一种基于Ion Pronton测序平台的简易SNP试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种试剂盒，具体涉及一种基于1n Pronton测序平台的简易SNP试剂盒，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002]单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)是全基因组关联分析(Genome_wideassociat1nstudy，GWAS)、医学检测等研究的基础。SNP是一种最理想的分子标记，在人类疾病基因的鉴定及筛查、个性化医疗，动植物的分子设计育种等方面均有着至关重要的作用和应用前景。目前用于二代测序技术(Next-generat1n sequencing，NGS)的文库构建方法主要有WGR(Whole genome resequencing)、GBS(Genotyping by sequencing)以及MSG(MyL tiplexedshotgun genotyping)、RAD_seq (Restrict1n-site-associat1nDNA sequencing)等，但这些方法均有很大的局限性。
[0003]二代测序技术平台，主要有 Life Technologies 的 1n Proton 和 Illumina 的HiSeq，两个测序平台均具有测序通量高、准确度高和成本低等优点，研究人员指出，较之HiSeq, Proton的运行时间“明显缩短”，从上机测序到后期数据处理，整个过程仅需要11.5小时即可完成，而前者则需要6天。在整个高通量检测的流程中，测序文库的构建至关重要，文库质量对最终测序结果的准确性影响非常大，其中文库构建试剂盒中的冷冻的试剂反复冻融多次，会造成试剂活性降低甚至失效，是至关文库质量的一个关键性因素。
[0004]现有的1n Proton测序平台的文库构建方法整个流程繁琐耗时，且多个纯化步骤要求样品DNA的起始量非常高，另外文库构建过程用到的试剂繁多而导致其成本较高，所以探索一种操作简单、高效、低成本、稳定可靠的SNP检测方法已经成为不得不解决的问题。
【实用新型内容】
[0005]针对上述问题，本实用新型提供了一种基于1n Pronton测序平台的简易SNP试剂盒，其目的在于:解决现有技术对SNP表达检测通量不高，检测成本过高而且方法繁琐、试剂反复冻融等不足，提供一种简单、省时、低成本、高效率、稳定可靠的简易的SNP检测试剂盒。
[0006]本实用新型的技术解决方案:
[0007]—种基于1n Pronton测序平台的简易SNP试剂盒，包括:盒体、2个隔板和接头盒，所述2个隔板置于盒体内，将盒体分成三个隔间，所述接头盒放置在中间的隔间，所述接头盒内装有96个装有不同接头溶液的0.2ml的PCR管，所述2个海绵衬底放置于盒体两侧的隔间内，所述海绵衬底上打有8个孔，所述孔内放置有2个装有溶液I的试管、2个装有溶液II的试管、2个装有酶I的试管、2个装有酶I Buffer的试管、2个装有酶II的试管、2个装有酶II Buffer的试管、2个装有PCRMix的试管和2个装有扩增引物的试管，其中:溶液I含有20mMTris-HCl和0.1mMEDTA，溶液II为无核酸水，酶I为限制性内切酶MspI，酶I Buffer为10 XMspI反应Buffer，酶II为一种快速连接酶，酶II Buffer为快速连接酶反应Buffer，PCR Mix为PCR反应预混液，含有PCR反应Buffer和PCR反应酶，接头为含有barcode标识的接头引物对溶液，带有barcode标识的接头序列，扩展引物为扩增文库所用的上下游引物对溶液。
[0008]所述两个海绵衬底为红色或蓝色。
[0009]所述2个装有溶液I的试管，2个装有溶液II的试管、2个装有酶I的试管、2个装有酶I Buffer的试管、2个装有酶II的试管、2个装有酶II Buffer的试管、2个装有PCR Mix的试管、2个装有扩增引物的试管为红色或蓝色且带有螺旋盖的1.5ml的离心管。
[0010]本实用新型的有益效果:
[0011]本实用新型通过在本试剂盒中设置2个隔离板，使得一个空间变为三个空间，能有效防止试剂交叉等引起的污染，将除接头外的所有试剂分成两管存储，可以有效减少试剂反复冻融的风险，使得实验更准确，本试剂盒在用于SNP检测的文库构建时，简单、省时、低成本、高效率。
【附图说明】
[0012]图1:本实用新型结构原理示意图。
[0013]图2:本实用新型接头盒示意图。
[0014]其中:I盒体2隔板3海绵衬底4装有溶液I的试管5装有溶液II的试管6装有酶I的试管7装有酶I Buffer的试管8装有酶II的试管9装有酶II Buffer的试管10装有PCRMix的试管11装有扩增引物的试管12容器孔13接头盒14 PCR管。
【具体实施方式】
[0015]下面结合附图和实施例来对本实用新型做进一步描述:
[0016]如图1至2所示，一种基于1n Pronton测序平台的简易SNP试剂盒，包括:盒体1、2个隔板2和接头盒13，2个隔板2置于盒体I内，将盒体I分成三个隔间，所述接头盒13放置在中间的隔间，所述接头盒13内装有96个装有不同接头溶液的0.2ml的PCR管14，所述2个海绵衬底3放置于盒体I两侧的隔间内，所述海绵衬底3上打有8个容器孔12，所述容器孔12内放置有2个装有溶液I的试管4、2个装有溶液II的试管5、2个装有酶I的试管6、2个装有酶I Buffer的试管7、2个装有酶II的试管8、2个装有酶II Buffer的试管
9、2个装有PCRMix的试管10和2个装有扩增引物的试管11，具体试管的放置位置为，2个海绵衬底体3最上面一排的两个容器孔12内，分别放置I个装有溶液I的试管4、I个装有溶液II的试管5 ;海绵衬底体3的第二排的两个容器孔12内，分别放置I个装有酶I的试管6、I个装有酶I Buffer的试管7 ;海绵衬底体3第三排的两个容器孔12内，分别放置I个装有酶II的试管8、I个装有酶II Buffer的试管9 ;海绵衬底体3上最下面一排两个容器孔12内，分别放置I个装有PCRMix的试管10和I个装有扩展引物的试管11。
[0017]其中:溶液I含有20mMTris-HCl和0.1mMEDTA,溶液II为无核酸水，酶I为限制性内切酶MspI，酉每I Buffer为lOXMspI反应Buffer，酶II为一种快速连接酶，酶II Buffer为快速连接酶反应Buffer，PCR Mix为PCR反应预混液，含有PCR反应Buffer和PCR反应酶，接头为含有barcode标识的接头引物对溶液，带有barcode标识的接头序列，扩展引物为扩增文库所用的上下游引物对溶液。
[0018]综上，本实用新型达到预期目的。
【主权项】
1.一种基于1n Pronton测序平台的简易SNP试剂盒，其特征在于:包括盒体、2个隔板和接头盒，所述2个隔板置于盒体内，将盒体分成三个隔间，所述接头盒放置在中间的隔间，所述接头盒内装有96个装有不同接头溶液的0.2ml的PCR管，所述2个海绵衬底放置于盒体两侧的隔间内，所述海绵衬底上打有8个孔，所述孔内放置有2个装有溶液I的试管、2个装有溶液II的试管、2个装有酶I的试管、2个装有酶I Buffer的试管、2个装有酶II的试管、2个装有酶II Buffer的试管、2个装有PCRMix的试管和2个装有扩增引物的试管，其中:溶液I含有20mMTris-HCl和0.1mMEDTA，溶液II为无核酸水，酶I为限制性内切酶MsplH I Buffer为10 XMspI反应Buffer，酶II为一种快速连接酶，酶II Buffer为快速连接酶反应Buffer，PCR Mix为PCR反应预混液，含有PCR反应Buffer和PCR反应酶，接头为含有barcode标识的接头引物对溶液，带有barcode标识的接头序列，扩展引物为扩增文库所用的上下游引物对溶液。2.根据权利要求1所述的一种基于1nPronton测序平台的简易SNP试剂盒，其特征在于:所述2个海绵衬底为红色或蓝色。3.根据权利要求1所述的一种基于1nPronton测序平台的简易SNP试剂盒，其特征在于:所述2个装有溶液I的试管，2个装有溶液II的试管、2个装有酶I的试管、2个装有酶I Buffer的试管、2个装有酶II的试管、2个装有酶II Buffer的试管、2个装有PCR Mix的试管、2个装有扩增引物的试管为红色或蓝色且带有螺旋盖的1.5ml的离心管。
【专利摘要】本实用新型公开一种基于Ion？Pronton测序平台的简易SNP试剂盒，包括：盒体、2个隔板和接头盒，所述2个隔板置于盒体内，将盒体分成三个隔间，所述接头盒放置在中间的隔间，所述接头盒内装有96个装有不同接头溶液的0.2ml的PCR管，所述2个海绵衬底放置于盒体两侧的隔间内，所述海绵衬底上打有8个孔，所述孔内放置有2个装有溶液Ⅰ的试管、2个装有溶液Ⅱ的试管、2个装有酶Ⅰ的试管、2个装有酶ⅠBuffer的试管、2个装有酶Ⅱ的试管、2个装有酶ⅡBuffer的试管、2个装有PCRMix的试管和2个装有扩增引物的试管，本试剂盒在用于SNP检测的文库构建时，简单、省时、低成本、高效率。
【IPC分类】C12Q1/68, C12M1/00
【公开号】CN204824848
【申请号】CN201520498118
【发明人】赵晓芳
【申请人】江苏苏博生物医学科技有限公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年7月10日