1.一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,包括以下步骤:
①、土壤采集
采集加油站附近不同深度处的污染土壤混匀,即为样品,待其风干后粉碎、去杂、过20目筛后混匀,得到土壤粉末;
②、菌种筛选
取3g步骤①的土壤粉末平铺于分别以柴油和汽油为碳源的分离培养基上,将该分离培养基置于30-36℃培养箱内培养96h后,对应柴油降解菌落和汽油降解菌落;
③、菌种扩增
分别挑取步骤②中分离培养基上的柴油降解菌落和汽油降解菌落,将挑取的柴油降解菌落接种至以柴油为碳源的液体培养基中,同时将挑取的汽油降解菌落接种至以汽油为碳源的液体培养基中,再将该两种液体培养基置于摇床上,于30-36℃、150r/min培养7d,获得活菌数为1.5×109-2.0×109个/L的柴油降解菌种培养液和汽油降解菌种培养液;
④、菌种复配
将步骤③培养所得的柴油降解菌种培养液和汽油降解菌种培养液按1:1的重量比进行复配,得到复合菌种培养液;
⑤、菌种修复
采集加油站附近的污染土壤,将步骤④得到的复合菌种培养液投放至该污染土壤中,投放量为每1m3的土壤投放1L的菌种液,翻动土壤至菌种培养液分散均匀后堆成堆状,室温下保持土壤含水量为20-30%,定期搅拌通气。
2.根据权利要求1所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤②中,所述分离培养基的组分按重量份数计,包括牛肉膏0.5-1份、蛋白胨0.5-1份、NaCl 3-5份,琼脂20-25份,抗真菌剂0.01-0.03份、柴油或汽油1-2份、生物表面活性剂2-5份、蒸馏水1000份。
3.根据权利要求2所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤②中,所述抗真菌剂为放线菌酮与制霉素的混合物。
4.根据权利要求3所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤②中,所述放线菌酮与制霉素的重量比为1:1。
5.根据权利要求2所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤②中,所述生物表面活性剂为槐糖脂。
6.根据权利要求2所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤②中,所述分离培养基的制备方法为:按设定的重量份称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、生物表面活性剂、柴油、汽油和蒸馏水于锥形瓶中,搅拌至各组分均匀分散,121℃灭菌20min后,冷却至50-60℃加入抗真菌剂混匀,均匀分装至培养皿中,冷却至凝固即得。
7.根据权利要求1所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤③中,所述液体培养基的组分按重量份数计,包括蛋白胨1-3份、酵母浸膏3-5份、葡萄糖1-2份,柴油或汽油1-2份、生物表面活性剂2-5份、蒸馏水1000份。
8.根据权利要求7所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤③中,所述生物活性剂为槐糖脂。
9.根据权利要求7所述的一种石油烃污染土壤的微生物修复方法,其特征在于,步骤③中,所述液体培养基的制备方法为:按设定的重量份称取液体培养基的各组分于锥形瓶中,搅拌至各组分均匀分散,121℃灭菌20min,冷却后即得。