一种草乌甲素的制备方法
【专利摘要】本发明涉及天然药物制备领域，具体涉及一种草乌甲素的制备方法；包括提取、萃取分离、柱层析分离纯化和结晶纯化四个步骤；本发明提供的草乌甲素的制备方法，通过用氧化铝柱层析来替代硅胶柱层析，节约了生产成本；用二元系统的石油醚?二乙胺作为洗脱剂，便于回收再利用，减少环境污染。
【专利说明】
一种草乌甲素的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及天然药物制备领域，具体涉及一种草乌甲素的制备方法。
【背景技术】
[0002] 毛茛科乌头属植物草乌及附子是我国的传统中药材，常用于治疗风湿和类风湿性 关节炎及坐骨神经痛等急症。其水煎液曾被用于缓解晚期肿瘤病人的疼痛。而草乌甲素是 其主要的活性成分之一，具有中枢镇痛和外周镇痛的双重药理作用，且镇痛时间长、无成瘾 性的特点。其副作用小，对各重要器官无明显损伤、无致畸作用，目前临床主要用于带状疱 疹及癌症晚期疼痛、风湿及类风湿关节炎、肩周炎、良性关节痛等急慢性疼痛疾患的治疗， 效果显著。
[0003] 草乌甲素分子式C35H4901QN，分子量643.77，为无色棱状晶体或白色粉末，易溶于乙 醚、三氯甲烷、乙醇中。研究结果表明其在水中溶解度小（166.78yg/mL)且不稳定，在室温下 易发生降解，而其溶解度及稳定性随pH值的降低而增加，制备困难。
[0004] 中国发明专利授权公告号CN 101555227 B公开了一种用酸醇提取法制备高纯度 草乌甲素的方法，该方法在纯化步骤中采用的层析材料为硅胶(200-300目），用量较大，且 成本较高;洗脱剂为三元系统的石油醚/环己烷-丙酮-二乙胺，溶剂回收后极性发生改变， 不容易回收再利用，成本高且方法步骤复杂。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术的不足，本发明提供了一种草乌甲素的制备方法，通过用氧化铝柱 层析来替代硅胶柱层析，节约了生产成本；用二元系统的石油醚-二乙胺作为洗脱剂，便于 回收再利用，减少环境污染。
[0006] 为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
[0007] -种草乌甲素的制备方法，包括如下步骤：
[0008] S1、选料:选取干燥的滇西乌头块根，粉碎至50-100目，备用；
[0009] S2、提取:将步骤S1得到的乌头块根用95 %的乙醇浸润16-20h，再用8-10倍量的乙 醇分3-5次对其进行提取，合并渗滤液，浓缩至膏状，得浸膏；
[0010] S3、萃取分离：用1.5%的盐酸溶解步骤S1所得的浸膏，过滤，得酸液，用25%浓氨 水将其pH调至10,然后加入1-2体积倍液的乙酸乙酯，振动萃取30-45min，静置分离，取上层 清液，重复萃取3-4次，合并萃取液，减压回收至膏状，得粗总碱；
[0011] S4、柱层析分离纯化:将步骤S2所得的粗总碱用氯仿溶解，并吸附于1-2倍量的硅 胶上进行拌样，自然风干后，进行氧化铝柱层析，用8-15:1的石油醚-二乙胺进行梯度洗脱， 控制流速为8-12ml/min，收集洗脱液，以纯草乌甲素为对照，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并 主要含有草乌甲素的流份，回收全部溶剂，得草乌甲素粗品；
[0012] S5、结晶纯化:将步骤S3所得的草乌甲素粗品用5-8体积倍数的丙酮溶解，真空浓 缩至1/4体积，再进行结晶和重结晶，至晶体颜色成均一的白色，得草乌甲素纯品。
[0013]进一步的，所述步骤S3的柱层析中氧化铝的用量为粗总碱量的5-8倍。
[0014]进一步的，所述柱层析中氧化铝的粒径为200-300目。
[0015]本发明的有益效果在于：
[0016] 1、本发明用氧化铝柱层析来替代硅胶柱层析，氧化铝经处理后可重复利用，平均 生产每公斤产品可节约生产成本250-400元，提高了生产效益；
[0017] 2、本发明用二元系统的石油醚-二乙胺作为洗脱剂，便于回收再利用，有助于减少 环境污染，且改善了生产操作人员的工作环境；
[0018] 3、用本发明提供的制备方法得到的草乌甲素纯度高，产品质量好。
【附图说明】
[0019] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员来 讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020] 图1为实施例1提供的制备方法所得到的草乌甲酸的HPLC检测结果图；
[0021] 图2为实施例2提供的制备方法所得到的草乌甲酸的HPLC检测结果图；
[0022] 图3为实施例3提供的制备方法所得到的草乌甲酸的HPLC检测结果图。
【具体实施方式】
[0023]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施 例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域 普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护 的范围。
[0024] 实施例1:
[0025] S1、选料:选取干燥的滇西乌头块根，粉碎至50-100目，备用；
[0026] S2、提取:将步骤S1得到的乌头块根用95 %的乙醇浸润18h，再用8倍量的乙醇分5 次对其进行提取，合并渗滤液，浓缩至膏状，得浸膏；
[0027] S3、萃取分离：用1.5%的盐酸溶解步骤S1所得的浸膏，过滤，得酸液，用25%浓氨 水将其pH调至10,然后加入1体积倍液的乙酸乙酯，振动萃取30-45min，静置分离，取上层清 液，重复萃取3次，合并萃取液，减压回收至膏状，得粗总碱；
[0028] S4、柱层析分离纯化:将步骤S2所得的粗总碱用氯仿溶解，并吸附于2倍量的硅胶 上进行拌样，自然风干后，用6体积倍量的粒径为250目的氧化铝作为填充剂进行柱层析，用 12:1的石油醚-二乙胺进行梯度洗脱，控制流速为8-12ml/min，收集洗脱液，以纯草乌甲素 为对照，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主要含有草乌甲素的流份，回收全部溶剂，得草乌甲 素粗品35.6g;
[0029] S5、结晶纯化:将步骤S3所得的草乌甲素粗品用175ml的丙酮溶解，真空浓缩至1/4 体积，再进行结晶和重结晶，至晶体颜色成均一的白色，得草乌甲素纯品24.5g。
[0030] 实施例2:
[0031] S1、选料:选取干燥的滇西乌头块根，粉碎至50-100目，备用；
[0032] S2、提取:将步骤S1得到的乌头块根用95 %的乙醇浸润16h，再用10倍量的乙醇分3 次对其进行提取，合并渗滤液，浓缩至膏状，得浸膏；
[0033] S3、萃取分离：用1.5%的盐酸溶解步骤S1所得的浸膏，过滤，得酸液，用25%浓氨 水将其pH调至10,然后加入2体积倍液的乙酸乙酯，振动萃取30-45min，静置分离，取上层清 液，重复萃取4次，合并萃取液，减压回收至膏状，得粗总碱；
[0034] S4、柱层析分离纯化:将步骤S2所得的粗总碱用氯仿溶解，并吸附于1倍量的硅胶 上进行拌样，自然风干后，用6体积倍量的粒径为200目的氧化铝作为填充剂进行柱层析，用 8:1的石油醚-二乙胺进行梯度洗脱，控制流速为8-12ml/min，收集洗脱液，以纯草乌甲素为 对照，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主要含有草乌甲素的流份，回收全部溶剂，得草乌甲素 粗品40. lg;
[0035] S5、结晶纯化:将步骤S3所得的草乌甲素粗品用280ml的丙酮溶解，真空浓缩至1/4 体积，再进行结晶和重结晶，至晶体颜色成均一的白色，得草乌甲素纯品23.5g。
[0036] 实施例3:
[0037] S1、选料:选取干燥的滇西乌头块根，粉碎至50-100目，备用；
[0038] S2、提取:将步骤S1得到的乌头块根用95 %的乙醇浸润820h，再用9倍量的乙醇分4 次对其进行提取，合并渗滤液，浓缩至膏状，得浸膏；
[0039] S3、萃取分离：用1.5%的盐酸溶解步骤S1所得的浸膏，过滤，得酸液，用25%浓氨 水将其pH调至10,然后加入2体积倍液的乙酸乙酯，振动萃取30-45min，静置分离，取上层清 液，重复萃取3次，合并萃取液，减压回收至膏状，得粗总碱；
[0040] S4、柱层析分离纯化:将步骤S2所得的粗总碱用氯仿溶解，并吸附于2倍量的硅胶 上进行拌样，自然风干后，用6体积倍量的粒径为300目的氧化铝作为填充剂进行柱层析，用 15:1的石油醚-二乙胺进行梯度洗脱，控制流速为8-12ml/min，收集洗脱液，以纯草乌甲素 为对照，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主要含有草乌甲素的流份，回收全部溶剂，得草乌甲 素粗品44.3g;
[0041] S5、结晶纯化:将步骤S3所得的草乌甲素粗品用350ml的丙酮溶解，真空浓缩至1/4 体积，再进行结晶和重结晶，至晶体颜色成均一的白色，得草乌甲素纯品25.2g。
[0042] 按2010年版《中国药典》对草乌甲素检测项目的要求，用高效液相色谱仪对实施例 1-3中草乌甲素的纯度进行测定，其中，检测波长:260nm;流动相：乙腈-0.2%三乙胺水溶液 (用磷酸调节pH值至3 · 1 ±0 · 1) (35:65);填充剂:RP-18。
[0043]纯度测定方法如下：
[0044]取实施例1-3提供的制备方法所得到的草乌甲酸约20mg，精密称定，置100ml量瓶 中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度， 摇匀，精密量取20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图；另取草乌甲素对照品约20mg，同法测定， 按外标法以峰面积计算，即得。
[0045] 测定结果如下表所示：
[0046]
[0047]
[0048] 本发明的有益效果在于：
[0049] 1、本发明用氧化铝柱层析来替代硅胶柱层析，氧化铝经处理后可重复利用，平均 生产每公斤产品可节约生产成本250-400元，提高了生产效益；
[0050] 2、本发明用二元系统的石油醚-二乙胺作为洗脱剂，便于回收再利用，有助于减少 环境污染，且改善了生产操作人员的工作环境；
[0051] 3、本发明提供的制备方法得到的草乌甲素纯度高，产品质量好。
[0052] 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例 对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施 例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者 替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
【主权项】
1. 一种草乌甲素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 51、 选料:选取干燥的滇西乌头块根，粉碎至50-100目，备用； 52、 提取:将步骤S1得到的乌头块根用95 %的乙醇浸润16-20h，再用8-10倍量的乙醇分 3-5次对其进行提取，合并渗滤液，浓缩至膏状，得浸膏； 53、 萃取分离：用1.5%的盐酸溶解步骤S1所得的浸膏，过滤，得酸液，用25%浓氨水将 其pH调至10,然后加入1-2体积倍液的乙酸乙酯，振动萃取30-45min，静置分离，取上层清 液，重复萃取3-4次，合并萃取液，减压回收至膏状，得粗总碱； 54、 柱层析分离纯化:将步骤S2所得的粗总碱用氯仿溶解，并吸附于1-2倍量的硅胶上 进行拌样，自然风干后，进行氧化铝柱层析，用8-15:1的石油醚-二乙胺进行梯度洗脱，控制 流速为8-12ml/min，收集洗脱液，以纯草乌甲素为对照，用薄层色谱TLC跟踪检测，合并主要 含有草乌甲素的流份，回收全部溶剂，得草乌甲素粗品； 55、 结晶纯化:将步骤S3所得的草乌甲素粗品用5-8体积倍数的丙酮溶解，真空浓缩至 1/4体积，再进行结晶和重结晶，至晶体颜色成均一的白色，得草乌甲素纯品。2. 如权利要求1所述的草乌甲素的制备方法，其特征在于，所述步骤S3的柱层析中氧化 错的用量为粗总碱量的5-8倍。3. 如权利要求2所述的草乌甲素的制备方法，其特征在于，所述柱层析中氧化铝的粒径 为200-300 目。
【文档编号】C07D221/22GK106008344SQ201610388293
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月3日
【发明人】左爱学, 张建英, 沈勇
【申请人】云南中医学院