专利名称：一株简单节杆菌及其培养方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及菌种及其培养方法与应用，具体涉及一株简单节杆菌及其培养方法与应用。
背景技术：
石油是关系国民经济命脉的战略性资源，经过经过一次、二次两次常规采油之后的总采收率一般只能占地下原油的30% 40%。三次采油(EOR)技术是一项能够利用物理、 化学和生物等技术提高原油采收率的重要油田开发技术。在过去数十年内，美国、加拿大和委内瑞拉等石油大国都把如何提高原油采收率作为研究工作的重点目标。随着社会经济持续快速增长，我国对油气需求量也不断增加。因此，运用三次采油技术来原油提高采收率， 是减缓我国多数油田产量递减速度、维持原油稳产的战略需要。简单节杆菌UriAro如cter si^hr)即是通过筛选得到的一株驱油用菌株，可以在油层内生长繁殖，通过代谢作用主要产生脂肪酶及海藻糖脂，起到剥离原油，改善原油物性，提高采收率的功效。
发明内容
本发明的目的是提供一株能改善原油物性、提高采收率的简单节杆菌及其培养方法与应用。本发明所采用的技术方案是 本发明所采用的技术方案是
一株简单节杆菌(JriAroAacier simpler) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288o一株简单节杆菌 UriAro^cier simpler ) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288 的培养方法，是按10%的接种比例将简单节杆菌(JriArohcter simpler) C狐11-15-1 CCTCC NO. M2011288接种至液体培养基中，在35°C的温度条件下恒温通气培养；
液体培养基的配方为每IOOml水中含，酵母提取物0. 5g，葡萄糖1. 5g，磷酸氢二钾 0. lg，磷酸二氢钾 0. lg，硫酸镁 0. 02g, ρΗ6· 8。培养时间为48-72小时； 溶解氧条件为5-^ig/L。所述的一株简单节杆MiArthrobacter simpler ) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288在低渗透性油田三次开发中提高采收率中的应用。所述的一株简单节杆MiArthrobacter simpler ) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288在制备提高原油采收率生物制剂中的应用。本发明具有以下优点
本发明提供的简单节杆菌CAWA 11-15-1，可以显著降低接触角，4 脱油效率可达40% 左右；该菌可以有效驱替出岩心内部饱和原油，使岩心驱替效率增加10%以上。此外，该菌培养方法简单易操作，生长繁殖迅速，具有扩大化生产的可行性。基于上述特点，本发明的
3简单节杆菌CAWA 11-15-1可用于油田的三次开发，增加产油量，提高原油采收率，并可借此开发出相应的清洁环保生物制剂，具有较高的科研、应用及市场价值。
图1为简单节杆菌CAWA 11-15-1的生长曲线。图2为简单节杆菌CAWA 11-15-1光学显微镜照片。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行详细的说明。本发明所涉及的简单节杆菌UriAroAacier simpler) CAffA 11_15_1，已与2011 年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO. M2011288o以下实施例用于说明本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂。以下实施例中所涉及的培养基为 所用培养基
X 富集用液体培养基=NaNO3 1. 5g，(NH4) 2S04 1. 5g，K2HPO4 lg，MgSO4 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g, FeSO4 · 7H20 0. Olg, CaCl2 0. 002g，蒸馏水 1000ml，原油 5g, pH6. 8。f分离培养基为富集用液体培养基中添加1琼脂。直血平板培养基LB固体培养基中添加5%新鲜羊血。实施例一简单节杆袁(Arthrobactersimpler ) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288的分离筛选与纯化
1、石油降解菌株的富集与分离将5g油泥样品加入IOOml培养基I.中，35°C、150r/
min摇床培养7d。待培养液混浊后，吸取5ml培养液重新转接入新鲜培养基工中，与上述培养条件相同连续转接富集培养3次。采用稀释平板法进行分离，将培养液系列稀释后，取 100 μ 1稀释液涂布于培养基f中，培养48h;待平板长出菌落后选择不同颜色及形态的单
菌落，分别回接于培养基I和玄中，在两种培养基中均能生长的即为石油降解微生物。2、表面活性剂产生菌的筛选由于表面活性剂具有降低表面张力的作用，可使红细胞破裂并释放血红素出现溶血圈，因此采用血平板法筛选。挑取活化好的石油降解菌株一环，点接于血平板上，35°C培养3d后若有溶血圈出现，证明该菌能产生表面活性剂。3、脂肪酶产生菌的筛选将分离培养基用灭菌打孔器制作成若干直径约0. 6cm的琼脂块，将上述菌株接种在琼脂块上培养，然后依次将菌体充分生长的琼脂块放在酶活测定板上二8°C培养1 3d，观察各菌落周围油脂水解圈，水解圈越大表示酶活越强，将酶活强的菌株保存在LB固体平板培养基中。4、纯化挑取单菌落，转移到培养基I中，35°C，120r/min振荡培养，至菌浓度达
到107-108CFU/ml，取100 μ 1涂布于LB固体培养基上，检测纯度，直至获得纯种菌株。实施例二简单节杆袁(Arthrobacter simpler ) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288的培养方法
(一)培养基的配方优化
1、碳源优化考察了简单节杆菌(^^力了0力抓(￡^>5/刚^^)0414 11-15-1 CCTCC NO. M2011288对葡萄糖、甘油、蔗糖、麦芽糖、酵母浸膏等几种碳源的利用情况，具体方法为 采取单因素分析试验，固定氮源成分为酵母提取物5g/L，改变碳源成分为葡萄糖、甘油、 蔗糖、麦芽糖、酵母浸膏等(均为15g/L)，接种简单节杆菌UriAro如cter simpIer^ CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288, 35°C, 120r/min 振荡培养 48h，测定 0D_，确定细菌生长情况，试验结果显示，葡萄糖为适宜的碳源。2、氮源优化考察了简单节杆菌(^^力了0力抓(￡^>5/刚^^)0414 11-15-1 CCTCC N0.M2011288对蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏、尿素、(NH4)2S04几种氮源的利用情况，具体方法为采取单因素分析试验，固定碳源成分为葡萄糖(15g/L)，改变氮源成分为蛋白胨、 胰蛋白胨、牛肉膏、尿素、(NH4) 2S04 (含量均为5g/L)，接种简单节杆菌Urthrobacter simpler)CAM 11-15-1 CCTCC NO. M201U88，!35°C，120r/min 振荡培养 48h，测定 0D_，确定细菌生长情况，试验结果显示，酵母提取物为适宜的氮源。3、发酵培养基组分的正交试验通过正交试验确定简单节杆菌MriAro如cter simpler) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288发酵培养基各组分的最佳添加量，被考察因子与水平数如下表1所示
表1发酵培养基组分察因子与水平数列表
权利要求
1.一株简单节杆菌(JriAro^cier simpler) H 11-15-1 CCTCC N0.M2011288。
2.一株简单节杆菌(JriAro^acier simpler XAM 11-15-1 CCTCC NO. M2011288 的培养方法，是按10%的接种比例将简单节杆菌Urthrobacter simplerXAM 11-15-1 CCTCC NO. M2011288接种至液体培养基中，在35°C的温度条件下恒温通气培养；液体培养基的配方为每IOOml水中含，酵母提取物0. 5g，葡萄糖1. 5g，磷酸氢二钾 0. lg，磷酸二氢钾 0. lg，硫酸镁 0. 02g, ρΗ6· 8。
3.根据权利要求2所述的一株简单节杆菌(JriArohctersimpler) CAffA 11-15-1 CCTCC NO. M2011288的培养方法，其特征在于培养时间为48-72小时；溶解氧条件为5-^ig/L。
4.权利要求1所述的一株简单节杆菌(JriAroAaciersimplerXAM 11-15-1 CCTCC NO. M2011288在低渗透性油田三次开发中提高采收率中的应用。
5.权利要求1所述的一株简单节杆菌(JriAroAaciersimplerXAM 11-15-1 CCTCC NO. M2011288在制备提高原油采收率生物制剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及一株简单节杆菌及其培养方法与应用。简单节杆菌是通过筛选得到的一株驱油用菌株，可以在油层内生长繁殖，通过代谢作用主要产生脂肪酶及海藻糖脂，起到剥离原油，改善原油物性，提高采收率的功效。本发明按10%的接种比例将简单节杆菌(Arthrobactersimpler)CAWA11-15-1 CCTCCNO.M2011288接种至液体培养基中，在35℃的温度条件下恒温通气培养；液体培养基的配方为每100ml水中含，酵母提取物0.5g，葡萄糖1.5g，磷酸氢二钾0.1g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.02g，pH6.8。本发明提供的简单节杆菌CAWA11-15-1，可以显著降低接触角，48h脱油效率可达40%左右；该菌可以有效驱替出岩心内部饱和原油，使岩心驱替效率增加10%以上。
文档编号C09K8/582GK102409018SQ20111041936
公开日2012年4月11日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者孙卫, 孙叶芳, 薛姝雯, 陈富林 申请人:西北大学, 西安瑞捷生物科技有限公司