(直径为9cm)，备用。
[0049] 称取对照培养基17. 67g，置于三角烧瓶中，加蒸馏水400mL，加温溶解后，经 121°C 20min灭菌，冷却至45~50°C，倾注平皿，每只平皿20mL (直径为9cm)，备用。
[0050] B稀释液配制：
[0051] 幽门螺杆菌快速生长添加剂10ml，置于三角烧瓶中，加蒸馏水90mL，加蒸馏水 450mL〇
[0052] 菌株稀释培养：
[0053] 取已复苏的4株菌种，分别接种在对照培养基上，37°C培养24h。
[0054] 进行如下操作：
[0055] 取无菌试管7支，分别标记0~6。其中标记为0的试管中加入已灭菌的稀释液 lmL。用接种环挑取单个菌落（直径约2mm菌落2/3个），接种于试管0中，混合均匀，使菌 液浓度约为l〇6cfu/ml。随后在标记1~6的试管中分别用5mL移液管加入稀释液4. 5mL。 取试管1中菌悬液0. 5mL，置于试管2稀释液中，丢弃移夜管，另取一支lmL移液管，置于试 管1中吹打均匀（或用混匀器振荡均匀），稀释度为10-1，并吸取0. 5mL菌悬液置于试管2 稀释液中，丢弃移液管......重复上述操作进行梯度稀释，使试管6中菌悬液浓度为10-6。
[0056] 取幽门螺杆菌分离培养专用2号培养基和对照培养基平皿各三只，每只平皿中各 加入10-4的稀释度的菌悬液0. lmL，用L棒涂布均匀（直至菌悬液推干）。
[0057] 将平板置于37°C环境中培养24h，计数，测量菌落直径。
[0058] ⑶结果
[0059] 菌落计数；计数每只平板上的菌落数。
[0060] 菌落直径测量：用游标卡尺测量单个菌落的直径。
[0061] 每次鉴定采用三株指示菌。测量三株指示菌在被检定培养基和对照培养基上的平 均菌落直径，生长率。
[0062] (4)分值计算：
[0063] A样品保存液培养基质控参数：
[0064] a、金黄色葡萄球菌：μ = 1. 94 〇 = 0. 38 τι = 98. 39 δ p = 5. 68
[0065] b、大肠埃希菌：μ = 2· 97 σ = 0. 33 η = 99. 63 δ ρ = 5. 29
[0066] c、枯草杆菌黑色变种芽胞：μ = 2· 04 σ = 0. 37 η = 99. 88 δ ρ = 5. 71
[0067] d、铜绿假单胞菌：μ = 3· 23 σ = 0. 29 π = 100. 48 δ ρ = 5. 83
[0068] Β、计算：将测定的平均菌落直径，生长率和质控参数代入分值计算公式，
[0069] 其中：
[0070]
[0071] (5)计算：
[0072] Α被检定培养基上菌落平均数：
[0073]
[0074] B对照培养基上的菌落平均数：
[0075]
[0076] C被检定堉乔盎的指不囷粒出卒奶：
[0077]
[0078] D被检定培养基的指示菌的菌落平均直径(叉）：
[0079]
[0080] E对照培养基上指示菌的菌落平均直径(ψ):
[0081]
[0082] F分值计算：
[0083]
[0084] (6)实测结果
[0085] A金黄色葡萄球菌：
[0086] 被鉴定培养基：平均菌落直径=2. 01mm :检出率=99. 05%
[0087] 对照培养基：平均菌落直径=1. 97mm :
[0088] B大肠埃希菌：
[0089] 被鉴定培养基：平均菌落直径=3. 03mm :检出率=99. 89%
[0090] 对照培养基：平均菌落直径=2. 99mm :
[0091] C枯草杆菌黑色变种芽胞：
[0092] 被鉴定培养基：平均菌落直径=2. 03mm :检出率=99. 97%
[0093] 对照培养基：平均菌落直径=2. 02mm :
[0094] D铜绿假单胞菌：
[0095] 被鉴定培养基：平均菌落直径=3. 33mm :检出率=99. 99%
[0096] 对照培养基：平均菌落直径=3. 34mm :
[0097] (7)计算
[0098] A金黄色葡萄球菌：
[0106] (8)、结论：[0107] 用四株指示菌对所述培养基进行鉴定，结果表明该培养基质量合格。
[0099]
[0100]
[0101]
[0102]
[0103]
[0104]
[0105]
【主权项】
1. 一种特定的针对携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运送培养基，其特征为， 由以下重量份数的原料配制而成：Na 2HP04. 12H20(分析纯）27~32份、NaH2P04. H20(分析 纯）2~4份、蛋白胨8~12份、胰蛋白胨8~12份、葡萄糖0.5~1.5份、氯化钠6~8 份、亚硫酸钠0. 05~0. 15份、其余为去离子水，共计1000份，无水碳酸氢钠适量调节PH至 7. 4~7. 6,高温高压后加入万古霉素10%。份、两性霉素5%。份，低温保存备用。2. 根据权利要求1所述的携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运送培养基，其 优选各原料重量配比为：Na2HP0 4. 12H20(分析纯）29. 04g、NaH2P04. H20(分析纯）2. 62g、蛋白 胨l〇g、胰蛋白胨l〇g、葡萄糖lg、氯化钠7g、亚硫酸钠0. lg，其余为去离子水，共计1000ml, 无水碳酸氢钠少量用于调节PH至7. 4~7. 6,高温高压后加入万古霉素10mg、两性霉素 5mg，低温保存备用。3. 根据权利要求1或2所述的携带幽门螺杆菌的样本组织块的专用保存、运送培养基， 其特征为：所述培养基可加工成粉末或配置成液体培养基。
【专利摘要】本发明涉及携带微生物样本的保存运送技术，特别公开了一种携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运输培养基。该组织的保存、运送培养基由Na2HPO4.12H2O(分析纯)、NaH2PO4.H2O(分析纯)、蛋白胨、胰蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、亚硫酸钠、蒸馏水、无水碳酸氢钠、万古霉素、两性霉素按一定要求配比，添加去离子水混合配制而成。本发明既能杀灭和抑制在采集病灶组织时受到的其它微生物的污染，还能有效保持病变组织内幽门螺杆菌的活性，便于对幽门螺杆菌的分离培养，使检测结果更加可靠。
【IPC分类】C12R1/01, C12N1/04
【公开号】CN105602849
【申请号】CN201410452903
【发明人】杨宁敏
【申请人】杭州致远医学检验所有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2014年9月5日