1.5%、憐酸二氨钟0.3 %、屯水硫酸儀0.3 %、硫酸锋0.3 %、豆油0.03 % ;调节抑值6.0; 通风比为l:〇.4vvm，罐压0.04Mpa，在27°C下发酵培养4天后，放出20L的发酵液，补入20L灭 菌后的发酵培养基，继续发酵1.5天;如此不断放料、补料，反复3次，发酵结束可得发酵液 1151^，发酵周期为8.5天。
[0029] 2)微滤过滤:分别将四次发酵后的乌灵参发酵液20U20U20L和5f5L通过微滤过 滤，分别得到乌灵参湿菌丝体1.36kg、1.34kg、1.32kg、3.7化g(含水量78 %左右），微滤透析 液 18.64Kg、18.66Kg、18.68Kg和51.25Kg，透析液的透光率为82-85%，C0D为30-60mg/L。微 滤过滤所用的膜材料是孔径为50nm的陶瓷膜，具体工艺条件是:操作溫度为50~6(TC，进压 为3. Obar，出压为1. Obar，压力差为2. Obar。
[0030] 3)低溫干燥:将步骤2得到的1.36kg、1.34kg、1.32kg、3.7化g乌灵参湿菌丝体进入 真空烘箱进行烘干，得到0.312kg、0.30化g、0.303kg和0.859kg水分含量4%左右的乌灵参 菌丝体，该菌丝体腺巧为0.10-0.14%，多糖含量8-10%。依据￥53-321(2-39)-2001(2)标准 方法检验。具体干燥工艺条件是:干燥溫度65 °C，真空度为-0.085Mpa。
[0031] 传统生产工艺与本发明实施例1工艺产品产量、质量对比表
[0032]
[0034] 从上述表格可W看出采用传统工艺10天发酵2个批次，可获得菌丝体1.58化g;而 采用本发明工艺总发酵周期为8.5天，可获得4个批次的菌丝体1.781kg，发酵周期为传统的 85%，而获得菌丝体产量是传统的112.2%，并且菌丝体产品质量要高于传统工艺生产。因 此采用本发明工艺既可缩短发酵周期，提高产量和质量，降低生产成本。
[0035] 实施例2
[0036] 1)乌灵参菌株(Xylaria nigripes化1. )Sacc .)由中国科学院微生物研究所提供 并鉴定，保藏编号CGMCC NO. 1038。将培养好的乌灵参菌株种子液种到种子培养基，接种量 是10%，种子培养基组成为葡萄糖2%、蛋白腺0.6%、黄豆饼粉1.8%、憐酸二氨钟0.3%、屯 水硫酸儀0.3 %、硫酸锋0.25%、豆油0.02%;调节pH值5.5。培养条件为：通风比为1: 0.5vvm，罐压0.03Mpa，培养溫度26-28°C，培养4天左右即可得到种子液。将培养好种子液接 种到灭菌后1〇化发酵培养基，接种量15%，发酵培养基组成为葡萄糖2%、蛋白腺0.8%、黄 豆饼粉2.0 %、憐酸二氨钟0.3 %、屯水硫酸儀0.2 %、硫酸锋0.3 %、豆油0.03% ;调节抑值 6.0;通风比为1:0.4vvm，罐压0.04Mpa，在26 °C下发酵培养4天后，放出4化的发酵液，补入 4化灭菌后的发酵培养基，继续发酵1.5天;如此不断放料、补料，反复3次，发酵结束可得发 酵液23化，发酵周期为8.5天。
[0037] 2)微滤过滤：分别将四次发酵后的乌灵参发酵液40U40U40L和11化通过微滤过 滤，分别得到乌灵参湿菌丝体2.4kg、2.38kg、2.3化g、6.58kg(含水量75%左右），微滤透析 液37.6Kg、37.62Kg、37.65Kg和 106.42Kg，透析液的透光率为83-87 %，COD为30-50mg/L。微 滤过滤所用的膜材料是孔径为50nm的陶瓷膜，具体工艺条件是:操作溫度为50~60°C，进压 为S.Obar，出压为1 .Obar，压力差为S.Obar。
[0038] 3)低溫干燥:将步骤2得到的2.4kg、2.38kg、2.3化g、6.58kg乌灵参湿菌丝体进入 真空烘箱进行烘干，得到0.618kg、0.613kg、0.60化g和1.69化g水分含量3 %左右的乌灵参 菌丝体，该菌丝体腺巧为0.10-0.14%，多糖含量8-10%。依据￥53-321(2-39)-2001(2)标准 方法检验。具体干燥工艺条件是:干燥溫度65 °C，真空度为-0.085Mpa。
[0039] 传统生产工艺与本发明实施例2工艺产品产量、质量对比表
[0040]
[0042]从上述表格可W看出采用传统工艺10天发酵2个批次，可获得菌丝体2.96kg;而采 用本发明工艺总发酵周期为8.5天，可获得4个批次的菌丝体3.533kg，发酵周期为传统工艺 的85%，而获得菌丝体产量是传统工艺的119.4%，并且菌丝体产品质量要高于传统工艺生 产。因此采用本发明工艺既可缩短发酵周期，提高产量和质量，降低生产成本。
【主权项】
1. 一种快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征是该方法包括下述步骤： 1) 乌灵参半连续发酵液制备:将乌灵参种子液接种到灭菌后的发酵培养基进行深层液 态发酵得到乌灵参发酵培养液，接种量为体积含量的10~20%，通风比为1:0.1_1 .Ovvm，罐 压0.02~0.05Mpa，在20~30 °C下发酵培养2-7天后，放出培养器容积的10-50 %的发酵液， 补入等同体积的灭菌后的发酵培养基，继续发酵1-3天;如此不断放料、补料，每次补料继续 发酵1-3天，反复多次，得到乌灵参发酵液； 2) 乌灵参发酵液陶瓷膜过滤:将步骤1)中所得的乌灵参发酵液通过微滤膜得到发酵液 的微滤透析液和菌丝体，收集得到菌丝体； 3) 低温真空烘干:将步骤2)中所得的菌丝体在真空度为-0.065~-0.095Mpa，70~85°C 条件下进行干燥。2. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征是步骤1) 中所述的通风比为l:〇.5vvm，罐压0.03~0.05Mpa，在26~28°C下发酵培养4天后，放出培养 器容积的10-50 %的发酵液。3. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征是所述的 乌灵参种子液是通过以下方法制备得到的：乌灵参种子培养基组成为葡萄糖1-3%、蛋白胨 0.1-1 %、黄豆饼粉0.5-2 %、磷酸二氢钾0.1-0.5 %、七水硫酸镁0.1-0.5 %、硫酸锌0 . ΙΟ. 5%、豆油 0.01-0.05% ; 调节 pH 值 5.0-6. 5; 培养条件为：通风比为 1:0.1-1. Ovvm，罐压 0.02~0.05Mpa，培养温度20~30°C，培养周期2-6天。4. 根据权利要求3所述的快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征是所述的 乌灵参种子液是通过以下方法制备得到的：乌灵参种子培养基组成为葡萄糖2%、蛋白胨 0.5-0.6 %、黄豆饼粉1.5-1.8 %、磷酸二氢钾0.3 %、七水硫酸镁0.2-0.3 %、硫酸锌0.25 %、 豆油0.02% ;调节pH值5.5;培养条件为:通风比为1:0.5vvm，罐压0.03Mpa，培养温度26~28 °C，培养周期4天。5. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征是所述的 乌灵参发酵培养基组成为葡萄糖1-3%、蛋白胨0.1-1%、黄豆饼粉0.5-2%、磷酸二氢钾 0.1-0.5 %、七水硫酸镁 0.1-0.5 %、硫酸锌 0.1-0.5 %、豆油 0.01-0.05 % ;调节 pH 值 5.0-6.5〇6. 根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征该方法所 述的微滤膜为陶瓷膜或有机膜，其孔径在〇. 05~0.5μπι，操作温度为50~60°C，工作压力:进 压为2~4bar，出压为0~5bar。7. 根据权利要求6所述的快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，其特征该方法所 述的微滤膜为陶瓷膜或有机膜，其孔径在50mn，操作温度为50~60°C，工作压力：进压为 3bar，出压为lbar。
【专利摘要】本发明公开了一种快速深层液态发酵生产乌灵参菌粉的方法，该方法是将乌灵参菌种采用半连续发酵工艺快速获取富含大量的菌丝体的发酵液，然后将发酵液通过微滤膜处理分离得到乌灵参的菌丝体。本发明改变了传统乌灵参间歇性的分批发酵工艺，并且菌丝体的分离采用高效的陶瓷膜微滤替代离心机分离方式。半连续发酵工艺克服了传统分批发酵工艺的工艺环节多，中间间隙时间长，设备效率低等缺点；而采用高效的陶瓷膜过滤发酵液，能够减少进入滤液的菌丝体，既能提高菌丝体的收率，降低滤液的COD，降低污水处理量，又不破坏细胞本身，保证胞内有效成分的全部回收。与传统的工艺相比，本发明具有显着的经济效益、社会效益和环保效益。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/645, C12N1/02
【公开号】CN105586277
【申请号】CN201610148407
【发明人】王文风, 徐国华, 徐玲, 杨亚威, 张芙蓉, 孙妮娜
【申请人】江苏神华药业有限公司
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2016年3月15日