一种施氏假单胞菌ky-02与应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种施氏假单胞菌KY-02，保藏号为CGMCC?No.8526，所述施氏假单胞菌KY-02能够在不影响厌氧消化反应体系稳定性的基础上，显著提高厌氧产沼的效率及污泥有机质分解率，与化学方法相比具有成本低、持续时间久、无二次污染等优点，培养使用方便，可为工业废水生物处理技术，尤其是厌氧消化技术的进一步推广和普及做出积极的贡献，在污水处理领域具有广泛的应用前景。
【专利说明】—种施氏假单胞菌KY-02与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其是一种施氏假单胞菌KY-02及其单克隆抗体与应用。
【背景技术】
[0002]环氧氯丙烷是一种重要的有机化工原料和精细化工产品，在环氧化合物中，其产量仅次于环氧乙烷和环氧丙烷。它是无色液体，有似氯仿气味，易挥发，不稳定，能与乙醇、乙醚、氯仿、三氯乙烯和四氯化碳等混溶，不溶于水，不能与石油烃混溶。它在工业生产中有广泛的用途，主要用于制备甘油、环氧树脂、氯醇橡胶、聚醚多元醇，是生产甘油及缩水甘油衍生物的重要原料，可用作有机溶剂(树脂、树胶、纤维素酯、纤维素醚等的溶剂)，还是杀鼠剂鼠甘伏的中间体。
[0003]然而，环氧氯丙烷为国家首批重点监管危险化学品之一:其蒸气对呼吸道有强烈刺激性，反复和长时间吸入能引起肺、肝和肾损害，高浓度吸入致中枢神经系统抑制可致死；其蒸气对眼有强烈刺激性，液体可致眼灼伤；皮肤直接接触液体可致灼伤；口服引起肝、肾损害，可致死；长期少量吸入可出现神经衰弱综合征和周围神经病变；小鼠皮下实验显示，最小中毒剂量720mg/kg时就可以导致肿瘤阳性。它在空气中的容许量为2ppm，其蒸气可与空气形成爆炸性混合物，遇明火、高温能引起分解爆炸和燃烧；若遇高热可发生剧烈分解，引起容器破裂或爆炸事故。
[0004]尽管环氧氯丙烷对人类和环境有着上述诸多危害，但随着工业生产的发展，还是有大量的环氧氯丙烷被排放到工业废水中。这不仅提高了处理负荷，增加了处理难度，同时还可能使现有的活性污泥系统中毒甚至崩溃。
[0005]普通微生物和活性污泥都很难实现环氧氯丙烷的有效降解。因此，目前针对环氧氯丙烷废水的处理方法多集中于Fenton试剂氧化处理法等化学方法。乐向辉于2008年报道了使用Fenton试剂氧化处理法对环氧氯丙烷人工废水的处理案例，确定了当初始pH值为3、添加亚铁离子和过氧化氢分别为1.60g/L和1.92g/L时，COD可降低89.44%。李小林于2009年报道了采用单因素和正交试验方法考察了反应温度、pH值、反应时间、FeS04和H202投加量等因素对去除率的影响，优化条件后去除率为60%左右。陈新德于2012年报道了针对某氯碱厂在环氧氯丙烷生产过程中环化塔塔底排出废水的化学法处理，优化条件后，CODCr去除率可达90.4%。
[0006]然而，化学方法并不能获得理想的去除效率，而且需要投加大量的药剂，成本较高，还容易造成二次污染。因此，筛选获得能够高效降解环氧氯丙烷的菌株，成为工业污水处理领域亟待解决的难题之一。
【发明内容】
[0007]本发明所要解决的技术问题在于提供一种施氏假单胞菌KY-02，具有极强的降解环氧氯丙烷能力。[0008]本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述施氏假单胞菌KY-02的应用。
[0009]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是:
[0010]一种施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri) KY-02，其保藏号为 CGMCC N0.8526(保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号、保藏日期:2013年12月9日、保藏编号:CGMCC N0.8526)。
[0011]优选的，上述施氏假单胞菌KY-02，分离自活性污泥，在筛选平板上表现为白色边缘整齐、湿润粘稠，革兰氏染色呈阴性；通过16SrDNA和Biolog微生物分类鉴定系统鉴定，确定为施氏假单胞菌，命名为施氏假单胞菌KY-02，其系统进化树如图1所示，16SrDNA序列分析结果为序列表中〈400>1所示序列。 [0012]优选的，上述施氏假单胞菌KY-02，所述核苷酸序列为细菌16S rDNA片段的V3可变区和V8-V9可变区。
[0013]优选的，上述施氏假单胞菌KY-02，具有极强的降解环氧氯丙烷能力。
[0014]上述施氏假单胞菌KY-02，在降解工业废水中环氧氯丙烷方面的应用。
[0015]优选的，上述施氏假单胞菌KY-02的应用，将所述施氏假单胞菌KY-02菌株接种至LB培养基中，30°C振荡培养至菌浓为0.D_~2.0，以1_5%的接种量接种于含环氧氯丙烷的废水中，20-30°C培养1-3天，维持溶氧在3.0ppm以上，实现对环氧氯丙烷的降解。
[0016]本发明的有益效果是:
[0017]本发明提供了施氏假单胞菌KY-02 (保藏号为CGMCC N0.8526)，能够在好氧条件下高效降解污水中的环氧氯丙烷，降低C0D，与化学方法相比具有成本低、去除效率高、无二次污染等优点，必将为工业废水生物处理技术做出积极的贡献，在污水处理领域有广泛的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1为本发明所述施氏假单胞菌KY-02的系统进化树，图中，Pseudomonasstutzeri为施氏假单胞菌。
[0019]保藏信息
[0020]分类名词:施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)
[0021]保藏单位名称:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0022]保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0023]保藏日期:2013年12月9日
[0024]保藏号:CGMCCN0.8526
【具体实施方式】
[0025]下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0026]下述实施例中不同的培养基及溶液配方如下:
[0027]1.筛选培养基:环氧氯丙烷 3g、NaN032g、KH2P040.5g、K2HP040.5g、MgS040.lg、CaCl20.lg、蒸馏水 lOOOmL, pH7.0。
[0028]2.LB 培养基:蒸馏水 lOOOmL，蛋白胨 10.0g，酵母粉 5.0g, NaC15.0g, pH7.0-7.2。
[0029]3.人工废水:自来水 lOOOmL，NaN030.5g，环氧氯丙烷 lg，KH2P040.05g，pH6.5-7.5。[0030]4.环氧氯丙烷化工废水:取自于天津市汉沽化工园区污水处理厂的待处理废水。
[0031]实施例1
[0032]施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri) KY-02的筛选和鉴定
[0033]实验材料来自天津市汉沽化工园区污水处理厂生物处理池的活性污泥。
[0034]取污泥稀释液0 .1ml，涂布于筛选培养基平板上，在30°C恒温箱中培养，挑取单菌落重复划线纯化2-3次，得到纯化菌株；经过16SrDNA和Biolog微生物分类鉴定系统鉴定，确定为施氏假单胞菌，系统进化树如图1所示，通过PCR扩增其16SrDNA基因，测序结果如下:
[0035]CGGGGGGCGGCTACACATGCAAGTCGAGCGGATGAAGGGAGCTTGCTCTCTGATTCAGCGGC GGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGATAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAA TACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGG TCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGAT GATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGG ACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCAC TTTAAGTTGGGAGGAAGGGCATTAACCTAATACGTTAGTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCA CCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGAATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC ATCCAAAACTGGCAAGCTAGAGTATGGCAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCG TAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGA AAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGCCG TTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCG CAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGA AGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTT CGGGAACTCTGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGC CGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACA CACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCG ATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATC AGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTT GCTCCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGGACGGTACCACGGAGATCTG
[0036]实施例2
[0037]实施例1所述施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri) KY-02降解环氧氯丙烷的实验
[0038]处理对象为筛选培养基，运行方式为摇瓶振荡培养。具体实施步骤如下:施氏假单胞菌KY-02菌种接种至LB培养基，30°C振荡培养至菌浓为0.D_~2.0，以1%接种量接种于液体筛选培养基中，30°C振荡培养1天，维持溶氧为3.0ppm ;离心取上清，按照《重铬酸盐法(GB11914-89)))测定C0D。结果显示，C0D去除率为95.6%。
[0039]实施例3
[0040]实施例1所述施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri) KY-02降解环氧氯丙烷的实验
[0041]处理对象为人工废水，运行方式为3L SBR系统内曝气培养。具体实施步骤如下:施氏假单胞菌KY-02菌种接种至LB培养基，30°C振荡培养至菌浓为0.D600~2.0，以5%接种量接种于SBR系统中，室温(20-25°C )下曝气运行2天，维持溶氧为3.0ppm ;系统停止曝气，沉淀取上清，按照《重铬酸盐法(GB11914-89)》测定COD。结果显示，COD去除率为90.4%。
[0042]实施例4
[0043]实施例1所述施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri) KY-02降解环氧氯丙烷的实验
[0044]处理对象为取自于天津市汉沽化工园区污水处理厂的待处理废水，其中C0D为213.6ppm，主要有机物为环氧氯丙烷。运行方式为3L SBR系统内曝气培养。具体实施步骤如下:施氏假单胞菌KY-02菌种接种至LB培养基，30°C振荡培养至菌浓为0.D_~2.0，以5%接种量接种于SBR系统中，室温(20-25°C )下曝气运行3天，维持溶氧为3.5ppm ;系统停止曝气，沉淀取上清，按照《重铬酸盐法(GB11914-89)》测定C0D。结果显示，COD去除率为92.3%。
[0045]上述参照实施例对该一种施氏假单胞菌KY-02与应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种施氏假单胞菌KY-02，其特征在于:其保藏号为CGMCC N0.8526。
2.根据权利要求1所述的施氏假单胞菌KY-02，其特征在于:分离自活性污泥，在筛选平板上表现为白色边缘整齐、湿润粘稠，革兰氏染色呈阴性；通过16SrDNA和Biolog微生物分类鉴定系统鉴定，确定为施氏假单胞菌，命名为施氏假单胞菌KY-02，16SrDNA序列分析结果为序列表中〈400>1所示序列。
3.根据权利要求1所述的施氏假单胞菌KY-02，其特征在于:具有极强的降解环氧氯丙烧能力。
4.权利要求1-3之一所述的施氏假单胞菌KY-02，其特征在于:在降解工业废水中环氧氯丙烷方面的应用。
5.根据权利要求4所述的施氏假单胞菌KY-02的应用，其特征在于:将所述施氏假单胞菌KY-02菌株接种至LB培养基中，30°C振荡培养至菌浓为0.D_ ~ 2.0，以1_5%的接种量接种于含环氧氯丙烷的废水中，20-30°C培养1-3天，维持溶氧在3.0ppm以上，实现对环氧氯丙烷的降解。`
【文档编号】C02F101/36GK103667161SQ201310746598
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月25日 优先权日:2013年12月25日
【发明者】李玉庆, 张建, 薛二军, 孙晓莹, 宋存江, 李强 申请人:天津凯英科技发展有限公司