状的子代。但是在家兔肉质育种方面的研究较少。家 兔作为小畜种动物，家兔的育种，尤其是肉质育种在我国研究滞后，肉兔生产育种品种较 少，育种时间长，成效慢。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种家兔CETP基因多态性检测肉质育种的方法，所述方法可 以根据育种需求快速简便的进行家兔育种。
[0005] 本发明提供了一种家兔CETP基因多态性检测的试剂在制备用于检测家兔肉质的 制剂或试剂盒中的应用，其中CETP基因外显子4第11位点为GG基因型家兔的半净膛屠宰率 最尚；AG基因型的兔背最长肌肌内脂肪含量最尚；AA基因型的家兔后腿肌内脂肪含量最尚 其中所述多态性的试剂包括上游引物和下游引物：
[0006] 所述上游引物为CETP-F，CCACTTGTTCCCTCAGCCTC，所述的下游引物为CETP-R， CGAGTGAGTACACAGCCGCTG 〇
[0007] 优选的，其中所述CETP基因多态性检测的试剂为聚合酶链式反应所用的试剂，所 述的聚合酶链式反应所用的试剂还包括家兔基因组0财，(1奶1 3，1^(：12，丨&9〇财聚合酶和 Buffer〇
[0008] 优选的，所述CETP基因多态性检测的试剂有如下反应体系构成:45~55ng全基因 组DNA，上游引物CETP-F和下游CETP-R各0.8~1.2uM，l~2mM MgCl2，180~220μΜ dNTPs (dATP，dTTP，dCTP和dGTP)，0 · 3~0 · 5个单位的Taq DNA聚合酶（MBI)，2 · 4~2 · 6yL的 100 X buffer。
[0009] 优选的，家兔待测个体为伊拉兔、香槟兔或天府黑兔中的一种或几种。
[0010]优选的，所述的家兔待测个体样品来自70日龄家兔。
[0011] 本发明提供了一种家兔CETP基因多态性肉质育种的方法，包括以下步骤：
[0012] 1)提取家兔样品的基因组DNA，并将所述的基因组DNA保存于-15°c-20°c;
[0013] 2)以步骤1)所述的基因组DNA作为模板，通过PCR反应扩增家兔CETP基因，所述的 PCR包括上游弓| 物：CETP-F，CCACTTGTTCCCTCAGCCTC和下游弓| 物CETP-R， CGAGTGAGTACACAGCCGCTG；
[0014] 3)将步骤2)扩增得到的家兔CETP基因测序，得到家兔CETP基因序列；
[0015] 4)分析步骤3)中所得到的家兔CETP基因序列的单核苷酸多态性；
[0016] 5)根据家兔CETP基因序列的单核苷酸多态性的分析结果确定外显子4第11位点处 发生单核苷酸变异，产生3种基因型为AA、GG和AG;
[0017] 6)分析步骤5)中所述的三种基因型与家兔屠体性状的关联性；
[0018] 7)根据步骤6)得到的基因与家兔屠体性状的关联，根据需要选择不同基因型的家 兔进行培养育种。
[0019] 优选的，所述家兔为伊拉兔、香槟兔和天府黑兔中的一种或几种;所述的家兔样品 来自68~72日龄家兔。
[0020] 优选的，步骤1)中所述的家兔样品来自68~72日龄家兔耳组织样品。
[0021]优选的，所述的家兔CETP基因序列的单核苷酸多态性分析采用DNAstar软件进行 序列对比判断突变位点及其基因型，并计算得到基因型和基因型频率，利用P0PGENE软件测 试哈温平衡的x2值，多态信息含量(PIC)通过下列公式计算得到
[0022]
式I，Pi和Pj分别为第i个和第j个等位基因频率，η为 等位基因数，所述的i和j为大于等于1，小于等于η的自然数。
[0023] 优选的，所述基因型与家兔屠体性状的关联分析，采用SPSS 21中一般线性模型 GLM进行。
【具体实施方式】
[0024]本发明提供了一种家兔CETP基因多态性检测的试剂在制备用于检测家兔肉质的 制剂或试剂盒中的应用，其中所述CETP基因多态性检测的试剂为聚合酶链式反应所用的试 剂。所述试剂具体的包括引物，家兔基因组DNA，MgCl 2、dNTPs (dATP，dTTP，dCTP和dGTP)、Taq DNA聚合酶和buf f er。
[0025] 所诉的引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物为CETP-F， CCACTTGTTCCCTCAGCCTC，所述的下游引物为 CETP-R，CGAGTGAGTACACAGCCGCTG。
[0026] 所述的PCR扩增具体的包括全基因组DNA，优选为45~55ng，更优选的为50ng;上游 引物CETP-F和下游引物CETP-R优选的为0.8~1.2uM，更优选的为1. OuM; MgCl 2优选的为为1 ~2mM，更优选的为1.5mM; dNTPs (dATP，dTTP，dCTP和dGTP)优选的为180~2 20μΜ，更优选的 为200μΜ; Taq DNA聚合酶(ΜΒΙ)优选的为0.3~0.5个单位，更优选的为0.4个单位；100 X buffer优选的为2.4~2.6yL，更优选的为2.5yL，所述试剂总体积为优选的为20~30yL，更 优选的为25yL。
[0027] 所述的PCR扩增的具体程序为：95°C预变性5min;40个循环，94°C变性45S，56°C退 火 45S; 72°C 延伸 40S;最后 72°C 延长 lOmin。
[0028] 所述的基因多态性检测的家兔待测个体优选的为伊拉兔、香槟兔或天府黑兔中的 一种或几种。所述的家兔待测个体样品优选的来自68~72日龄家兔，更优选的为70日龄家 兔。
[0029]本发明提供了一种家兔CETP基因多态性肉质育种的方法，包括以下步骤：
[0030] 1)提取家兔样品的基因组DNA，并将所述的基因组DNA保存于-15°C-20°C;
[0031] 2)以步骤1)所述的基因组DNA作为模板，通过PCR反应扩增家兔CETP基因，所述的 PCR包括上下游引物:所述的上游引物为CETP-F，CCACTTGTTCCCTCAGCCTC，所述的下游引物 为CETP-R，CGAGTGAGTACACAGCCGCTG;
[0032] 3)将步骤2)扩增得到的家兔CETP基因测序，得到家兔CETP基因序列；
[0033] 4)分析步骤3)中所得到的家兔CETP基因序列的单核苷酸多态性；
[0034] 5)根据家兔CETP基因序列的单核苷酸多态性的分析结果确定外显子4第11位点处 发生单核苷酸变异，产生3种基因型为AA、GG和AG;
[0035] 6)分析步骤5)中所述的三种基因型与家兔屠体性状的关联性；
[0036] 7)根据步骤6)得到的基因与家兔屠体性状的关联，根据需要选择不同基因型的家 兔进行培养育种。
[0037]本发明具体的以家兔组织为样品，优选的以68~72日龄的家兔的耳组织为样品， 更优选的为70日龄的家兔的耳组织为样品，进行家兔基因组DNA的提取。所述的家兔耳组织 样品基因组DNA的提取按试剂盒(Axygen，USA)提供的方法进行，并将提取得