专利名称：一种松乌甲素的制备方法
一种松乌甲素的制备方法技术领域 本发明涉及一种从植物中提取有效成分的方法，具体地说一种松乌 甲素的制备方法。
背景技术：
乌头属植物松潘乌头(Aconitum sungpanense Hand-Mazz)分布于 甘肃、四川、青海省等地。民间用于治疗跌打损伤、风湿、类风湿性关节炎等引起的疼痛。其 主要化学成分为多种生物碱，且以二萜生物碱为主。对于松潘乌头总碱的提取方法、分离总碱中的二萜化合物的方法及操作过程已有 报道(药学学报，松潘乌头二萜生物碱的研究，1988，23 ；兰州大学学报，松潘乌头中的二萜 生物碱研究，1991，04)；这些方法都采用经典的化学法，主要适用于研究领域，而在产业化 过程中就会遇到很多问题。申请号为2007100572049，授权公告号为CN100494181C的中国 发明专利公开的一种从松潘乌头中提取查斯曼宁的方法，也属于纯化学法。这些单纯的化 学方法提取步骤繁多，操作复杂，不能适用于大规模生产，对操作人员身体健康有害，存在 产品纯度不高，生产成本高，以及环境污染等诸多问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种松乌甲素的制备方法，该方 法完全能适用企业产业化生产，操作简便，工作效率高，总生物碱提取得率高，根据需要提 取不同纯度的松乌甲素，有利于操作人员身体健康。为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下一种松乌甲素的制备方法，其特 征在于，包括两大步骤第一，从松潘乌头提取总生物碱；1. 1取过60 80目标准筛的松潘乌头根粉300g，盛于5000 10000ml的细口瓶 中，加入重量百分比浓度8 15%氨水300ml ；1. 2用重量百分比浓度60 80%乙醇3000 6000ml作为提取溶剂，用超声波提 取器超声浸提两次；第一次浸提后，倾出浸提液，补加800 1500ml提取溶剂，进行第二次 浸提并倾出浸提液，合并两次所得浸提液；每次提取时间10 30min，提取温度50 75°C;1. 3将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度1 5%的盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至7 11，氯仿萃取2 4次，回收溶剂 后产生白色沉淀，静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱；第二，用高速逆流色谱(HSCCC)将总生物碱分离制备目标化合物松乌甲素；2.1准备两相溶剂系统将正己烷乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为1 2 2. 3 2 2. 3 1 1. 2配比混合，或将石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为17 19 22 24 17 20 13 16配比混合，充分摇勻后，在室温下静置8 12h分层为上、下相，分离两相，上 相作为固定相，下相作为流动相；2. 2准备松潘乌头总碱溶液取松潘乌头总碱150 180mg溶于40 80mL的下相中，超声助溶15 30min，移 入50mL lOOmL的容量瓶中，加下相至刻度，摇勻得松潘乌头总碱溶液；
2. 3高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备较高含量的生物碱以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈 的旋转速度为700 900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流 速泵入流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进松潘乌头总碱溶液，进样量为5mL，流 速lmL/min，检测波长282nm，主机温度20 30°C ；进样前检测上样液，即进样松潘乌头总碱溶液中松乌甲素的含量，逆流出峰后每 5mL收集一管并编号，用高效液相色谱(HPLC)检测每管中的松乌甲素含量；经第一次HSCCC 粗分，获得松乌甲素含量79. 1 83. 5%的生物碱；2. 4高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于30 40mL的下相中，超声助溶15 30min，移入50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，摇勻得生物碱溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈 的转速为700 900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵 入流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进生物碱溶液，进样量为5mL，流速lmL/min， 检测波长282nm，主机温度20 30°C ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱(HPLC)检测每管中的松乌甲 素含量；最高纯度的松乌甲素达到99. 65%。本发明中使用的高效液相色谱(HPLC)分析条件色谱柱Hypersil_ODS柱(4. 0X 250mmX 5 ii m，Agilent)流动相甲醇-0. 1 %磷酸缓冲液-三乙胺，pH 6. 2 (70 28 1)柱温25°C恒温流速10mL/min进样量20iiL检测波长282nm。高速逆流色谱(HSCCC)是近年来发展起来的一种液_液分配色谱新技术，其特点 是被分离物质在两相液体中进行分配，不需要任何固相载体，克服了固相载体对样品吸附、 损失、污染、峰形拖尾等缺点，具有混合物分离回收率高、快速、预处理简单、分离纯化与制 备同步完成的特点，因而越来越多地应用于天然产物的分离。该技术已在厚朴、大黄、丹参 等中药有效成分的分离纯化中得到应用。本发明采用HSCCC技术分离纯化、制备松潘乌头 总碱中的有效成分松乌甲素，为制备高纯度松乌甲素提供了一条高效实用的新途径。溶剂系统选择和优化是HSCCC分离制备目标化合物的基础。上下相分离时间是评 价溶剂系统优劣的重要指标之一，一般分离时间应在20 30s内。不同的溶剂系统具有不 同的上下相之比，并且，由于溶剂系统的黏度、极性和密度等性质的差异，会对相同的成分 产生不同的溶解能力、分配能力，以至于造成分配系数的差异，最终影响分离效果。本发明专利采用高速逆流色谱为TBE-300型高速逆流色谱、NS-1007Pump单活塞 往复恒流泵、8823A-UV紫外检测器(上海同田生化技术有限公司)。样品分离结果测试采 用高效液相色谱(ST I 5000，Agilent，美国)，Agilent N2000工作站，T-U1221紫外-可 见分光光度计(Agilent美国)。将HSCCC得到的5个峰做高效液相色谱分析，根据实验结果，上下相分配系数值调解在0. 5 1. 50之间为宜。表1列出初选溶剂系统的相分离时间及上下相的分配系数。由表1看出，实验序号4，石油醚乙酸乙酯甲醇水(19 24 17 16)、序 号5，石油醚乙酸乙酯甲醇水(17 22 20 13)及序号8，正己烷乙酸乙酯 甲醇水(1 2 2 1)三个溶剂系统符合溶剂系统要求的基本条件。故，使用步骤2. 1 提供的两相溶剂系统。表1松乌甲素在不同溶剂系统上下相分离时间和分配系数 高速逆流色谱制备松乌甲素时，螺旋柱(Ito)线圈的旋转速度对两相溶剂在流体 动力学平衡时的体积比影响很大，转速越高，固定相的保留值越大。如主机转速低于700r/ min,固定相保留值太低，达不到分离的要求；主机转速高于900r/min，固定相对于样品的 保留时间太长，保留值增大，也不利于分离制备。通过与传统溶剂浸提多次对比试验得出结论本发明方法松潘乌头总生物碱的提 取率高，其对比试验的结论表明，本发明方法松潘乌头总生物碱的提取率高于传统溶剂浸 提法20%，并且，本发明提取时间远远少于传统方法。下面是其中一次的对比方式与结论取两份300g 60 80目松潘乌头根粉，分别盛于5000 10000ml的锥形瓶中，分 别加入8 15%氨水300ml。一份用传统的热回流法溶剂浸提，另一份用超声波提取器超 声浸提，超声波提取器用⑶C-TQ型数控超声波清洗器，由山东济宁金百特工程机械有限公 司生产，频率:26/70kHz ；前者放置2h充分浸润，然后用重量百分比浓度80%乙醇4200ml作为浸提溶剂、 在温度80°C条件下热回流提取，12h内提取2次，每隔2h用力振摇，使分散均勻，当进行6h 后，倾出溶剂，重新补加1000ml溶剂，继续浸提6h。后者用70%乙醇4200ml作为提取溶剂，提取温度75°C，40min内超声浸提两次，第 一次25min，第二次15min，当第一次进行完后，倾出溶剂，再补加1200ml溶剂，进行第二次
超声提取。将两种方法所得溶液分别过滤，用RE-52A型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂生产)浓缩，回收溶剂，用3 %的盐酸萃取3次，合并萃取液，加氨水调pH值至9，氯仿萃取2 次，回收溶剂后产生白色沉淀，静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱。前者得松潘乌头总生物碱35. 14g，经HPLC分析，松乌甲素的含量为1. 28g，占总量 的 3. 64% ；后者松潘乌头总生物碱33. 71g，经HPLC分析，松乌甲素的含量为1. 56g，占总量的 4. 62%。常规的乌头总碱提取法提取时间长，提取率低；利用超声波法改变了传统提取工 艺的条件，加速有效成分进入溶剂，从而提高了提取效率，缩短了提取时间，节约了溶剂，并 且免去了高温对有效成分的影响。是一种快速、简便、高效的现代提取分离方法。采用高速逆流色谱(HSCCC)分离制备技术，被分离对象在两相液体中进行分配， 不需要任何固相载体，克服了固相载体对样品吸附、损失、污染、峰形拖尾等缺点，具有混合 物分离回收率高、快速、预处理简单、分离纯化与制备同步完成的特点，因而有利于松潘乌 头中松乌甲素的分离制备。本发明分离制备松乌甲素耗用时间少，溶剂可以循环使用，一次制备的松乌甲素 纯度达到99. 61 99. 74%，传统方法是无法比拟的。该法既适用于制备对照品，科研和小 规模实验，也适用于产业化生产，达到节能降耗，减排增效的清洁生产目的。
图1是实施例1第一次用HSCCC分离松潘乌头总碱的HPLC色谱图；图2实施例1第15管的HPLC色谱图，经过HPLC检测，证明第15管的HPLC色谱 图中3号峰与图3对应的3号峰一致，为松乌甲素；图3化学分离制得松乌甲素对照品的HPLC色谱图。
具体实施方式
实施例11、取过60 80目标准筛的松潘乌头根粉300g，盛于3500ml的细口瓶中，加入重 量百分比浓度15%氨水300ml ；2、用重量百分比浓度70%乙醇3500ml作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提 两次；第一次提取时间30min，提取温度75°C，浸提后，倾出浸提液，补加重量百分比浓度 70%乙醇1000ml，进行第二次浸提，第二次提取时间20min，提取温度55°C，浸提后，倾出浸 提液；合并两次所得浸提液；3、将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度的 盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至8，氯仿萃取3次，回收溶剂后产生白色沉淀， 静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱33. 98g ；4、将正己烷乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为1:2:2: 1配比混合，混合 前总体积为1. 0L ；充分摇勻后，充分摇勻后，在室温下静置8h分层为上、下相，分离两相，得 到上相508mL，下相为478mL，上相作为固定相，下相作为流动相；5、取松潘乌头总碱150mg溶于40mL的下相中，超声助溶15min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得松潘乌头总碱溶液；6、用高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备生物碱以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈 的旋转速度为800r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵入 流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进松潘乌头总碱溶液，进样量为5mL，流速lmL/min，检测波长282nm，主机温度29°C ；进样前检测上样液即进松潘乌头总碱溶液中松乌甲素的含量为6. 93mg，逆流出峰 后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱(HPLC)检测每管中的松乌甲素含量；经第一次 HSCCC粗分，获得松乌甲素含量83. 21%的生物碱。用高效液相色谱(HPLC)检测，分析结果 见图1。7、高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于35mL的下相中，超声助溶25min，移入 50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，摇勻得生物碱溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈 的转速为850r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵入流动 相；当流动相从主机出口流出时，开始进生物碱溶液，进样量为5mL，流速lmL/min，检测波 长282nm，主机温度25 °C ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱(HPLC)检测每管中的松乌甲 素含量；第二次用HSCCC分离松潘乌头总碱的结果见图2。用HPLC检测HSCCC制备的每管中松乌甲素的含量，面积归一法计算各管中的纯 度，其含量纯度及回收率的变化见表2，依据此变化可收集不同时段的色谱峰，从而得到不 同纯度的松乌甲素。经过HPLC检测后，证明对应的3号峰为松乌甲素。分析的HPLC色谱 图见图2。最高纯度的松乌甲素达到99. 65%。回收率为20. 13%。表2HSCCC松乌甲素馏分的纯度及其回收率 表中纯度=松乌甲素含量/干物质量回收率=松乌甲素含量/总碱中松乌甲素量实施例21、取过60 80目标准筛的松潘乌头根粉260g，盛于5000ml的细口瓶中，加入重 量百分比浓度8%氨水300ml ；2、用重量百分比浓度80%乙醇3000ml作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提两次；第一次提取时间20min，提取温度55°C，浸提后，倾出浸提液，补加重量百分比浓度 80%乙醇1000ml，进行第二次浸提，第二次提取时间15min，提取温度65°C，浸提后，倾出浸 提液；合并两次所得浸提液；3、将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度3%的 盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至11，氯仿萃取2次，回收溶剂后产生白色沉淀， 静置过滤，干燥恒重得松 潘乌头总生物碱32. 56g ；4、将石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为19 24 17 16配比混合， 充分摇勻后，在室温下静置12h分层为上、下相，分离两相，上相作为固定相，下相作为流动 相；5、取松潘乌头总碱170mg溶于45mL的下相中，超声助溶20min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得松潘乌头总碱溶液；6、用高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备生物碱设定螺旋柱线圈的旋转速度850r/min，主机温度25°C。进样前检测上样液总碱溶 液中松乌甲素的含量为6. 85mg，其它同实施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌甲素 含量；经第一次HSCCC粗分，获得松乌甲素含量81. 10%的生物碱；7、高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于50mL的下相中，超声助溶15min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得生物碱溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定转速为 900r/min，主机温度20°C ；其它同实施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌 甲素含量；第14管中干物质量为1. 74mg,松乌甲素含量1. 632mg,纯度93. 78%，回收率 23.87%。第15管中干物质量为1.95mg，松乌甲素含量1. 941mg，纯度99. 54%，回收率 28. 33% o实施例31、取过60 80目标准筛的松潘乌头根粉280g，盛于5000ml的细口瓶中，加入重 量百分比浓度12%氨水300ml ；2、用重量百分比浓度60%乙醇3500ml作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提 两次；第一次提取时间20min，提取温度65°C，浸提后，倾出浸提液，补加重量百分比浓度 60%乙醇1500ml，进行第二次浸提，第二次提取时间15min，提取温度75°C，浸提后，倾出浸 提液；合并两次所得浸提液；3、将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度4%的 盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至9，氯仿萃取3次，回收溶剂后产生白色沉淀， 静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱33. 13g ；4、将石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为18 24 20 16配比混合， 充分摇勻后，在室温下静置9h分层为上、下相，分离两相，上相作为固定相，下相作为流动 相；5将松潘乌头总碱180mg溶于50mL的下相中，超声助溶20min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至lOOmL刻度，摇勻得松潘乌头总碱溶液；
6、用高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备生物碱设定螺旋柱线圈的旋转速度750r/min，主机温度20°C。进样前检测上样液总碱溶 液中松乌甲素的含量为7. 85mg，其它同实施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌甲素 含量；经第一次HSCCC粗分，获得松乌甲素含量80. 01%的生物碱；7、高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于55mL的下相中，超声助溶20min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得生物碱溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定转速为 800r/min，主机温度25°C ；其它同实施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌甲素 含量；最高纯度99. 11%。实施例41、称取实施例3所得的松潘乌头总生物碱190mg ；2、将石油醚乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为17 22 20 13配比混合， 充分摇勻后，在室温下静置9h分层为上、下相，分离两相，上相作为固定相，下相作为流动 相；3、将松潘乌头总碱190mg溶于60mL的下相中，超声助溶20min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得松潘乌头总碱溶液；4、用高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备生物碱设定螺旋柱线圈的旋转速度900r/min，主机温度26°C。进样前检测上样液总碱溶 液中松乌甲素的含量为8. 29mg，其它同实施例1 ； 逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌甲素 含量；经第一次HSCCC粗分，获得松乌甲素含量79. 45%的生物碱；7、高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于55mL的下相中，超声助溶30min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得生物碱溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定转速为 800r/min，主机温度25°C ；其它同实施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌 甲素含量；第14管中干物质量为2. 535mg,松乌甲素含量2. 38mg,纯度93. 89%，回收率 28.71%。第15管中干物质量为2. 103mg，松乌甲素含量2.09mg，纯度99. 38%，回收率 25. 21%。实施例51、取过60 80目标准筛的松潘乌头根粉250g，盛于5000ml的细口瓶中，加入重 量百分比浓度8%氨水300ml ；2、用重量百分比浓度80%乙醇3000ml作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提 两次；第一次提取时间20min，提取温度55°C，浸提后，倾出浸提液，补加重量百分比浓度 80%乙醇1000ml，进行第二次浸提，第二次提取时间15min，提取温度65°C，浸提后，倾出浸
9提液；合并两次所得浸提液；3、将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度3%的 盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至11，氯仿萃取2次，回收溶剂后产生白色沉淀， 静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱31. 79g ；4、将正己烷乙酸乙酯甲醇水，按照体积比为1 2. 25 2. 1 1. 1配比混 合，充分摇勻后，在室温下静置15h分层为上、下相，分离两相，上相作为固定相，下相作为 流动相；5、取松潘乌头总碱180mg溶于55mL的下相中，超声助溶25min，移入100mL的容量 瓶中，加下相至lOOmL刻度，摇勻得松潘乌头总碱溶液；6、用高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备生物碱设定螺旋柱线圈的旋转速度850r/min，主机温度26°C。进样前检测上样液总碱溶 液中松乌甲素的含量为7. 10mg，其它同实施例1 ；逆流出峰后每5mL收集一管并编号，用高效液相色谱HPLC检测每管中的松乌甲素 含量；经第一次HSCCC粗分，获得松乌甲素含量81. 26%的生物碱；7、高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于50mL的下相中，超声助溶20min，移入 100mL的容量瓶中，加下相至100mL刻度，摇勻得生物碱溶液；以lOmL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定转速为 900r/min，主机温度20°C ；其它同实施例1。
权利要求
一种松乌甲素的制备方法，其特征在于，包括两大步骤第一，从松潘乌头提取总生物碱；1.1 取过60～80目标准筛的松潘乌头根粉300g，盛于5000～10000ml的细口瓶中，加入重量百分比浓度8～15％氨水300ml；1.2 用重量百分比浓度60～80％乙醇3000～6000ml作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提两次；第一次浸提后，倾出浸提液，补加800～1500ml提取溶剂，进行第二次浸提并倾出浸提液，合并两次所得浸提液；每次提取时间10～30min，提取温度50～75℃；1.3 将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度1～5％的盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至7～11，氯仿萃取2～4次，回收溶剂后产生白色沉淀，静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱；第二，用高速逆流色谱(HSCCC)将总生物碱分离制备目标化合物松乌甲素；2.1 准备两相溶剂系统将正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水，按照体积比为1∶2～2.3∶2～2.3∶1～1.2配比混合，或将石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水，按照体积比为17～19∶22～24∶17～20∶13～16配比混合，充分摇匀后，在室温下静置8～12h分层为上、下相，分离两相，上相作为固定相，下相作为流动相；2.2 准备松潘乌头总碱溶液取松潘乌头总碱150～180mg溶于40～80mL的下相中，超声助溶15～30min，移入50mL～100mL的容量瓶中，加下相至刻度，摇匀得松潘乌头总碱溶液；2.3 高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备较高含量的生物碱以10mL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为700～900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵入流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进松潘乌头总碱溶液，进样量为5mL，流速1mL/min，检测波长282nm，主机温度20～30℃；进样前检测松潘乌头总碱溶液中松乌甲素的含量，逆流出峰后每5mL收集—管并编号，用高效液相色谱检测每管中的松乌甲素含量；经第一次HSCCC粗分，获得松乌甲素含量79.1～83.5％的生物碱；2.4 高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于30～40mL的下相中，超声助溶15～30min，移入50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，摇匀得生物碱溶液；以10mL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的转速为700～900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵入流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进生物碱溶液，进样量为5mL，流速1mL/min，检测波长282nm，主机温度20～30℃；逆流出峰后每5mL收集—管并编号，用高效液相色谱检测每管中的松乌甲素含量；最高纯度的松乌甲素达到99.65％。
全文摘要
一种松乌甲素的制备方法，包括两大步骤第一，从松潘乌头提取总生物碱；取过60～80目标准筛的松潘乌头根粉300克，盛于细口瓶中，加入重量百分比浓度8～15％氨水300ml；用％乙醇作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提两次；浸提液过滤浓缩，盐酸萃取；氯仿萃取2～4次，回收溶剂，静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱；第二，用高速逆流色谱将总生物碱分离制备目标化合物松乌甲素；准备两相溶剂系统；取松潘乌头总碱溶于下相得松潘乌头总碱溶液，以10mL/min的流速泵入固定相；经两次分离得最高纯度99.65％的松乌甲素。本发明既适用于制备对照品，科研和小规模实验，也适用于产业化生产，达到节能降耗，减排增效的清洁生产目的。
文档编号C07D221/22GK101851202SQ20101016725
公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月7日 优先权日2010年5月7日
发明者马学毅 申请人:兰州大学