干扰，因而测定的特异性要好于传统的TaqMan探针。因此，TaqMan MGB探针更适合用于 鉴定点突变，提高检测性能，涉及到的引物和探针均可特异地与ERCCl的第118密码子OT多 态性位点进行杂交。
【附图说明】
[0033]图1为本实用新型的ERCCl基因检测试剂盒结构示意图；
[0034] 图2为本实用新型的杂合子样本检测结果图；
[0035] 图3为本实用新型的野生型纯合子样本检测结果图；
[0036] 图4为实用新型突变体纯合子样本检测结果图。
【具体实施方式】
[0037] 为了能够更清楚地描述本实用新型的技术内容，下面结合具体实施例来进行进一 步的描述。
[0038]本实用新型所述的ERCCl基因多态性检测的检测试剂盒组成如下：
[0040] 本实用新型所述的ERCCl基因第118密码子OT位点多态性检测的检测方法如下：
[0041] 1试剂准备：
[0042] 1.1从试剂盒中取出PCR反应液，室温解冻，完全融化后，轻轻振荡混匀，并作短暂 离心备用。
[0043] 1 · 2每个反应管分装45yL PCR反应液。
[0044] 2.样本处理：
[0045] 2.1将含11111样本的离心管12000印111离心5分钟，弃上清。
[0046] 2.2沉淀中加入ImL生理盐水（用户自备），旋涡振荡器上振荡分散沉淀，12000rpm 离心5分钟，弃上清。
[0047] 2.3重复步骤2.2直至上清为无色。
[0048] 2.4往沉淀中加入已振荡混匀的DNA提取液50yL，旋涡振荡器上振荡打散沉淀，99 °c干浴或者水浴10分钟。
[0049] 2.5 12000rpm离心5分钟，上清液用于PCR反应。（吸取时不要触动管子底部的沉淀 物)。
[0050] 提取好的DNA应及时用于检测，否则应-20°c保存，再次使用时，将提取好的DNA完 全融化后12000rpm离心5分钟，取上清液用于PCR反应。
[0051] 3.加样：
[0052]在准备好试剂的PCR反应管中分别加入阴性对照、待测样本DNA、阳性对照各5yL， 盖紧管盖后，瞬时低速离心。
[0053] 4 .PCR 扩增：
[0054] 4.1样品设置:在仪器软件的相应样本设置窗口内填写各样本的名称、类型。
[0055] 4.2荧光通道选择：每个样品选择FAM和VIC 2个通道。参比荧光（Passive Reference)设置为none 〇
[0056] 4.3反应条件设定反应条件设定:反应体积设定为50yL，UNG酶反应条件为37 °C加 热5分钟，预变性条件为95°C加热5分钟，变性条件为95°C，15秒，以及退火、延伸及检测荧光 条件为60°C，1分钟，共40个循环。反应体积设定为50yL。
[0057] 4.4保存文件，运行程序。
[0058] 5.结果分析
[0059] 优选ABI 7500荧光PCR仪扩增检测：将Baseline设为3-15(根据实际情况， Baseline Cycler可在一定范围内变化），焚光阈值(Threshold)设定原则以阈值线刚好超 过阴性对照品扩增曲线(无规则的噪音线）的最高点，且Ct值显示为Undet。使用仪器配套软 件自动分析结果。
[0060]质控标准
[0061 ] 1阴性对照:FAM通道和VIC通道无明显扩增曲线，且Ct显示为Undet。
[0062] 2阳性对照I: VIC通道有扩增曲线，且Ct〈36;FAM通道无明显S型扩增曲线，且Ct显 示为Undet。
[0063] 3阳性对照2:FAM通道有扩增曲线，且Ct〈36; VIC通道无明显S型扩增曲线，且Ct显 示为Undet。
[0064] 4阳性对照3:FAM、VIC通道有典型的扩增曲线，且Ct〈36。
[0065] 5上述四个条件必须同时满足，否则，本次试验无效。
[0066] 纯合子野生型阳性对照序列：
[0067] GGAGGAGGGAGGAGGTGCAAGAAGAGGTGGAGGAGGGCCCTGTGGTTATCAAGGGTCATCCCTATTGATGGCTTCTG CCCTTCGTCCCTCCCCAGAGGGGCAATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAACGTGCCCTGGGAATTTGGCGACGTAAT TCCCGACTATGTGCTGGGCCAGAGCACCTGTGCCCTGTTCCTCAGGTGAGCTCTGCGGCGCCACCCCAGACTTCAGG AAGGGC
[0068] 纯合子突变体阳性对照序列：
[0069] GGAGGAGGGAGGAGGTGCAAGAAGAGGTGGAGGAGGGCCCTGTGGTTATCAAGGGTCATCCCTATTGATGGCTTCTG CCCTTCGTCCCTCCCCAGAGGGGCAATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAATGTGCCCTGGGAATTTGGCGACGTAAT TCCCGACTATGTGCTGGGCCAGAGCACCTGTGCCCTGTTCCTCAGGTGAGCTCTGCGGCGCCACCCCAGACTTCAGG AAGGGC
[0070] PCR扩增所使用的引物序列： LOODj 探针序列
[0074] PCR反应液配制：
[0076] 本实用新型中对样本的检测结果如图2(杂合子）、图3(野生型纯合子）、图4(突变 体纯合子)所示。图中圆圈圈定部分为FAM通道检测曲线;方框圈定部分为VIC通道检测曲 线。
[0077]在此说明书中，本实用新型已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以 作出各种修改和变换而不背离本实用新型的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是 说明性的而非限制性的。
[0078]综上所述，本实用新型结构简单、使用方便、设计合理、检测过程不易受污染，该试 剂盒在ERCCl基因多态性扩增检测时具有敏感性钙、特异性强、耗时短、方便运输等优点。
【主权项】
1. 一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括:盒体（1)、 衬垫(2)，所述的衬垫(2)置于盒体（1)内，衬垫(2)上设有容器孔装有DNA提取试剂的可立冻 存管(3)，装有PCR反应液的可立冻存管(4)、装有阳性对照1的可立冻存管(5)、装有阳性对 照2的可立冻存管(6)、装有阳性对照3的可立冻存管(7)、装有阴性对照的可立冻存管(8)。2. 根据权利要求1所述的一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒，其特征在于，所述衬 垫(2)上的容器孔有6个，每个容器孔分别放置有DNA提取试剂的可立冻存管(3 )，装有PCR反 应液的可立冻存管（4 )、装有阳性对照1的可立冻存管（5 )、装有阳性对照2的可立冻存管 (6)、装有阳性对照3的可立冻存管(7)、装有阴性对照的可立冻存管(8)。3. 根据权利要求1所述的一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒，其特征在于，所述的 衬垫(2)上的容器孔分为两排排列。
【专利摘要】本实用新型公开了一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒,其包括盒体(1)、衬垫(2)，所述的衬垫(2)置于盒体(1)内，衬垫(2)上设有容器孔装有DNA提取试剂的可立冻存管(3)，装有PCR反应液的可立冻存管(4)、装有阳性对照1的可立冻存管(5)、装有阳性对照2的可立冻存管(6)、装有阳性对照3的可立冻存管(7)、装有阴性对照的可立冻存管(8)。该试剂盒可用于检测ERCC1基因第118密码子C>T突变多态性，所述检测的方法简便、检测效率高。
【IPC分类】C12Q1/68, C12M1/34
【公开号】CN205313556
【申请号】CN201620052270
【发明人】卿志荣, 郑帮
【申请人】上海睿玻生物科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月20日